Orientadora : Profª. Drª. Marguerite Quoirin / Coorientador : Prof. Dr. Henrique Soares Koehler / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Botânica. Defesa: Curitiba, 13/03/2015 / Inclui referências / Área de concentração : Estrutura e fisiologia / Resumo: A propagação natural do híbrido BRS Manicoré (E. guineensis x E. oleífera), é limitada, porque as sementes apresentam um endocarpo duro, demoram até um ano para germinar e tem baixas taxas de germinação (30%). Os objetivos desta pesquisa foram otimizar a germinação in vitro de embriões zigóticos (EZ) e obter embriões somáticos a partir de EZ e pela técnica de "thin cell layer" (TCL). Para a germinação, EZ foram inoculados nos meios de cultura MS (sais e vitaminas) com e sem NaH2PO4 e MS ½, N6 e Y3 (sais e vitaminas), este último adicionado ou não de NaH2PO4. No meio MS contendo NaH2PO4, a taxa de germinação foi aumentada de 40 a 68% em comparação com o meio sem fosfato. Na comparação entre os meios de cultura MS, MS ½, N6 e Y3, foram observados que 75% dos EZ cultivados no meio Y3 formaram plantas (raiz e parte aérea), diferindo estatisticamente dos outros meios de cultura (46; 35 e 17%). Para a embriogênese somática, foram utilizados EZ e TCLs da parte aérea de plântulas cultivadas in vitro. EZ foram cultivados em meios Y3 e MS suplementados com picloram ou 2,4-D (500 ?M) e, em outro experimento em meio Y3 adicionado ou não de 2,4-D (250, 500, 750 ?M) no escuro. Os calos formados foram transferidos para meio de multiplicação, contendo sais e vitaminas do meio Y3 100 ?M de 2,4-D ou picloram, e 7,9 ?M de BAP ou 2iP. Para a formação de calos embriogênicos e embriões somáticos (ES), os calos foram transferidos para meio Y3 suplementado ou não de 2,4-D (9 ou 27 ?M), 1000 ?M de putrescina e 0,5 g.L-¹ de carvão ativado (CA). ES foram obtidos no meio Y3 acrescido ou não de 2,4- D (9 ?M) + 1000 ?M de putrescina (em 37,16 e 43,3% dos calos, respectivamente) e 40% foram convertidos em plântulas no meio Y3 sem reguladores contendo 3% de sacarose, 2 g.L-1 de CA e 6 g.L-1 de ágar em condições de luz. Os TCLs basais da parte aérea foram cultivados primeiro no meio Y3 suplementado de 2,4-D (500 ou 800 ?M) e, em um segundo experimento, no meio Y3 com ou sem 2,4-D (250, 500, 800 ou 1000 ?M), no escuro. Nos dois experimentos, os meios foram adicionados de 2 g.L-¹ de CA, 3% de sacarose e 2,5 g.L-¹ de Gelzan. Para a formação de calos embriogênicos e ES, os calos foram cultivados no meio com 2,4-D (50 ou 100 ?M) ou sem acrescido de 100 ?M de putrescina e 0,5 g.L-¹ de CA. ES foram obtidos nestes meios, em 49 a 53% dos calos e 50% foram convertidos em plântulas no meio Y3 sem reguladores, com 2 g.L-¹ de CA em condições de luz. Conclui-se que EZ germinam melhor no meio de cultura Y3, desenvolvendo plantas com raiz e parte aérea. Para a embriogenêse somática a partir de EZ, o 2,4-D é eficiente para a formação de calos, já para a formação de ES não é necessária à adição do mesmo, quando o meio é acrescido de putrescina. A técnica do TCL basal é eficiente para a formação de calos e obtenção de ES no meio de cultura Y3. Palavras-chave: híbrido interespecífico, fosfato de sódio, putrescina, thin cell layer. / Abstract: The natural propagation of the interspecific hybrid of oil palm BRS Manicoré (E. guineensis x E. oleifera) is limited because the seeds have a hard core, take up to one year to germinate and have low germination rates (30%). The objectives of this study were to optimize the in vitro germination of zygotic embryos (EZ) and obtain somatic embryos from EZ and by the technique of Thin Cell Layer (TCL). For germination, EZ were inoculated in MS medium (salts and vitamins) with and without NaH2PO4, MS ½, N6 and Y3 (salts and vitamins) with or without added phosphate. In MS medium containing NaH2PO4, germination rate was increased from 40 to 68% in comparison with the medium without phosphate. Comparing the MS, MS ½, N6 and Y3 culture media, it was observed that 75% of zygotic embryos cultured in Y3 medium formed whole plants (roots and shoots), differing from the MS culture media, MS ½ and N6 (46, 35, and 17%). For somatic embryogenesis EZ and TCLs of shoots of in vitro plantlets were used. EZ were cultured in the dark on MS medium supplemented with Y3 and picloram or 2,4- D (500 ?M) and Y3 medium supplemented with 2,4-D (250, 500, 750 ?M) or without. The calluses were transferred to Y3 multiplication medium with 100 ?M auxin plus 7.9 ?M BAP or 2iP. In order to obtain embryogenic calluses and somatic embryos (ES), the calluses were transferred to Y3 medium supplemented or not with 9 or 27 ?M 2,4 -D, 1000 ?M putrescine and 0.5 g.L-¹ activated charcoal (AC). ES were obtained in Y3 medium with or without 2,4-D (9 ?M) + 1000?M putrescine (in 37.16 and 43.3% of these calluses, respectively) and 40% were converted into plantlets in the Y3 culture medium without regulators, containing 3% sucrose , 2g.L-1 AC and 6 g.L- 1 agar in the presence of light. TCLs of the shoot base were cultured in the dark, first in Y3 medium supplemented with 2,4-D (500 or 800 ?M ) and, in another experiment, in Y3 medium with or without 2,4-D (250, 500, 800 or 1000 ?M). In both experiments, the media were supplemented with 2 g.L-¹ AC, 3% sucrose, 2,5 g.L-¹ Gelzan. For the formation of embryogenic calluses and ES, the calluses were transferred to the same medium with or without 2,4-D (50 or 100 ?M) plus 100 ?M of putrescine and 0.5 g.L-¹ AC. ES were obtained in these media in 49-53% of the calluses, and 50% were converted into seedlings in Y3 medium without regulators, supplemented with 2 g.L-¹ AC in the presence of light. It is concluded that the germination of EZ is better (with development of shoot and primary root) on Y3 medium. For somatic embryogenesis from EZ, the 2,4-D is effective for inducing the formation of callus, but it is not necessary for the formation of somatic embryos when the medium contains putrescine. The TCL technique is effective for callus formation and formation of somatic embryos in Y3 medium. Keywords: interspecific hybrid, sodium phosphate, thin cell layer, putrescine.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:dspace.c3sl.ufpr.br:1884/38069 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Bonetti, Keila Alves do Prado |
| Contributors | Koehler, Henrique Soares, 1953-, Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Botânica, Quoirin, Marguerite Germaine Ghislaine, 1948- |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 97f. : il. algumas color., tabs., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPR, instname:Universidade Federal do Paraná, instacron:UFPR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | Disponível também em formato digital |
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