Made available in DSpace on 2015-03-04T18:50:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 graciela.pdf: 3846018 bytes, checksum: 8627ef4106394bfa14dc343ddcfbbbdb (MD5) Previous issue date: 2010-07-21 / Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Vibrios genomes are not fully known. This thesis focused on the annotation of four draft genomes ( V. alginolyticus 40B, V. communis 1DA3, V. mimicus VM603 e VM573), the performance comparison of three automated genome annotations (SABIA, RAST and GRC) and the identification of putative unique genes (strain specific genes) in the genomes. The genomes of Vibrios contained between 3,745 and 4,977 genes, of which 2,900 were real genes, 898 were hypothetic conserved genes and 385 were hypothetic genes. The majority of known gene products were related to general functions and unknown functions (R and S), metabolism and amino acid transport (E) and transcription (K) on the basis of the COG (clusters of ortologs group). The comparison of three automated genome annotation systems indicated that each system had advantages and disadvantagens. The SABIA Server revealed interactivity with many biologic databases, such as InterPro and Swiss-Prot. The RAST server was useful for comparative genomics of specific genomes and metagenomes. The GRC server was useful annotation offline as it can be installed and run on a local computer. The genomes of Vibrios showed differences in the genic content revealled by BLAST atlas and BLAST. Each genome showed 289 to 1,432 unique genes, resulting of comparisons with organisms phylogenetically closest related. The comparison of the genomes of V. alginolyticus 40B and V. alginolyticus 12G01 revealed that 40B has 541 unique genes. The comparison of V. communis 1DA3 and V. campbellii ATTC genome revealed 1,432 unique genes in 1DA3. V. mimicus VM573 and VM603 genomes showed 334 and 289 unique genes, respectively. The vast majority of unique genes were related with carbohidrates, stress response, virulence, cell wall and capsule, indicating that this sub-group of genes may be associated with adaptation of strains to differents habitats and ecologic niches. / Genomas de vibrios ambientais ainda são pouco conhecidos. O presente trabalho de dissertação de mestrado envolveu a anotação de quatro genomas parciais de vibrios ( V. alginolyticus 40B, V. communis 1DA3, V. mimicus VM603 e VM573), a comparação da performance de três sistemas automáticos de anotação de genomas (SABIA, RAST, e GRC) e a determinação de genes putativos únicos de cada um dos quatro genomas. Os genomas de vibrios apresentaram entre 3.745 e 4.977 genes, dos quais em média 2.900 são válidos, 898 são conservados hipotéticos e 385 são hipotéticos. Os genomas apresentaram similaridade em termos de classes de grupos ortólogos com a maioria dos genes válidos identificados nas classes: funções gerais e desconhecidas(R e S), transporte e metabolismo de aminoácidos(E) e transcrição(K) de acordo com as classes de grupos ortólogos (COG) e a maioria das classes foram similares. A comparação entre os anotadores automáticos sugeriu que cada anotador apresenta prós e contras. O anotador SABIA apresenta uma grande interatividade com os bancos de dados biológicos, tais como o InterPro e Swiss-Prot. O anotador RAST é muito útil para comparação genômica do organismo de interesse com os diversos genomas e metagenomas presentes nos bancos públicos, enquanto que o anotador GRC pode ser utilizado localmente, sem a necessidade de acesso à internet. De acordo com as análises comparativas por meio da anotação realizada com o auxílio do BLAST e BLAST Atlas, os genomas de vibrios ( V. alginolyticus 40B, V. communis 1DA3, V. mimicus VM603 e VM573) também apresentaram diferenças em termos de conteúdo gênico, indicando que cada linhagem de vibrio possui sub-grupos de genes únicos. Cada um dos quatro genomas apresentaram de 289 a 1.6432 genes únicos de acordo com o as comparações pareadas com os vizinhos filogenéticos mais próximos disponíveis nos bancos de dados. Assim, a comparação entre os genomas das linhagens V. alginolyticus 40B e V. alginolyticus 12G01 resultou na descoberta de 541 genes únicos na linhagem V. alginolyticus 40B. A comparação entre os genomas de V. communis 1DA3 e V. campbellii ATTC BAA-1116 resultou na descoberta de 1.432 genes únicos na linhagem V. communis 1DA3 e a comparação entre os genomas de V. mimicus VM603 e VM573 resultou na descoberta de 334 e 289 genes únicos, em cada uma destas linhagens. Há um predomínio de genes únicos, sobretudo, pertencentes as classes relacionadas com carboidratos, resposta ao estresse, virulência, aminoácidos e derivados, parede celular e cápsula, sugerindo que estes genes estariam associados com a adaptação das linhagens à diferentes condições ambientais e diferentes nichos ecológicos.