A Garcinia brasiliensis, conhecida como Bacupari, é uma espécie que se destaca por apresentar metabólitos secundários com várias atividades biológicas. Porém, na natureza a produção destes compostos é muito pequena. Para aumentar a produção de metabólitos secundários, de interesse econômico ou medicinal, vem sendo estudadas estratégias biotecnológicas como produção destes compostos in vitro. A adição de elicitores, tais qual o ácido salicílico (AS) e o ácido jasmônico (AJ), no meio de cultura em cultivo de células pode ser uma alternativa para maximizar a produção destes compostos. Neste contexto, o trabalho teve como objetivo avaliar o efeito elicitor do AS e do AJ na produção de compostos fenólicos e flavonoides totais em calos de embriões zigóticos de G. brasiliensis. Para calogênese foram testadas diferentes combinações da 2-iP (0; 9; 18; 36; 72 µM e 2,4-D (0; 2,05; 10,26; 18,47; 28,73 µM) em meio de cultura Wood Plant Medium (WPM). Cortes de calos com 20 dias foram corados com azul de toluidina e lugol para avaliações histológicas. As áreas cobertas por calos nos explantes foram medidas por meio do programa ImageJ®. Para indução da produção de compostos fenólicos e flavonoides totais os calos foram subcultivados em meio WPM contendo AS (0,1; 1; 10; 100 µM) na ausência de 2-iP e 2,4-D e AS (0,1; 1; 10; 100 µM) com presença de 72 µM de 2-iP e 28,73 µM de 2,4-D e AJ nas concentrações 0,1; 1; 10; 100 µM. Os calos ficaram incubados por 150 dias, a 25º C e ausência de fotoperíodo. A cada 30 dias, calos foram submetidos à análise de conteúdo de fenólicos e flavonoides totais. Para determinação da cinética dos calos, estes foram pesados a cada 30 dias (para tratamentos com AS) e 15 dias (para tratamentos com AJ), traçando-se a curva de crescimento. Os calos com 30 e 90 dias de incubação foram analisados quanto ao teor de fukugetina e 7-epiclusianona. Ao fazer as avaliações histológicas pode-se notar que as células dos calos expostos as concentrações que proporcionaram maior calogênese (72 µM de 2-iP com 28,73 µM de 2,4-D) se mostraram de tamanhos bem variados e com espaço intercelular, caracterizando um tecido desorganizado. Quanto a área dos calos, constatou-se que o tratamento que melhor proporcionou calogênese foi 72 µM de 2-iP com 28,73 µM de 2,4-D. Na elicitação, altas concentrações de AS (10 e 100 µM) e maior tempo de exposição (120 e 150 dias) não implicaram maior acúmulo de compostos fenólicos e flavonoides totais. A concentração de 0,1 µM de AS foi eficiente na produção de fukugetina e 7-epiclusianona quando os calos ficam expostos 30 dias em meio de cultura. Porém, quando o AS foi adicionado ao meio juntamente com 2-iP e 2,4-D, a concentração que mais elicitou à produçao de fukugetina e 7-epiclusianona foi 10 µM de AS com 90 dias de exposição. A concentração de 0,1 µM de AJ promoveu o incremento da massa dos calos de G. brasiliensis e, com aumento do tempo de exposição, foi favorável a produção de fenóis e de flavonoides. As maiores concentrações testadas de AJ (10 e 100 µM) foram as mais eficientes na estimulação da produção da fukugetina e 7-epiclusianona quando os calos permaneceram 90 dias expostos ao elicitor. Para a produção de fukugetina, a condição mais favorável foi a exposição por 30 dias em meio de cultura WPM contendo 10 µM de AJ. Enfim, pode-se concluir que para obter melhor calogênese em embriões de Bacupari é necessário altas concentrações de 2-iP e 2,4-D. O AS e o AJ demonstraram serem elicitores abióticos eficiente na otimização de metabólitos secundários em calos de G. brasiliensis. Levando em consideração a curva de crescimento dos calos de Bacupari, pode-se concluir que o melhor período para a extração dos metabólitos secundários dos calos de G. brasiliensis foi o início da fase estacionária. / Garcinia brasiliensis, known as Bacupari, is a species that stands out for presenting secondary metabolites with different biological activities. However, the nature of the production thereof