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Previous issue date: 2016-10-04 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Introduction: Pseudomonas aeruginosa resistant to multiple antibiotics (MDR , multi-drugresistance
and PDR , pan-drug-resistance ) is a frequent etiologic agent of nosocomial
infections, mainly affecting immunocompromised patients, such as those admitted to the
Intensive Care Unit (ICU). Objectives: (1) Detect P. aeruginosa resistant to multiple
antimicrobials in patients, professionals and hospital environment; (2) Identify genetic factors
that confer antibiotic resistance such as integrons, gene cassettes and genes encoding enzymes
β-lactamases; and (3) Detect clonal groups among isolates MDR/PDR. Methods: Samples
were collected samples from patients, professionals and structures in ICUs of Hospitals 28 de
Agosto (HPS28), Francisca Mendes (HUFM) e João Lúcio Pereira Machado (HPSJL), which
were isolated and identified strains of P. aeruginosa by classical and molecular
microbiological methods (amplification and sequencing of the 16S rRNA gene); The
antimicrobial resistance profile was determined by disk diffusion technique; The research
groups was determined by clonal genetic similarity among isolates MDR/PDR by PFGE; The
detection of genes that encode resistance (integrons, gene cassettes and β-lactamases
enzymes) was performed by PCR and confirmed by RFLP and/or genetic sequencing.
Results: The phenotypes MDR and PDR were detected, respectively, 13.3 % and 1.2 % of the
isolates. In 32 (38.5%) were detected class integrons 1. Of these, three (3.6%) were also
positive for integrons class intengrons 2. The presence of the isolates showed statistical
correlation (P<0.05) with significant phenotypic resistance to the tested drugs. A high
frequency of integrons contained no genetic cassette or carried only genes that encode
resistance to aminoglycosides streptomycin and spectinomycin and trimethoprim. The β-
lactamase showed the production of enzyme KPC -2 study (66,7%), VIM (8.3%) and OXA -
50 (100%) P. aeruginosa isolates MDR/PDR. Two clonal groups were detected among
MDR/PDR isolates, indicating clonal intra and inter-hospital. Conclusion: The isolation of P.
aeruginosa from hospitals studied shows that these pathogens, which can cause severe
nosocomial infections, in particular MDR and PDR strains are spreading in a hospital
environment. Moreover, it appears that the presence of genetic elements such as integrons,
gene cassettes and genes encoding β-lactamases are correlated to the resistance fenótops these
isolates and therefore potential genetic mechanisms that confer antimicrobial resistance.
Nevertheless, further studies are needed to assess the contribution of other molecular
mechanisms and the selective pressure exerted by antimicrobial agents that contribute to the
development of these phenotypes. / Introdução: Pseudomonas aeruginosa resistente a múltiplos antimicrobianos (MDR, multidrug-
resistance e PDR, pan-drug-resistance) é um agente etiológico frequente em infecções
hospitalares, acometendo principalmente pacientes imunossuprimidos, tal como os internados
em Unidade de Tratamento Intensivo (UTI). Objetivos: (1) Detectar P. aeruginosa resistente
a múltiplos antimicrobianos em pacientes, profissionais e estruturas hospitalares; (2)
identificar fatores genéticos que conferem resistência antimicrobiana, tais como integrons,
cassetes gênicos e genes codificadores de enzimas β-lactamases; e (3) Detectar grupos clonais
entre os isolados MDR/PDR. Metodologia: Foram realizadas coletas de amostras de
pacientes, profissionais e estruturas de UTIs dos Hospitais 28 de Agosto (HPS28), Francisca
Mendes (HUFM) e João Lúcio Pereira Machado (HPSJL), dos quais foram isoladas e
identificadas cepas de P. aeruginosa por metodologia microbiológica clássica e molecular
(amplificação e sequenciamento do gene 16s rRNA); O perfil de resistência aos
antimicrobianos foi determinado pela técnica de disco-difusão; A pesquisa de grupos clonais
foi determinada por similaridade genética entre os isolados MDR/PDR por PFGE; A detecção
de genes que codificam resistência (integrons, cassetes gênicos e enzimas β-lactamases) foi
realizada por PCR e confirmadas por RFLP e/ou sequenciamento genético. Resultados: Os
fenótipos MDRs e PDR foram detectados em, respectivamente, 13,3% e 1,2% dos isolados
estudados. Em 32 (38,5%) foram detectados integrons de classe 1. Destes, três (3,6%)
também foram positivos para integrons de classe 2. A presença de intengrons nos isolados
estudados demonstra correlação estatística (P<0,05) significativas com os fenótipos de
resistência aos fármacos testados. Uma alta frequência de integrons não continha cassete
gênico ou apenas carregava genes que codificavam resistência aos aminoglicosídeos
estreptomicina e espectinomicina e ao trimetropin. A pesquisa de β-lactamases revelou a
produção de enzimas KPC-2 (66,7%), VIM (8,3%) e OXA-50 (100%) por isolados de P.
aeruginosa MDR/PDR. Dois grupos clonais foram detectados entre os isolados MDR/PDR
estudados, indicando disseminação clonal inter e intrahospitalares. Conclusão: O isolamento
de P. aeruginosa a partir dos hospitais estudados evidencia que esses patógenos, capazes de
causar graves infecções nosocomiais, em especial, cepas MDR e PDR, estão se disseminando
em ambiente hospitalar. Além disso, constata-se que a presença de elementos genéticos como
integrons, cassetes gênicos e genes codificadores de β-lactamases estão correlacionadas aos
fenótops de resistência nesses isolados, sendo, portanto, mecanismos genéticos potenciais
capazes de conferir resistência antimicrobiana. Apesar disso, estudos futuros são necessários
para avaliar a contribuição de outros mecanismos moleculares e a pressão seletiva exercida
pelos antimicrobianos que contribuem para o desenvolvimento destes fenótipos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/5579 |
| Date | 04 October 2016 |
| Creators | Dini, Vanda Santana Queiroz |
| Contributors | Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, Mota, Adolfo José da, Nunes, Gustavo, Saito, Daniel |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 32215883775770440, 600, 500, 1984485651082134923 |
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