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:26:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE ORIONALDA.pdf: 2127265 bytes, checksum: 6265bfc95f48ea602e76fd036eed1634 (MD5) Previous issue date: 2010-10-25 / Diferentes características fenotípicas como formação de cápsula polissacarídica, a expressão de lacase determinando a melanização em substratos fenólicos e produção de enzimas é prováveis fatores de virulência presentes nas espécies do complexo Cryptococcus neoformans. Neste trabalho foi avaliada a espessura da cápsula e da parede celular de isolados de C. neoformans. A atividade da fosfolipase e a suscetibilidade in vitro de C. neoformans à anfotericina B, voriconazol e ao extrato bruto da planta Pimenta pseudocaryophyllus foram também realizados para estes isolados. Os constituintes da célula como cápsula e parede celular foram ainda analisados quando sob a ação dos antifúngicose do extrato bruto da planta. A melanização das células foi obtida usando-se o meio mínimo adicionado de L-DOPA, a produção de fosfolipase foi feita em meio contendo gema de ovo, enquanto a suscetibilidade in vitro do microrganismo foi realizada pelo método de microdiluição em caldo seguindo o protococlo do CLSI. As células extraídas de um meio indutor de cápsula foram submetidas a uma concentração correspondente a 0,5 vezes da CIM obtida no teste de suscetibilidade in vitro, sendo medido o tamanho da cápsula e parede de 30 células de cada isolado e a média destes valores foi calculada. Os valores da espessura da cápsula de isolados de C. neoformans melanizados variaram de 1,20 a 1,90 &#956;m e de 2,63 a 5,12 &#956;m em não melanizados, quando submetidos ao meio de indução de cápsula. Com relação à parede, a variação foi de 0,80 a 1,09 &#956;m em células melanizadas e de 0,40 a 0,49 &#956;m em não melanizadas. A diferença para as medidas de cápsula, como de parede mostrou-se com valores estatisticamente significantes (p <0,05). Todos os isolados de C. neoformans foram capazes de produzir fosfolipase, sendo que os isolados melanizados apresentaram atividade desta enzima em 85,3%, enquanto nos não melanizados o percentual foi de 79,5%. A suscetibilidade do microrganismo melanizado ou não aos antifúngicos e ao extrato da planta mostrou-se equivalente, com a variação de CIM para voriconazol de 0,062-0,125 &#956;g/mL, 0,125-0,5 &#956;g/mL para anfotericina B e de 64 a 128 &#956;g/mL para o extrato bruto de P. pseudocaryophyllus. Os antifúngicos vorioconazol e anfotericina B e extrato bruto de P. pseudocaryophyllus, induziram redução de espessura da cápsula e parede celular de C. neoformans, quando comparados com o controle (ausência do fármaco ou da extrsto de planta) independente da presença ou não da melanina. As alterações verificadas na cápsula e parede celular de C. neoformans neste estudo poderão servir de guias para outras pesquisas direcionadas aos efeitos de antifúngicos na patogenia de criptococose.

O estudo de plantas medicinais possibilita a descoberta de novos compostos bioativos. O aparecimento de microrganismos resistentes aos antibióticos reforça essa pesquisa. Dentre os microrganismos resistentes o Mycobacterium tuberculosis apresenta mutação contínua mudando seu perfil de sensibilidade, acarretando insucesso no tratamento. A busca de propriedades antimicrobianas de extratos de plantas e seus constituintes têm sido incentivada e intensificada. Sendo assim, entre inúmeras espécies vegetais a serem investigadas, destaca-se a Zizyphus joazeiro Mart., pertencente à família Rhamnaceae, que apresenta em sua composição química uma grande diversidade de metabólitos secundários bioativos, destacando-se triterpenóides e alcalóides de grande interesse medicinal. Sua característica principal é que esta árvore resiste muito bem às secas do sertão nordestino, tornando-se dessa forma muito útil tanto para os homens, fornecendo sombra e frutos, como para animais que comem suas folhas mucilaginosas. O objetivo do trabalho, foi avaliar a atividade antimicrobiana, in vitro de extratos de folhas, frutos e casca do caule de Zizyphus joazeiro Mart. contra leveduras e bactérias Gram positivas, Gram negativas e M. bovis. utilizando a técnica de difusão em agar.Todos os extratos brutos apresentaram atividade antimicrobiana. Dos microrganismos utilizados somente Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus e Candida albicans mostraram-se sensíveis. Nenhum dos extratos testados apresentou atividade contra Mycobacterium bovis / The study of medicinal plants enables the discovery of new bioactive compounds. The emergence of microorganisms resistant to antibiotics reinforces this research. Among the microorganisms resistant Mycobacterium tuberculosis shows continuous change by changing their susceptibility profile, resulting in treatment failure. The search for antimicrobial properties of plant extracts and their constituents have been encouraged and intensified. Thus, among many plant species to be investigated, we highlight the juazeiro. Belonging to the family Rhamnaceae, which presents in its composition a wide variety of bioactive secondary metabolites, especially terpenoids, alkaloids of great medical interest. Its main feature is that this tree resists drought very well in the northeastern and became so useful to men, providing shade and fruit, and animals that eat their leaves mucilage. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity in vitro of extracts juazeiro front of microorganisms, including yeasts, Gram-positive bacteria, Gram-negative bacterium Mycobacterium bovis using the technique of agar diffusion. All extracts showed antimicrobial activity. Among the microorganisms evaluated only Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus and Candida albicans were sensitive. None of the evaluated extracts had antimycobacterial activity against Mycobacterium bovis