is very small. To increase production of secondary metabolites, economic and medical interest, biotechnological strategies have been studied as production of these compounds in vitro. The addition of elicitors, such that salicylic acid (SA) and jasmonic acid (AJ), in the culture medium for cell culture may be an alternative to maximize the production of these compounds. In this context, the work was to evaluate the effect of elicitor AS and AJ in the production of phenolics and total flavonoids in callus of zygotic embryos of G. brasiliensis. For callus induction were tested different combinations of 2-iP (0; 9; 18; 36; 72 µM) and 2,4-D (0; 2.05; 10.26; 18.47; 28.73 µM) in the medium of culture Wood Plant Medium (WPM). Callus with 20 days were stained with toluidine blue and lugol for histological evaluation. The areas covered by callus on explants were measured through ImageJ® program. For induction of phenolic compounds and total flavonoid callus were subcultured on WPM containing AS (0.1, 1, 10, 100 µM) in the absence of 2-iP and 2,4-D and AS (0.1, 1, 10, 100 µM) with presence of 72 uM 2-iP and 28.73 mM of 2,4-D and AJ in concentrations 0.1, 1, 10;. 100 uM. The callus were incubated for 150 days at 25 ° C and absence of photoperiod. Every 30 days, callus were subjected to phenolic content analysis and total flavonoid. To determine the kinetics of calluses, these were weighed every 30 days (for treatments with AS) and 15 days (for treatments AJ) to the growth curve. Callus with 30 and 90 days of incubation were analyzed for content of fukugetin and 7-epiclusianone. By making the histological evaluations can be noted that the cells of calluses exposed to the conditions that gave greater callus formation (72 µM of 2-iP with 28.73 µM of 2,4-D) have proved very varied sizes and intercellular space, featuring a disorganized tissue. The area of callus, it was found that the treatment gave better callus induction was 72 uM 2-iP with 28.73 uM 2,4-D. In elicitation, high concentrations of AS (10 and 100 µM) and longer exposure time (120 and 150 days) did not entail greater accumulation of phenolic compounds and total flavonoids. The concentration of 0.1 µM AS was efficient in producing fukugetina and 7-epiclusianone in callus when they are exposed 30 days in culture medium. But when the AS was added to the medium with 2-iP and 2,4-D, the concentration that elicited the production of more fukugetina and 7-epiclusianone was 10 uM AS with 90 days of exposure. The concentration of 0.1 µM AJ promoted the increase of the mass of calluses and G. brasiliensis, increasing the exposure time was favorable production of phenols and flavonoids. The highest concentrations tested AJ (10 and 100 µM) were more efficient in stimulating the production of fukugetina and 7-epiclusianone when the calli 90 days remained exposed to the elicitor. For the production of fukugetin, the most favorable condition for the exposure was 30 days in WPM containing 10 µM of AJ. Anyway, it can conclude that for better callus induction in Bacupari embryos is necessary high concentrations of 2-iP and 2,4-D. The AS and AJ shown to be effective abiotic elicitors on the optimization of secondary metabolites in callus of G. brasiliensis. Taking into account the growth curve of bacupari callus, it can be concluded that the best period for the extraction of secondary metabolites of G. brasiliensis callus was the early stationary phase.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/851 |
| Date | 02 August 2016 |
| Creators | TEIXEIRA, Maria Gessi |
| Contributors | SANTOS, Breno Regis, http://lattes.cnpq.br/7425333831962327, CARVALHO, Marília, MARQUES, Douglas José, BARBOSA, Wellington Marota |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Instituto de Ciências da Natureza, Brasil, UNIFAL-MG, Programa de Pós-Graduação em Ciências Ambientais |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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