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Previous issue date: 2017-02-21 / CAPES / Proteases estão entre as mais produzidas no mundo. Dentre elas a tripsina é a mais utilizada em diversas áreas da biotecnologia. A purificação de biomoléculas por partículas magnéticas baseia-se na interação dos ligantes, componentes químicos presentes na superfície das partículas, com a molécula alvo. Neste trabalho, foram preparados dois compósitos magnéticos: o primeiro a partir de azocaseína e óxido de ferro (mAzo) e o segundo, a partir de partículas de óxido de ferro revestidas com polianilina tratadas com azocaseína (mPANI-Azo). Os novos compósitos foram avaliados como matriz para a purificação de tripsina de extrato bruto de Tilapia (Oreochromis niloticus). Uma caracterização físico-química do compósito magnético (mAzo) foi também realizada para descrever as principais características do material sintetizado. Os resultados da purificação mostraram que as partículas mAzo e mPANI-Azo permitiram purificar o extrato bruto de peixe, sem nenhum pré tratamento, 61 vezes e 43 vezes, respectivamente. A eletroforese (SDS-PAGE) da alíquota purificada revelou uma banda a 24 kDa, valor compatível com tripsina obtida de vísceras de tilapia. As analises das técnicas de caracterização (MEV-EDX, DRX, FTIR e medidas de magnetização) evidenciaram o sucesso da síntese do compósito magnético (mAzo). Além disso, foi observado que as partículas mAzo são heterogêneas e apresentam rápida resposta magnética. Por fim, ao purificar a tripsina com precipitação, dialise e mAzo obteve-se um aumento da purificação de até 220 vezes. Concluímos que o compósito magnético mAzo mostrou ser uma matriz eficiente para a purificação de e o reuso do manteve a qualidade da purificação. Nesta pesquisa desenvolvemos uma técnica de purificação simples, eficaz e econômica que pode ser utilizada para a purificação de proteases utilizando as partículas mAzo como matriz. / Proteases are among the most produced in the world. Among them trypsin is the most used in several areas of biotechnology. The purification of biomolecules by magnetic particles is based on the interaction of the binders, chemical components present on the surface of the particles, with the target molecule. In this work, two magnetic composites were prepared: the first from azocasein and iron oxide (mAzo) and the second from iron oxide particles coated with azacasein-treated polyaniline (mPANI-Azo). The new composites were evaluated as a matrix for the purification of trypsin from Tilapia (Oreochromis niloticus) crude extract. A physical-chemical characterization of the magnetic composite (mAzo) was also performed to describe the main characteristics of the synthesized material. The results of the purification showed that the mAzo and mPANI-Azo particles allowed to purify the fish crude extract, without any pretreatment, 61 times and 43 times, respectively. Electrophoresis (SDS-PAGE) of the purified aliquot revealed a band at 24 kDa, trypsin compatible value obtained from tilapia viscera. The analysis of the characterization techniques (SEM-EDX, XRD, FTIR and measurements of magnetization) evidenced the success of the synthesis of the magnetic composite (mAzo). In addition, it was observed that the mAzo particles are heterogeneous and have a fast magnetic response. Finally, after precipitation, dialysis and mAzo treatment, a purification increase up to 220 times was obtained. We conclude that the magnetic composite mAzo has proved to be an efficient matrix for the purification and reuse of the quality of the purification. In this research we have developed a simple, efficient and economical purification technique that can be used for the purification of proteases using the mAzo particles as matrix.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/25256 |
| Date | 21 February 2017 |
| Creators | ALVES, Maria Helena Menezes Estevam |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/6466300269003304, CARVALHO JÚNIOR, Luiz Bezerra de, CABRERA, Mariana Paola, TEIXEIRA, José António Couto |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Biologia Aplicada a Saude, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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