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3533.pdf: 12329125 bytes, checksum: 19d4177c70f080851ba4d97e52f0f0b7 (MD5) Previous issue date: 2011-03-25 / Financiadora de Estudos e Projetos / The bacterium Streptococcus mutans is one of the main initiators species of biofilm and is related to the etiology of caries. Currently there have been many studies investigating ways to reduce bacterial adhesion and biofilm formation on biomaterials, in order to prevent diseases and infections, such as the use of silver nanoparticles embedded in the materials. However, few studies have investigated the benefits of these particles in materials that are utilized within the oral cavity. The main objective of this research was to compare biofilm formation of this specie on the composite resin in its commercial form today and an experimental composite resin, which were added silver nanoparticles, which are bactericidal, using a method of counting viable cells recovered from the biofilms. Were produced cylindrical specimens of 4 mm in height and circular base of 4 mm in diameter, resin and resin with nanoparticles at three different concentrations, 0.1, 0.3 and 0.6% by mass. They were incubated in liquid medium with sucrose, containing about 108 CFU/ml, to cause bacterial adhesion and biofilm formation in vitro. The count of viable cells from the samples was made after the disintegration of biofilms on them adhered in ultrasonic tank, and was performed after 1 day, 4 days and 7 days of incubation. Considering the mean and standard deviation values, the results showed that on the experimental resins with concentrations of 0.3% and 0.6% of silver nanoparticles, the number of adhered bacterial cells was lower than in resin in its commercial form today, no silver, and also smaller than the resin to 0.1% in the three incubation periods studied. The scanning electron micrograph of a biofilm of S. mutans adhered to the surface of each specimen was also performed after the same time intervals, and allowed morphological analysis of the structure of cells and cell clusters attached to surfaces. A compression test was also performed to verify if the inclusion of antibacterial nanoparticles in the resin does not affect the mechanical performance of the same. The results of this trial showed that the resin with 0.3% concentration of nanoparticle had a better mechanical properties in compression, and resin with a concentration of 0.6% worse performance, compared with the resin without silver nanoparticles, It was concluded that the composites with 0.3% silver nanoparticles are advantageous for clinical application, because it showed how a material less favorable to bacterial adhesion, without prejudice to its mechanical resistance. They may therefore benefit patients, assisting in the prevention of recurrent caries, which occur around the margins of restorations, and in the maintenance of good oral hygiene. / A bactéria Streptococcus mutans é uma das principais espécies iniciadoras do biofilme dentário e está relacionada à etiologia da cárie. Atualmente surgem muitos estudos que buscam novas maneiras de reduzir a adesão bacteriana e a formação de biofilme sobre biomateriais, com a finalidade de prevenir a ocorrência de infecções e a transmissão de doenças, tais como o uso de nanopartículas de prata incorporadas nestes materiais. Porém poucos são os estudos que investigam os benefícios destas partículas em materiais que são empregados dentro da cavidade bucal. O principal objetivo desta pesquisa foi comparar a formação do biofilme desta espécie bacteriana sobre a resina composta fotopolimerizável em sua forma comercial atual e uma resina composta experimental, onde foram acrescentadas nanopartículas de prata, que são bactericidas, utilizando um método de contagem de células viáveis recuperadas dos biofilmes. Foram produzidos corpos de prova cilíndricos, de 4 mm de altura e base circular de 4 mm de diâmetro, de resina e de resina com nanopartículas em três concentrações diferentes, 0,1, 0,3 e 0,6% em massa. Eles foram incubados em meio de cultura líquido com sacarose, contendo cerca de 108 UFC/ml, para que ocorresse a adesão bacteriana e a formação de biofilme, in vitro. A contagem de células viáveis provenientes dos corpos de prova foi feita após a desagregação dos biofilmes sobre eles aderidos em cuba ultrassônica, e foi realizada após 1 dia, 4 dias, e 7 dias de incubação. Considerando-se a média e desvio padrão dos valores, os resultados mostraram que sobre as resinas experimentais com as concentrações de 0,3 % e 0,6 % em massa de nanopartículas de prata, o número de células bacterianas aderidas foi menor do que na resina não modificada, sem prata, e também menor do que na resina