Em eucariotos, a origem de replicação é reconhecida por um complexo ORC, a proteína Cdc6 e outras proteínas. Nos tripanossomas, encontramos somente uma proteína similar a Orc1 e Cdc6, que chamaremos de Orc1/Cdc6. Nesta tese serão descritos os estudos realizados sobre Orc1/Cdc6 do Trypanosoma cruzi e do Trypanosoma brucei. As proteínas recombinantes dos tripanossomas apresentam atividade de ATPase e são capazes de substituir Cdc6 em ensaio de complementação em leveduras. A indução do silenciamento do gene de Orc1/Cdc6 por RNAi resulta em células anucleadas. Orc1/Cdc6 é expressa durante todo o ciclo celular das formas replicativas, permanecendo associada à cromatina. No caso do T.cruzi, Orc1/Cdc6 é expressa não só nas formas replicativas, mas também nas formas não replicativas. Nestas últimas, a proteína expressa não interage com o DNA, este resultado sugere que a ausência desta interação deve contribuir para ausência da duplicação do DNA nas formas infectivas do T. cruzi. / In eukaryotes, the replication origin is recognized by a complex ORC, Cdc6 and other proteins. The trypanosomes contain only one protein, we named it Orc1/Cdc6. Here we show that the recombinant Orc1/Cdc6 from T.cruzi (TcOrc1/Cdc6) and from T.brucei (TbOrc1/Cdc6) present ATPase activity, replaced yeast Cdc6 in a phenotypic complementation assay. The induction of Orc1/Cdc6 silencing by RNA interference in T.brucei resulted in enucleated cells. Orc1/Cdc6 is expressed during the entire cell cycle and in all stages of the life cycle of trypanosomes, remaining associated with chromatin in all stages of the cell cycle. This association is different among the stages from T. cruzi life cycle. In the non replicative ones, Orc1/Cdc6 does not interact with DNA. The lack of pre-replication machinery-DNA interaction in T. cruzi non-replicative stages might contribute to the absence of DNA replication in these stages.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:teses.usp.br:tde-18102010-112445 |
| Date | 10 August 2010 |
| Creators | Patricia Diogo de Melo Godoy |
| Contributors | Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga, Hugo Aguirre Armelin, Adriana Silva Hemerly, Paulo Lee Ho, Lucile Maria Floeter Winter |
| Publisher | Universidade de São Paulo, Ciências (Biologia da Relação Patógeno-Hospedeiro), USP, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP, instname:Universidade de São Paulo, instacron:USP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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