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Previous issue date: 2014-05-29 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The increase in microbial resistance to available antibiotics and the continuous decrease
observed in the number of the new antimicrobial agents approved by Food and Drug
Administration creates a constant search for new compounds. To do so, one of the strategies
to be followed consists in exploring understudied natural sources, as often organisms obtained
new ecosystems are associated with new chemical diversity. In this context are the
basidiomycetes, which have been reported as promising sources of antimicrobial and, despite
this potential and great biological diversity, the species found in the Amazon have been
insufficiently studied. The objective of this study was to evaluate the antimicrobial activity of
eight basidiomycetes isolated from Manaus and Boa Vista. The fungi were grown in two
liquid media (malt and GLP) and malt-agar medium, in the latter case were held in two
incubation conditions: absence and presence of light. The fungi were maintained at room
temperature in all treatments. The tests used the filtered liquid from the growth medium for
seven to 63 days, besides extracts with ethyl acetate from growing on solid media (ten days).
The pathogens tested were Escherichia coli CBAM 001, Staphylococcus aureus CBAM 324,
Candida albicans CFAM 1342, Aspergillus niger CFAM 161 and Penicillium sp. CFAM 059,
by agar diffusion method. The filtered with positive activity, were submitted to microdilution
test for identification of minimum inhibitory concentration. Molecular identification was
performed by amplification and sequencing of the rDNA fragment, with subsequent
comparison of the sequences obtained with those deposited in the National Center for
Biotechnology Information database. Of filtered tested, seven inhibited the growth of C.
albicans CFAM 1342, all of Oudemansiella canarii 1528 cultivation, as medium malt, as in
GLP. At medium malt, this basidiomycete produced antifungal compounds at seven and 49
days of cultivation, while in the medium GLP produced from the 21 days of cultivation, until
the 49th day. The minimum inhibitory concentration was found for the filtrate obtained after
28 days of GLP cultivation medium (2.5 mg/ml) and the filtrate obtained after 49 days malt
medium (5 mg/ml). The extracts obtained with ethyl acetate inhibited C. albicans CFAM
1342, Penicillium sp. CFAM 059, E. coli CBAM 001 and S. aureus CBAM 324. This method
was found more satisfactory results, as well as Oudemansiella canarii 1528, six other
basidiomycetes (Basidiomycete 347, Pleurotus sp. 474, Gloeophyllum sp. 1153, Trametes sp.
1232, Trametes sp. 1540 e Earliella scabrosa 1552) showed antimicrobial activity. Thus, the
results allow to observe the influence of culture conditions for the production of antimicrobial
compounds, as well as choice of solvents, further studies are needed to determine the
optimum conditions for production and extraction thereof. / O aumento da resistência microbiana aos antibióticos disponíveis e o decréscimo contínuo
observado no número de novos antimicrobianos aprovados pela Food and Drug
Administration gera uma constante busca por novos compostos. Para tanto, uma das
estratégias a ser seguida consiste na exploração de fontes naturais pouco estudadas, pois
frequentemente organismos obtidos de novos ecossistemas estão associados à nova
diversidade química. Neste contexto destacam-se os basidiomicetos, que vêm sendo relatados
como promissoras fontes de antimicrobianos e, apesar deste potencial e da grande diversidade
biológica, as espécies ocorrentes na Amazônia têm sido pouco estudadas. Assim, o objetivo
deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana de oito basidiomicetos isolados de
Manaus e Boa Vista. Os fungos foram cultivados em dois meios líquidos (malte e GLP) e em
meio ágar-malte, neste último caso foram mantidos em duas condições de incubação: ausência
e presença de luz. Em todos os tratamentos os fungos foram mantidos em temperatura
ambiente. Os testes utilizaram os filtrados provenientes do crescimento em meio líquido de
sete a 63 dias, além de extratos obtidos com acetato de etila a partir do cultivo em meio sólido
(dez dias). Os patógenos testados foram Escherichia coli CBAM 001, Staphylococcus aureus
CBAM 324, Candida albicans CFAM 1342, Aspergillus niger CFAM 161 e Penicillium sp.
CFAM 059, através do método de difusão em ágar. Os filtrados com atividade positiva foram
submetidos a teste de microdiluição para identificação da concentração inibitória mínima. Foi
realizada a identificação molecular através de amplificação e sequenciamento do fragmento
do rDNA, com posterior comparação das sequências obtidas com as depositadas no banco de
dados do National Center for Biotechnology Information. Dos filtrados testados, sete inibiram
o crescimento de C. albicans CFAM 1342, todos provenientes do cultivo de Oudemansiella
canarii 1528, tanto em meio malte, como em meio GLP. Em meio malte, este basidiomiceto
produziu compostos antifúngicos aos sete e 49 dias de cultivo, enquanto em meio GLP
produziu a partir dos 21 dias de cultivo, até o 49º dia. A concentração inibitória mínima foi
identificada para o filtrado obtido aos 28 dias de cultivo em meio GLP (2,5 mg/mL) e o
filtrado obtido aos 49 dias em meio malte (5 mg/mL). Os extratos obtidos com acetato de etila
além de inibir C. albicans CFAM 1342, inibiram Penicillium sp. CFAM 059, E. coli CBAM
001 e S. aureus CBAM 324. Esta metodologia apresentou resultados mais satisfatórios, pois
além de Oudemansiella canarii 1528, outros seis basidiomicetos (Basidiomycete 347,
Pleurotus sp. 474, Gloeophyllum sp. 1153, Trametes sp. 1232, Trametes sp. 1540 e Earliella
scabrosa 1552) apresentaram atividade antimicrobiana. Deste modo, os resultados obtidos
permitiram observar a influência das condições de cultivo para a produção de compostos
antimicrobianos, assim como a escolha de solventes, sendo necessários estudos posteriores
para determinar a melhor condição para a produção e extração destes compostos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/4285 |
| Date | 29 May 2014 |
| Creators | Oliveira, Karen Kelly Carvalho de |
| Contributors | Oliveira, Luiz Antonio de |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 32215883775770440, 600 |
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