a 0,1 %, nos 3 períodos de incubação estudados. A eletromicrografia de varredura do biofilme de S. mutans aderido sobre a superfície de cada corpo de prova foi realizada também após os mesmos intervalos de tempo, e permitiu a análise morfológica das células e da estrutura dos conjuntos celulares aderidos às superfícies. Foi realizado um ensaio de compressão para verificar se a inclusão das nanopartículas bactericidas na resina não prejudica o desempenho mecânico da mesma. Os resultados deste ensaio mostraram que, em comparação com a resina não modificada, a resina com a concentração de 0,3 % de nanopartículas teve um melhor desempenho mecânico em compressão, e a resina com a concentração de 0,6 % um desempenho pior. Concluiu-se que as resinas compostas com 0,3% de nanopartículas de prata são vantajosas para a aplicação clínica, pois se apresentaram como um material menos favorável à adesão bacteriana, sem prejuízo à sua resistência mecânica. Podem portanto beneficiar os pacientes, auxiliando na prevenção das cáries recidivantes, que ocorrem ao redor das margens de restaurações, e na manutenção de uma boa condição de higiene bucal.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-02-16T17:00:17Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Edilânia Gomes Araújo Chaves - 2013.pdf: 3289607 bytes, checksum: 174bfb3cce0a9109022321f4adf3368d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-02-17T16:53:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Edilânia Gomes Araújo Chaves - 2013.pdf: 3289607 bytes, checksum: 174bfb3cce0a9109022321f4adf3368d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-17T16:53:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Edilânia Gomes Araújo Chaves - 2013.pdf: 3289607 bytes, checksum: 174bfb3cce0a9109022321f4adf3368d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-03-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Paracoccicoidioides is the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a disease considered one of the main causes of mortality among systemic mycoses in Brazil. The success in establishing of the infection is related with the ability of fungus to adhere and degrade components of the extracellular matrix (ECM). Human plasminogen (hPlg) is a protein of blood plasma of the host that presents fibrinolytic activity when activated into plasmin. Many pathogens are able to subvert the plasminogen/plasmin system using linker molecules and promote the degradation of tissue barriers. In this work, we identified through Far Western and proteomic analysis, a total of 15 proteins secreted of Paracoccidioides that are plasminogen binding proteins. Those proteins are probable targets of the interaction of the fungus with the host and could contribute to the invasiveness of the fungus. The fructose 1,6-biphosphate aldolase was described in other organisms such as plasminogen binder and presentes participation in the adherence of Paracoccidioides to host cells. This protein selected for validation tests and their presence was observed on the surface and secretory vesicles of the fungus. FBA confirm the ability to convert plasminogen to plasmin in the presence of tissue plasminogen activator (tPA) and this interaction promoted the degradation of fibrin. In infection assays, the addition of antibodies blocking the FBA binding site reduced the interaction of the fungus with macrophages and the interaction of FBA with Plg increased the rate of cell invasion. These data suggest that the FBA can contribute to adhesion, invasion and spread process of the fungus. / Paracoccicoidioides é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), uma doença considerada como primeira causa de mortalidade entre as micoses sistêmicas no Brasil. O sucesso no estabelecimento da infeção está relacionado com a capacidade do fungo de aderir e degradar componentes da matriz extracelular (MEC). O plasminogênio humano (hPlg) é uma proteína presente no plasma, a qual possui atividade fibrinolítica quando é ativado em plasmina. Muitos micro-organismos patogênicos são capazes de subverter o sistema plasminogênio/plasmina através de moléculas ligantes e promovem a degradação de barreiras teciduais. Neste trabalho foram identificadas, através de Far-Western e análise proteômica, um total de 15 proteínas secretadas por Paracoccidioides com habilidade de ligação ao plasminogênio. Essas proteínas são prováveis alvos da interação do patógeno com o hospedeiro, que contribui para o potencial invasivo do fungo. A frutose 1,6-bifosfato aldolase (FBA) foi descrita em outros organismos como ligante de plasminogênio e possui participação na adesão de Paracoccidioides às células do hospedeiro. Selecionamos esta proteína para ensaios de validação e foi observada sua presença na superfície e em vesículas secretoras do fungo. Confirmamos a capacidade da FBA de converter plasminogênio em plasmina na presença do ativador tecidual de plasminogênio (tPA) e essa interação promoveu a degradação de fibrina. Em ensaios de infecção, a adição de anticorpos que bloqueiam o sítio de ligação da FBA reduziu a interação do fungo com macrófagos e a interação de FBA com Plg aumentou o índice de invasão celular. Esses dados sugerem que a FBA pode contribuir no processo de adesão, invasão e disseminação do fungo.