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Previous issue date: 2010-05-21 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In the Amazon, the tropical climate is the main factor that favors the development of superficial fungal
infections and opportunistic, especially the high temperature and relative humidity, providing ideal
conditions for continuity in the life cycle of pathogenic and opportunistic fungi. Among the most
prevalent mycosis in this region, is pityriasis versicolor (PV), a major skin diseases treated at health
care in dermatology, can affect people of both genders, age, race and social class. Different species of
Malassezia spp., Some of which recently described by means of genetic studies, are responsible for
PV and, despite its high prevalence in several regions of the world and in Brazil, there are few studies
with more detailed approach on epidemiological, clinical and laboratory features of this mycosis in our
region. Research on the susceptibility of these species to antifungal drugs is fundamental to the
advancement of scientific knowledge in order to better clinical management and treatment of PV. The
testing for evaluation of in vitro susceptibility to antifungal agents for yeasts and molds (vitro
antifungal susceptibility), constitutes an important tool for monitoring the resistance of fungal strains
and also to assist in choosing the best therapeutic regimen. Given this, the Clinical and Laboratory
Standards Institute (CLSI), formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)
have developed methods for the assessment of fungal susceptibility, however, due to different
nutritional requirements of these species, there is still no specific protocol for testing with Malassezia
spp. that has been recommended by this or any other body accredited for the regulation of clinical and
laboratory procedures. The present study with the main objective to contribute to the development of a
simplified protocol for assessing the susceptibility of three species of Malassezia, being isolated from
01 M. furfur, 01 and 01 M.obtusa M. sympodialis front to drugs ketoconazole, itraconazole and
fluconazole. For this, bioassay were performed using the method in broth at different experimental
conditions, which were defined from some methodological variants found in publications in the last 10
years, for the optimum conditions for growth, which were tested three different concentrations of
inoculum, four types of culture media, incubation temperatures and two different criteria for
interpretation of results. According to the results, the conditions that led to better performance during
the experiments and the growth curves in bioassays with the drugs were: inoculum concentration of
0.5 to 2.5 x104 cells / mL and incubation temperature of 32 ° C; medium modified Leeming-Notman
with some changes in its composition, and spectrophotometric reading at 620 nm after 3 days of
incubation. Accordingly, the MIC values obtained were: MIC ≤ 0.03 mg / mL for ketoconazole and
itraconazole to inhibit 50% and 80% of the growth of M. obtusa and M. furfur. For the fluconazole
MICs were found for 2 and 4 mg / mL to inhibit 50% of the growth of M. sympodialis and M. obtusa
respectively, and MIC of 4:08 g / mL for inhibition of 80%, while for M. furfur found an MIC ≤ 0.03
mg / mL of this drug to inhibit 50% and 80% of fungal growth. Therefore, although preliminary,
considering the small number of samples analyzed, the results of this study provided important
information in view of developing a protocol for susceptibility testing of Malassezia species. / Na região Amazônica, o clima tropical é o principal fator que favorece o desenvolvimento de infecções
fúngicas superficiais e oportunistas, especialmente pela elevada temperatura e umidade relativa do ar,
oferecendo condições ideais à continuidade no ciclo de vida dos fungos oportunistas e patogênicos.
Dentre as micoses mais prevalentes nesta região, encontra-se a pitiríase versicolor (PV), uma das
principais dermatoses atendidas nos serviços de saúde em dermatologia, podendo acometer pessoas de
ambos os gêneros, idade, raça e classe social. Diferentes espécies do gênero Malassezia spp., algumas
das quais recentemente descritas por meio de estudos genéticos, são responsáveis pela PV e, a despeito
de sua alta prevalência em diversas regiões do mundo e no Brasil, ainda são poucos os estudos com
abordagem mais aprofundada acerca dos aspectos epidemiológicos, clínicos e laboratoriais desta micose
em nossa região. A investigação sobre a susceptibilidade destas espécies às drogas antifúngicas é de
fundamental importância para o avanço do conhecimento científico na perspectiva de uma melhor
abordagem clínica e terapêutica da PV. A realização de testes para avaliação da suscetibilidade in vitro
aos agentes antifúngicos para leveduras e fungos filamentosos (antifungigrama), se constitui em uma
importante ferramenta para o monitoramento da resistência de cepas fúngicas e também para auxiliar na
escolha do melhor esquema terapêutico. Diante disto, o Clinical and Laboratorial Standards Institute
(CLSI), antigo National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), têm desenvolvido
métodos de referência para a avaliação da susceptibilidade fúngica, entretanto, devido às exigências
nutricionais diferenciadas dessas espécies, ainda não existe um protocolo específico para testes com
Malassezia spp. que tenha sido recomendado por este ou por algum outro órgão credenciado para a
regulamentação de procedimentos clínicos e laboratoriais. O presente estudo teve como objetivo
principal contribuir para a elaboração de um protocolo simplificado para avaliação da susceptibilidade
de três espécies de Malassezia, sendo, 01 isolado de M. furfur, 01 de M.obtusa e 01 de M. sympodialis
frente às drogas cetoconazol, itraconazol e fluconazol. Para isto, foram realizados bioensaios com base
no método de microdiluição em caldo, em diferentes condições experimentais, as quais foram definidas a
partir de algumas variantes metodológicas encontradas em publicações nos últimos 10 anos, quanto às
condições ótimas de crescimento, no qual foram testadas três diferentes concentrações de inoculo, quatro
tipos de meios de cultura, duas temperaturas de incubação e diferentes critérios de leitura dos resultados.
De acordo com os resultados obtidos, as condições que permitiram melhor desempenho durante os
experimentos nas curvas de crescimento e nos bioensaios com a drogas foram: concentração do inoculo
de 0,5 a 2,5x104 céls/mL; temperatura de incubação de 32 ºC; meio de cultura Leeming-Notman
modificado com algumas alterações em sua composição, e leitura espectrofotométrica em 620nm após 3
dias de incubação. Nestas condições, os valores de CIMs obtidos foram: CIM ≤0,03 μg/mL, para o
cetoconazol e itraconazol para inibir 50% e 80% do crescimento de M. obtusa e M. furfur. Para o fluconazol foram
encontradas CIMs de 2 e de 4 μg/mL para inibir 50% do crescimento de M. sympodialis e M. obtusa
respectivamente, e CIM de 4 e 8 μg/mL para inibição de 80%; enquanto que para M. furfur foi encontrada uma
CIM ≤0,03 μg/mL desta droga para inibir 50% e 80% do crescimento fúngico. Portanto, apesar de preliminares,
considerando o número reduzido de amostras analisadas, os resultados obtidos neste estudo forneceram
informações importantes na perspectiva da elaboração de um protocolo para testes de susceptibilidade às
espécies de Malassezia.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/5327 |
| Date | 21 May 2010 |
| Creators | Souza, Victor Costa de |
| Contributors | Cunha, Maria da Graça Souza, Frota, Maria Zeli Moreira |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde, UFAM, Brasil, Faculdade de Medicina |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -8840929574560075891, 600, 500, -8624664729441623247 |
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