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Previous issue date: 2018-04-13 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Paracoccidioidomycosis (PCM) is an important mycosis of Latin America, caused by
thermodymorphic fungi of the genus Paracoccidioides. Homeostasis of metals such as
copper, zinc and iron is important for the survival of fungi in the host environment. In
this context, copper is an important cofactor for several enzymes, such as as superoxide
dismutases and cytochrome c oxidase. The excess free copper in the cell promotes
accumulation of reactive oxygen species, causing damage to nucleic acids, lipids and
proteins. Thus, organisms shall to maintain cytoplasmic levels of that micronutrient at
non-toxic levels, just sufficient for cell growth and vital metabolic processes. The
metabolism of that metal is strictly controlled by high and low affinity uptake systems.
The objective of this work is to perform heterologous expression of the Atx1 protein,
described in the literature as a copper chaperone, and to analyze its cellular location, as
well as the protein behavior upon copper deprivation in Paracoccidioides spp.
Heterologous expression was performed on electrocompetent cells of Escherichia coli
strain BL21. Identity of the recombinant protein was confirmed by LC-MS / MS. BALB/c
mice were immunized to obtain anti-Atx1 polyclonal antibodies. After performing
immunoblotting the produced antibodies were used in immunofluorescence assays.
Analysis by qRT-PCR allowed us to evaluate the levels of the transcript encoding the
Atx1 protein during copper deprivation in Paracoccidioides spp. / A paracoccidioidomicose (PCM) é uma importante micose da América Latina, causada
por fungos termodimórficos do gênero Paracoccidioides. A homeostase de metais como
cobre, zinco e ferro é importante para a sobrevivência dos fungos no ambiente do
hospedeiro. Nesse contexto, o cobre é um importante cofator para várias enzimas, como
as superóxido dismutases e a citocromo c oxidase. O excesso de cobre livre na célula
promove o acúmulo de espécies reativas de oxigênio, causando danos a ácidos nucléicos,
lipídeos e proteínas. Assim, os organismos devem manter concentrações citoplasmáticas
desses micronutrientes em níveis não tóxicos, apenas suficiente para o crescimento
celular e processos metabólicos vitais. O metabolismo desse metal é rigorosamente
controlado por sistemas de captação de alta e baixa afinidade. O objetivo do trabalho é
realizar a expressão heteróloga da proteína Atx1, descrita na literatura como uma
chaperona citosólica de cobre e analisar a sua localização celular, bem como o
comportamento diante da privação de cobre em Paracoccidioides spp. A expressão
heteróloga foi realizada em células eletrocompetentes de Escherichia coli, cepa BL21. A
identidade da proteína recombinante foi confirmada por LC-MS/MS. Camundongos
BALB/c foram imunizados para obtenção de anticorpos policlonais anti-Atx1. Após
realização de imunoblotting, os anticorpos produzidos foram utilizados para ensaios de
imunofluorescência em células leveduriformes. Análise por qRT-PCR nos permitiram
avaliar os níveis do transcrito codificante da proteína Atx1 durante a privação de cobre
em Paracoccidioides spp.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/8364 |
| Date | 13 April 2018 |
| Creators | Morais, Camila Oliveira Barbosa de |
| Contributors | Soares, Célia Maria de Almeida, Pigosso, Laurine Lacerda, Soares, Célia Maria de Almeida, Fiaccadori, Fabíola Souza, Rocha, Juliana Alves Parente |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Biologia da Relação Parasito-Hospedeiro (IPTSP), UFG, Brasil, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -5087190859350688984, 600, 600, 600, 600, -7769011444564556288, -3854583469976220812, -961409807440757778 |
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