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Previous issue date: 2013-08-30 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Copaíba ( Copaifera L. ) is one of the best known and Amazonian plants used by traditional populations in natural medicine . The oleoresin of copaiba is a source of terpene compounds. The previous fractionation of terpene acids contained copaiba oil for the isolation of metabolites of interest is a useful method in dispatch processes phytochemicals later. The use of ion exchange chromatography is an alternative that minimizes the inconvenience of the formation of emulsions difficult separation. This paper proposes the use of methodology by ion exchange chromatography silica treated with aqueous KOH in order to re-isolate constituent terpenoids acids present in oleoresin gender Copaifera L quantity that allows making various biological assays. Aspects of the anti-inflammatory activity and antitumor activity via biological assays, enzymatic assays being developed tests (inhibition of tyrosinase and lipoxygenase) of cytokine and cytotoxicity in model cell culture in order to get a new bioactive compound that can be used in the preparation of a phytochemical or phyto, such as bleaching or skin protectors. Were obtained and identified by spectroscopic and spectrometric methods six (06) diterpene acids: copalic, 3-hydroxy-copalic, 3-acetoxy-copalic, hardwíckiico, colávico-15-methyl ester and kaurenoic. The acid 3-hydroxy-copalic was capable of inhibiting tyrosinase enzyme with IC50=255.53 ±18.59 μM . The colávico-15-methyl ester showed a higher capacity to inhibit lipoxygenase enzyme (IC50=157.82 ±17.69 μM ) . The cytotoxic activity of the substances was evaluated in healthy cells by strains of human lymphocytes , fibroblasts and 3T3L1 murine J774 macrophages , which poisonous substances only at concentrations above 250 μM . Was also made of the APPRAISAL hemolytic potential of the compounds , and found that none had significant hemolytic activity at concentrations up to 50 mM . For lines AGP - 1 ( gastric cancer ) , HCT -116 (colon cancer) , MCF - 7 ( breast cancer) , NIHOVCAR ( ovarian cancer ) , SKAMELL - 4 ( melanoma ) and SF -295 ( human glioblastoma ) , tested at a single concentration of 20 μM , showed no significant changes in cell viability . The antiinflammatory activity of the compounds was evaluated as inhibition of NO production in murine J774 macrophage lineage stimulated with LPS where the copalic acid ( 98.48 ± 1.30 % ) and hardwickiico acid ( 92.73 ± 4.97% ) had activity equivalent to that of standard indomethacin ( 96.58 ± 1.7 % ) at concentration of 100 μM . Was investigated first the effect of compounds isolated diterpene acids on the production of TNF - α , IL -6 and IL-10. The compounds did not inhibit the production of TNF - α . The acid 3-acetoxy-copalic, kaurenoic , colávico-15-methyl ester and copalic inhibited the production of IL -6 23.84 ± 8.17 %, 11.21 ± 5.74 %, 17.34 ± 4 18 ± 1.86 % and 4.19 %, respectively, at a single concentration of 50 μM . The kaurenoic acid , 3- acetoxy - copalic copalic and induced the production of IL-10 at concentrations of 12.5 μM and 25 μM , but there was a decrease in this induction when tested at a concentration of 50 μM . The kolávic-15-methyl ester and hardwickiic acid no changes of IL -10. Thus, these diterpenes may be considered components responsible for contributing to combat inflammation, however it is necessary to develop a pharmaceutical probably topical, to conduct clinical trials aimed to demonstrate its application in the treatment of injuries acute and chronic skin. / A copaíba (Copaifera L.) é uma das plantas amazônicas mais conhecidas e utilizadas por populações tradicionais como medicamento natural. O óleo-resina de copaíba é fonte de compostos terpênicos. O fracionamento prévio dos ácidos terpênicos contidos óleo de copaíba para o isolamento de metabólitos de interesse é um método