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-06-01T22:28:55Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vivianny Aparecida Queiroz Freitas - 2017.pdf: 4680258 bytes, checksum: 0e08c83bdb454e044ddcef0daedb874a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-06-02T11:13:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vivianny Aparecida Queiroz Freitas - 2017.pdf: 4680258 bytes, checksum: 0e08c83bdb454e044ddcef0daedb874a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-02T11:13:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vivianny Aparecida Queiroz Freitas - 2017.pdf: 4680258 bytes, checksum: 0e08c83bdb454e044ddcef0daedb874a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-05-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cryptococcosis is a fungal disease caused by yeasts belonging to the complex Cryptococus neoformans. The antifungal arsenal available for the treatment of this disease is still restricted and is related to the high toxicity and side effects of some drugs, causing great harm to the patients. In this context, it is necessary to discover new bioactives to quell the infections and reduce the adverse effects. The plants have rich source of secondary bioactive metabolites such as tannins, terpenoids, saponins, alkaloids, flavonoids and other compounds, registered with expressive antimicrobial properties. Therefore, the research of natural compounds and derivatives of natural products has been relevant in recent years, due to their relevance in the discovery of new drugs, in addition to which the association of drugs or compounds with different mechanisms of action has been used as an alternative in conventional therapy. We evaluated the mechanisms of action and antifungal effect of natural compounds, curcumin and morin, on Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii isolates. The antifungal activity was determined across the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicide (MFC). Polyphenols showed MICs ranging from 2 to 256 μg/mL. The compounds showed a synergistic interaction in 30% (6/20) and 15% (3/20) of the isolates when dealing with morin and curcumin, respectively, associated with fluconazole. In the interaction with amphotericin B morin presented synergism in 70% (14/20) of the isolates. Both compounds did not exhibit antagonism in any of the combinations. Changes in fungal cell morphology were observed, and in contact with red blood cells, presented low toxicity. The mechanisms of action revealed that both polyphenols act on the membrane of the fungal cell, inhibiting the synthesis of ergosterol and causing damage to it. These results demonstrate the potential of the compounds as natural bioactives, with great impact on the discovery of new drugs and their efficacy to be used in the treatment of fungal infections. / A Criptococose é uma doença fúngica causada por leveduras pertencentes ao complexo Cryptococus neoformans. O arsenal antifúngico disponível para o tratamento dessa doença ainda é restrito e está relacionado à elevada toxicidade e efeitos colaterais de alguns fármacos, causando grande prejuízo aos pacientes Neste contexto, se faz necessário descobrir novos bioativos para debelar as infecções e reduzir os efeitos adversos. As plantas apresentam rica fonte de metabólitos secundários bioativos como taninos, terpenóides, saponinas, alcalóides, flavonoides e outros compostos, registrados com expressiva propriedade antimicrobiana. Portanto, a pesquisa de compostos naturais e derivados de produtos naturais tem sido pertinente nos últimos anos, devido à sua relevância na descoberta de novos medicamentos, além do que, a associação de fármacos ou compostos, com diferentes mecanismos de ação tem sido utilizada como alternativa na terapia convencional. Nós avaliamos os mecanismos de ação e o efeito antifúngico dos compostos naturais, curcumina e morina, sobre isolados de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. A atividade antifúngica foi averiguada através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e fungicida mínima (CFM). Os polifenóis, apresentaram CIMs que variaram de 2 a 256 μg/mL. Os compostos apresentaram interação sinérgica em 30% (6/20) e 15%(3/20) dos isolados se tratando da morina e curcumina, respectivamente, associada ao fluconazol. Na interação com a anfotericina B a morina apresentou sinergismo em 70% (14/20) dos isolados. Ambos os compostos não apresentaram antagonismo em nenhuma das combinações. Alterações na morfologia da célula fúngica foram observadas, e em contato com as hemácias, apresentaram baixa toxicidade. Os ensaios de mecanismos de ação revelaram que ambos os polifenóis atuam na membrana da célula fúngica inibindo a síntese de ergosterol e causando danos a mesma. Estes resultados demonstram o potencial dos compostos como bioativos naturais, apresentando grande impacto na descoberta de novos fármacos e sua eficácia para serem utilizados no tratamento de infecções fúngicas.

