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Previous issue date: 2016-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In Brazil, L. (V.) braziliensis is specie responsible for many cases of American
Tegumentary Leishmaniasis (ETL). To effective vaccine development, formulations
contained immunogenic antigens associated with adjuvants that induce a T helpe 1
(Th1) immune response are been investigated, among of antigen have the “Thiol
Specific Antioxidant” (rTSA), “Stress Inducible protein 1” (rSTI) and “Leishmania
elongation initiation fator” (rLeIF) of L. major, which have been immunogenic and
promising. The genes that corresponding to these antigens in L. (V.) braziliensis were
sequenced and recombinants proteins were obtained and used in this study. Works that
used BCG and β-glucan showed that these could provide protection against not related
pathogens. The present study had as aim to evaluate the immunogenicity and the
effectiveness of the vaccine using the rTSA, rSTI and rLeIF proteins (Triple),
associated or not with β-glucan, with or without BCG stimulus. BALB/c mice were
divided in 2 groups, one of the groups was stimulated with BCG and the other not.
Posteriorly, the animals were divided in subgroups and vaccinated with triple,
associated or not with β-glucan. Mice’s serum were collected to search of cytokines and
antibodies by immunoenzymatic technique. Lymph node and spleen’s cells were
cultivated and cytokines searched in supernatants. BCG stimulation induced a greater
IFN-γ production. The vaccinated mice with triple produced IgG total, IgG1 and IgG2a
specifics to L. (V.) braziliensis. BCG stimulation induced a high IgG total and IgG2a
production in animals that received the triple without β-glucan. To evaluate the
protection provided by vaccine, the immunized animals were infected with L. (V.)
braziliensis and paw them measured along of 8 weeks. The subgroup don’t stimulated
with BCG and vaccinated with triple, associated with β-glucan, has developed bigger
lesions that the others subgroups. The subgroups that received only BCG stimulation or
BCG stimulation and vaccine with triple plus β-glucan presented bigger lesions that
animal don’t stimulated or vaccinated. After infection by L. (V.) braziliensis, (i) the
animals stimulated with BCG and vaccinated with triple presents more IgG specific to
L. (V.) braziliensis; (ii) the immunizations with triple maintained IFN-γ levels elevated;
(iii) all animals presented lower IL-17 levels in serum; (iv) the subgroups produced
similar IFN-γ levels, but with a high IL-17 production in subgroup vaccinated with
triple plus β-glucan, don’t BCG stimulated, in spleen; (v) the animals that received only
BCG produced more IFN-γ and IL-17 in lymph node. In conclusion: the immunizations
with triple were immunogenic; the immunization scheme containing triple plus β-
glucan, without BCG stimulation, provided partial protection against L. (V.) braziliensis
infection; BCG stimulations induced biggest lesions in subgroup that received only
saline or triple plus β-glucan; the vaccination scheme containing triple maintained high
IFN-γ production after L. (V.) braziliensis infection; in infection site, the BCG
stimulation induced a Th1/Th17 heterologous response. / No Brasil, L. (V.) braziliensis é a espécie responsável pela maioria dos casos de
Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). Para o desenvolvimento de uma vacina
eficaz, formulações contendo antígenos imunogênicos, associados com adjuvantes,
indutores de uma resposta imune do perfil T auxiliar 1 (Th1), estão sendo investigados,
entre eles têm-se o “Thiol Specific Antioxidant” (rTSA), a “Stress Inducible protein 1”
(rSTI) e o “Leishmania elongation initiation fator” (rLeIF) de L. major, que se
mostraram imunogênicos e promissores. Os genes destas proteínas, de L. (V.)
braziliensis, foram sequenciados e as proteínas recombinantes obtidas e utilizadas neste
estudo. Trabalhos utilizando BCG e β-glucana mostraram a capacidade destes em
fornecer proteção inespecífica. O presente estudo teve como objetivo avaliar a
imunogenicidade e a eficácia da vacina com as proteínas rTSA, rSTI e Leif (Tríplice) de
L. (V.) braziliensis associadas com o adjuvante β-glucana, com ou sem estímulo prévio
com BCG. Camundongos BALB/c foram divididos em 2 grupos, um deles inoculado
com BCG e o outro não. Posteriormente, os animais foram divididos em subgrupos e
vacinados com tríplice, associadas ou não com β-glucana. Foram coletados os soros dos
animais para dosagem de citocinas e anticorpos pela técnica imunoenzimática. Células
do baço e linfonodo drenante foram cultivadas para dosagem de citocinas no
sobrenadante. O estimulo com BCG induziu uma maior produção de IFN-γ. Os
camundongos vacinados com a tríplice produziram anticorpos IgG total, IgG1 e IgG2a
específicos para L. (V.) braziliensis. O estimulo com BCG induziu uma maior produção
de anticorpos IgG total e IgG2a, nos animais vacinados com a tríplice sem β-glucana.
Para avaliar a proteção fornecida pela vacina, os animais imunizados foram infectados
com L. (V.) braziliensis e as patas mensuradas durante 8 semanas. O subgrupo, não
estimulado com BCG e vacinado com a tríplice, associada com β-glucana, desenvolveu
lesões menores que os demais subgrupos (p<0,05). Os subgrupos que receberam apenas
BCG ou foram vacinados com a tríplice mais β-glucana apresentaram lesões maiores
que os animais não estimulados e imunizados (p<0,05). Após a infecção por L. (V.)
braziliensis, (i) os animais estimulados e vacinados com a tríplice apresentaram níveis
elevados de IgG específicos para L. (V.) braziliensis; (ii) as imunizações com a tríplice
mantiveram os níveis de IFN-γ aumentados (p<0,05); (iii) todos os animais
apresentaram menores concentrações de IL-17, no soro; (iv) houve detecção similar de
IFN-γ entre os subgrupos, mas com uma maior produção de IL-17 no subgrupo
vacinado com a tríplice mais β-glucana, não estimulados com BCG, no baço (p<0,05);
(v) os animais que receberam apenas BCG produziram mais IFN-γ e IL-17, no
linfonodo drenante. Conclui-se que: as imunizações com tríplice foram imunogênicas; o
esquema de imunização com a tríplice mais β-glucana, sem estimulo com BCG,
forneceu proteção parcial contra a infecção por L. (V.) braziliensis; o estimulo com
BCG induziu lesões maiores nos subgrupos que receberam salina ou a tríplice mais β-
glucana; o esquema de vacinação com a tríplice manteve a produção de IFN-γ elevada
após a infecção por L. (V.) braziliensis; no sitio de infecção, o estimulo com a BCG
levou a uma resposta heteróloga Th1/Th17.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/6597 |
| Date | 04 March 2016 |
| Creators | Matos, Grazzielle Guiamrães de |
| Contributors | Dorta, Miriam Cristina Leandro, Dorta, Miriam Cristina Leandro, Dias, Fátima Ribeiro, Cardoso, Ludimila Paula Vaz |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical e Saúde Publica (IPTSP), UFG, Brasil, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 6085308344741430434, 600, 600, 600, 600, -7769011444564556288, 5989919188376747614, 2075167498588264571 |
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