útil na celeridade dos processos fitoquímicos posteriores. A utilização da cromatografia de troca iônica é uma alternativa que minimiza o inconveniente da formação de emulsões de difícil separação. O presente trabalho propõe o uso de metodologia de cromatografia por troca iônica por sílica tratada com solução aquosa de KOH com o objetivo de re-isolar constituintes ácidos terpenoides presentes em óleo-resinas do gênero Copaifera L em quantidade que permita a realização de diversos ensaios biológicos. Foram abordados aspectos da atividade anti-inflamatória e antitumoral, por meio de ensaios biológicos, sendo desenvolvidos ensaios enzimáticos (testes de inibição da tirosinase e lipoxigenase), de dosagem de citocinas e de modelo de citotoxicidade em cultura de células, a fim de obter-se um novo composto bioativo que poderá ser utilizado na elaboração de um fitofármaco ou fitocosmético, tais como clareadores ou protetores de pele. Foram obtidos e identificados por métodos de espectroscopia e espectrometria, seis (06) ácidos diterpênicos: os ácidos copálico, 3-hidróxi-copálico, 3-acetóxi-copálico, hardwíckiico, colávico-15-metil éster e o caurenóico. Apenas o ácido 3-OH-copálico apresentou capacidade de inibição da enzima tirosinase com CI50 de 255,53 ±18,59 μM. O colávico-15-metil éster apresentou maior capacidade de inibição da enzima lipoxigenase (CI50 = 157,82 ±17,69 μM). As atividades citotoxicas das substâncias foram avaliadas em células saudáveis por linhagens de linfócitos humanos, fibroblastos murinos 3T3L1 e macrófagos J774, sendo as substancias tóxicas apenas em concentrações acima de 250 μM. Foi feita também a avalição do potencial hemolítico dos compostos, sendo verificado que nenhum apresentou atividade hemolítica significativa em concentrações de até 50 mM. Para as linhagens AGP-1 (câncer gástrico), HCT-116 (cólon retal), MCF-7 (câncer de mama), NIHOVCAR (câncer de ovário), SKAMELL-4 (melanona) e SF-295 (glioblastoma humano), testadas em concentração única de 20 μM, não apresentaram alterações significativas da viabilidade celular. A atividade antiinflamatoria dos compostos foi avaliada quanto à inibição da produção de NO na linhagem de macrófagos murinos J774 estimulados com LPS, onde o ácido copálico (98,48±1,30%) e o ácido hardwickiico (92,73±4,97%) tiveram atividade equivalente ao do padrão indometacina (96,58±1,7%), todos na concentração de 100 μM. Foi investigada pela primeira vez a influência de compostos ácidos diterpênicos isolados sobre a produção de citocina TNF-α, IL-6 e IL-10. Os compostos não inibiram a produção de TNF-α. Os ácidos 3-acetóxi-copálico, caurenóico, colávico-15-metil éster e o copálico inibiram a produção de IL-6 em 23,84±8,17%; 11,21±5,74%; 17,34±4,18% e 4,19±1,86%, respectivamente, na concentração única de 50 μM. Os ácidos caurenóico, 3-acetóxi-copálico e copálico induziram a produção de IL-10 em concentrações entre 12,5 μM e 25 μM, porém houve uma diminuição nessa indução quando testados na concentração de 50 μM. Para os ácidos colávico-15-metil éster e o hardwickiico não houve alterações da produção de IL-10. Com isso, esses diterpenos podem ser considerados componentes responsáveis por contribuir no combate ao processo inflamatório, no entanto faz-se necessário o desenvolvimento de uma formulação farmacêutica, provavelmente de uso tópico, para realização de ensaios clínicos visando comprovar a sua aplicação no tratamento de lesões de pele agudas e crônicas.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/4504 |
| Date | 30 August 2013 |
| Creators | Vargas, Fabiano de Sousa |
| Contributors | Veiga Júnior, Valdir Florêncio da, Lima, Emerson Silva, David, Jorge Maurício, Vasconcellos, Marne Carvalho de |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Patologia Tropical, UFAM, Brasil, Faculdade de Medicina |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -8624664729441623247, 600 |
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