Infecções fúngicas invasivas estão associadas a altos índices de morbidade e mortalidade, sendo causadas principalmente por leveduras do gênero Candida. A formação de biofilmes tem sido considerada um dos principais fatores associados à virulência destas leveduras, devido, principalmente, à maior resistência às terapias antimicrobianas apresentada pelas células sésseis em comparação às células planctônicas. Torna-se necessária a seleção de antifúngicos eficazes na terapêutica das infecções associadas a biofilme. O presente estudo tem por objetivo avaliar e comparar o efeito de antifúngicos sintéticos (Fluconazol e Anfotericina B) e bioativos vegetais (Guttiferona A e 7-Epiclusianona) em biofilmes e suspensões celulares de Candida spp. isoladas de ambiente hospitalar. Foram coletadas 180 amostras, havendo uma frequência de distribuição de 17,8% de isolados de Candida spp., provenientes principalmente das mãos de profissionais (28% das amostras), locais de preparo e armazenamento de medicamentos (16%) e leitos de pacientes (16%). As espécies mais isoladas foram do complexo C. parapsilosis (59%), C. tropicalis (19%), consideradas as espécies mais associadas à candidemia na América Latina, e C. guilliermondii (13%), associada a fenômenos de resistência cruzada e multirrestistência, não sendo isolada amostra de C. albicans. Todas as amostras isoladas foram capazes de produzir biofilme, com biofilmes metabolicamente ativos. Biofilmes do complexo C. parapsilosis e C. tropicalis apresentaram menor atividade metabólica em relação aos isolados de C. famata, C. glabrata e C. guilliermondii. Os isolados não apresentaram resistência a Fluconazol e Anfotericina B e os bioativos demonstraram atividade. Os resultados dos testes de sensibilidade em biofilmes demonstram um grande aumento dos valores de IC quando comparados aos valores obtidos para células planctônicas, variando de 256 a >2.048 vezes no caso do Fluconazol e de 16 a 256 vezes para Anfotericina B. Os bioativos vegetais estudados apresentaram boa atividade sobre biofilmes, especialmente a Guttiferona-A. Os resultados demonstram a importância da implementação de técnicas padronizadas de ensaio de sensibilidade antifúngica em biofilmes e a importância da pesquisa de contaminação ambiental, auxiliando no estabelecimento da cadeia epidemiológica de infecções em ambientes hospitalares. / Invasive fungal infections are associated with high morbidity and mortality, mainly caused by Candida. The formation of biofilms has been considered one of the main factors associated with the virulence of these strains, primarily due to increased resistance to antimicrobial therapies presented by sessile cells compared to planktonic cells. It is necessary to select the effective antifungal therapy for infections associated with biofilm. The present study aims to evaluate and compare the effect of synthetic antifungals (Fluconazole and Amphotericin B) and plant bioactives (Guttiferone-A and 7-Epiclusianone) in biofilms and cell suspensions of Candida spp. isolated from the hospital environment. 180 samples were collected, with an incidence of 17.8% of isolates of Candida spp., isolated mainly from the hands of professionals (28% of samples), drug storage and preparation places (16%) and beds of patients (16%). The isolated Candida species were mainly Candida parapsilosis complex (59%) and C. tropicalis (19%), the species considered most associated with candidemia in Latin America, and C. guilliermondii (13%), associated with cross-resistance, not being isolated any sample of C. albicans. All isolates were able to produce biofilm, with metabolically active biofilms. The biofilms of C. parapsilosis complex and C. tropicalis showed lower metabolic activity in relation to isolates of C. famata, C. glabrata and C. guilliermondii. The isolates showed no resistance to Fluconazole and Amphotericin B and bioactives demonstrated activity. Results of Susceptibility Tests in biofilms showed a large increase in IC in biofilms for all tested substances. The plant bioactives studied showed good activity against biofilms, especially Guttiferone-A. The results demonstrate the importance of implementing standardized techniques for antifungal susceptibility testing in biofilms and of environmental contamination research, helping to establish the epidemiological chain of infections in hospital environments.

