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Tese_ICS_Bruno Penas Seara Pitanga.pdf: 3443977 bytes, checksum: 4b90d8bbc0ba9b0c3ac164075485f76e (MD5) / CAPES;CNPq / A capacidade reduzida da resposta imunológica no microambiente do
glioblastoma é principalmente devido à interação microglia/glioma e está
relacionada à sua agressividade. Nossos estudos anteriores demonstraram que
os flavonoides derivados de plantas podem atuar como inibidores de
crescimento de linhagens celulares humanas de glioblastoma, em especial o
flavonoide rutina inibe o crescimento e apresenta capacidade morfogênica,
ainda estimula a libertação de agentes imunomoduladores como TNF e NO por
astrócitos e microglia em culturas primárias de ratos. O objetivo desse estudo
foi verificar a viabilidade de linhagens celulares de glioblastoma humano
tratadas com flavonoides, bem como caracterizar essas células quanto à
expressão de proteínas do citoesqueleto e morfologia, ainda, investigar se os
flavonoides rutina e quercetina, nas concentrações de 50μM e 100μM, podem
modular a resposta imunológica em co-cultura microglia/glioma. Como
demonstrado através do teste MTT, após 72h de exposição com os
flavonoides, ocorreu inibição dose-dependente da viabilidade das células TG1,
U251 e GL15. A caracterização dessas linhagens revelou marcação conjunta
de GFAP, beta III tubulina e Nestina em diferentes intensidades e localização.
Além disso, verificamos diminuição da capacidade de formação de esferóides
em culturas de células TG1 tratadas com rutina. Em culturas de célula C6 a
viabilidade não foi afetada após a exposição direta aos flavonoides rutina e
quercetina nas concentrações de 50 - 100μM por 48h. O teste azul de tripan
revelou uma redução dessa viabilidade em ambos os flavonoides testados
diretamente. Já durante exposição indireta de meios provenientes de culturas
de microglia tratadas com rutina, observamos redução na viabilidade em C6.
Além disso, observamos um aumento na expressão de OX-42 em culturas de
microglia após a exposição com flavonoides rutina e quercetina, indicando sua
ativação. Foi realizado em co-culturas microglia/glioma a marcação para
isolectina B4, verificamos que o flavonoide rutina induziu aumento na
proliferação de microglia após contagem das células isolectina positivas. Ainda,
o teste ELISA realizada em culturas microgliais mostrou que os níveis de TNF foram aumentados em culturas tratadas com rutina 100μM ou quercetina 50-
100μM. A dosagem de nitrido mostrou aumento significativo somente após
tratamento com quercetina 100μM. Através da citometria verificamos redução
de pSTAT3 e NFkB em culturas de C6 e a análise ultraestrutural revelou figura
de mielina, vacúolo fagocítico durante interação microglia/glioma. Verificamos
ainda que houve aumento na intensidade da marcação de células apoptóticas
quando tratadas com quercetina 100μM em gliomas, já com rutina ocorreu sutil
marcação de anexina também em gliomas. Para quantificação dos vacúolos
autofágicos em gliomas, utilizamos o corante fluorescente laranja de acridina.
Em rutina 100 μM observamos aumento na intensidade de fluorescência, já o
tratamento com quercetina verificamos aumento discreto na formação dos
vacúolos autofágicos. Diversos estudos demonstram que o perfil de resposta
Th1 está associado com um melhor prognóstico em pacientes com câncer.
Esses achados sugerem que quercetina e rutina podem induzir mudanças no
perfil regulatório da resposta microglial durante a interação com glioma, no
entanto o flavonoide rutina mostrou um potencial melhor como
imunomodulador. O entendimento da interação microglia/glioma será útil na
elaboração de novas terapias baseadas na resposta imune contra o
glioblastoma. / Salvador
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:192.168.11:11:ri/12575 |
| Date | 14 August 2013 |
| Creators | Pitanga, Bruno Penas Seara |
| Contributors | Costa, Silvia Lima |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFBA, instname:Universidade Federal da Bahia, instacron:UFBA |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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