Este estudo visou comparar as leveduras do gênero Candida encontradas em fontes de infecção com as leveduras colonizantes de diversos locais de superfície e ambiente, tendo como critérios os fatores associados à virulência. Houve um predomínio de Candida albicans (32%) seguido de C. parapsilosis (20%), C. lusitaniae (20%), C. krusei (8%) e C. guilliermondii (4%) em fontes de infecção. Em relação às espécies colonizantes, observaram-se C. tropicalis (33,4%), C. lusitaniae (21,2%), C. parapsilosis (18,2%), C. albicans (15%), C. famata (6,1%) e C. guilliermondii (6,1%). Quanto aos fatores associados à virulência observou-se ß hemólise em 19,7% dos isolados, α hemólise em 21,3% e não foi observada atividade hemolítica em 70% dos isolados. Dentre as amostras, houve sensibilidade para Anfotericina B em 100% das mesmas e em 98,57% para fluconazol. Das leveduras de C. albicans provenientes de fontes de infecção 100% demonstraram potencial de formação de biofilme. As espécies não-albicans com maior produção de biofilme foram C. krusei (100%), C. parapsilosis (75%), C. tropicalis (75%). Nas amostras oriundas de colonização, 100% de C. albicans desenvolveram biofilme e dentre as não-albicans destacaram-se C. parapsilosis (80%), C. tropicalis (77,78%). Elevadas capacidade de formação de biofilme e atividade metabólica foram observadas em 35,3% das espécies de Candida spp. Em Candida spp provenientes de fontes de colonização 33,3% apresentaram capacidade intermediária de produção de biofilmes mas com atividade metabólica alta. / This study aims to compare the Candida species recovered from sources of infection with ones that are colonizing various sites and surface at the environment, having as criteria the factors associated with virulence. There was a predominance of C.albicans (32%) followed by C. parapsilosis (20%), C. lusitaniae (20%), C. krusei (8%) and C. guilliermondii (4%) at sources of infection. For the colonizing species we observed C. tropicalis (33.4%), C. lusitaniae (21.2%), C. parapsilosis (18.2%), C. albicans (15%), C. famata (6.1%) and C. guilliermondii (6.1%). Regarding the factors associated with virulence β hemolysis was observed at 19.7% of the isolates and α hemolysis at 21.3% and it wasn’t seen hemolytic activity at 70% of the isolates. Among the isolates it was observed susceptibility for amphotericin B at 100% of the ones and at 98.57% for fluconazole. Among C. albicans from sources of infection 100% demonstrated the potential of biofilm formation. The non-albicans species with increased biofilm production were C. krusei (100%), C. parapsilosis (75%), C. tropicalis (75%). In isolates from colonization, 100% of C. albicans developed biofilm and among non-albicans species, predominated C. parapsilosis (80%), C. tropicalis (77.78%). High capacity for biofilm formation and metabolic activity were observed at 35,3% of the isolates. In Candida spp from sources of colonization 33.3% showed intermediate capacity to produce biofilms but with high metabolic activity.

O uso indiscriminado de antimicrobianos pode estar associado ao fenômeno da resistência microbiana, levando ao insucesso no tratamento das infecções e impulsionando a busca por novas alternativas terapêuticas, dentre elas, os bioativos obtidos a partir de fontes vegetais. Foi avaliada a atividade antimicrobiana de extratos hidroetanólicos de plantas sobre bactérias Gram positiva, Gram negativa, leveduras, Mycobacterium tuberculosis H37 e Mycobacterium bovis pela técnica de difusão em agar e microdiluição em caldo. Dentre os extratos avaliados pelo método de difusão em agar, o extrato de Bidens pilosa folha apresentou a mais expressiva média de halos de inibição de crescimento frente aos microrganismos utilizados, seguido por Bidens pilosa flor, E. pyriformis folha, M. cauliflora folha e E. pyriformis semente que apresentaram estatisticamente a mesma média de formação de halos inibitórios sobre bactérias Gram positivas, Gram negativas e leveduras. Os extratos de Heliconia rostrata não apresentaram atividade. Mycobacterium tuberculosis H37 e Mycobacterium bovis mostraram-se resistentes a todos os extratos. Dos microrganismos avaliados, as bactérias Gram positivas M. luteus e S. aureus apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade (p>0.05). As bactérias Gram negativas E. coli, E. cloacae, S. marcescens e P. aeruginosa também apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade frente aos extratos (p>0.05). O perfil de senbilidade dos fungos C. albicans e S. cerevisiae foram comparáveis entre si e entre as bactérias Gram positivas B. subtilis, E. faecalis e Gram negativa S. typhimurium (p>0.05). Os extratos que apresentaram ação inibitória através do ensaio de microdiluição em caldo foram os mesmos extratos ativos no teste de difusão em agar. A avaliação da citotoxicidade foi realizada sobre células C6-36 de larvas de mosquito Aedes albopictus. Os extratos de caule e flor de Heliconia rostrata, folha e caule de Plinia cauliflora, semente de Anonna crassiflora e caule, flor e raiz de Bidens pilosa não apresentaram toxicidade nas concentrações avaliadas. Os maiores índices de seletividade foram apresentados pelos extratos de A. crassiflora caule e B. pilosa flor para S. aureus, apresentando potencial para estudos como futuros candidatos a fármacos. Dos microrganismos avaliados, as bactérias Gram positivas M. luteus e S. aureus apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade (p>0.05). Dos microrganismos que apresentaram alguma sensibilidade a qualquer um dos extratos, M. bovis, P. aeruginosa, S. marcescens, E. cloacae e E. coli foram estatisticamente, igualmente os menos sensíveis. Apenas os extratos de B. pilosa folha apresentou igualdade, estatisticamente significativa, da média de efetividade inibitória quando comparado ao controle positivo, a clorexidina / The indiscriminate use of antibiotics may be associated with the phenomenon of microbial resistance, leading to infections treatment failure and boosting the search for new therapeutic alternatives, among them, the bioactive obtained from plant sources. We evaluated the antimicrobial activity of hydroethanolic extracts of plants on Gram positive, Gram negative bacteria, yeasts, Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis H37 through agar diffusion and broth microdilution techniques. Among the extracts evaluated through agar diffusion method, the leaf extract of Bidens pilosa showed the most significant average halos of growth inhibition against microorganisms used, followed by flower of Bidens pilosa leaf E. pyriformis, sheet M. cauliflora seed and E. pyriformis showed that statistically the same average formation of inhibitory halos on Gram positive bacteria, Gram negative bacteria and yeast. Extracts of Heliconia rostrata showed no activity. Mycobacterium bovis and Mycobacterium tuberculosis H37 were resistant to all extracts. Of the tested microorganisms, Gram positive bacteria M. luteus and S. aureus showed the same sensitivity profile (p> 0.05). Gram negative bacteria E. coli, E. cloacae, S. marcescens and P. aeruginosa also showed the same sensitivity profile compared to extracts (p> 0.05). The sensitivity profile of the fungi C. albicans and S. cerevisiae and were comparable between the Gram-positive B. subtilis, E. faecalis and Gram negative bacteria S. typhimurium (p> 0.05). The extracts which showed inhibitory action by microdilution sample test were the same active extracts as in agar diffusion test. The Cytotoxicity assessment was performed on cell C6-36 larvae of Aedes albopictus. The extracts of Heliconia rostrata’s stem and flower, Plinia cauliflora’s leaf and stem, crassiflora Annona’s seed and stem, Bidens pilosa's root and flower showed no toxicity at the evaluated concentrations. The highest selectivity were presented by stem extracts of A. crassiflora and Bloom B. pilosa as for S. aureus there is potential for studies on future drug candidates. Of the tested microorganisms, Gram positive bacteria M. luteus and S. aureus showed the same sensitivity profile (p> 0.05). The sensitivity profile of the fungi C. albicans and S. cerevisiae and were compared one another and to B. subtilis, E. faecalis Gram positive and S. typhimurium Gram negative bacteria (p> 0.05). Among the microorganisms which showed some sensitivity to any of the extracts, M. bovis, P. aeruginosa, S. marcescens, E. and E. cloacae coli were statistically also less sensitive. Only the leaf extracts of B. pilosa showed statistically significant equality of the average inhibitory effectiveness when compared to the positive control and chlorhexidine

Candida spp. se tornaram, nas últimas décadas, importantes agentes causadores de infecções invasivas, responsáveis por altos índices de morbidade e mortalidade. Acredita-se que a aspartato protease secretada (Sap) seja um fator diretamente associado aos processos infecciosos exercendo papel determinante na patogenicidade de Candida spp. e que a exposição a concentrações subinibitórias de antifúngicos, pode aumentar a produção de Sap e selecionar isolados resistentes. Analisaram-se isolados de Candida albicans e Candida não-albicans oriundos de casos de infecção hospitalar. Avaliou-se o perfil proteico destes isolados por eletroforese SDS-PAGE. Avaliou-se, também, o perfil de sensibilidade dos isolados frente a antifúngicos de uso convencional em esquemas terapêuticos (fluconazol e anfotericina B) e a antifúngicos mais novos que ainda não fazem parte das rotinas hospitalares (voriconazol e caspofungina). Determinou-se a atividade proteolítica qualitativa e quantitativa de Sap e atividade metabólica de C. albicans e Candida não-albicans cultivados na presença e ausência de concentrações subinibitórias de fluconazol e anfotericina B. Estabeleceu-se a correlação entre os testes e por fim, avaliou-se a expressão do gene SAP2 em C. albicans ATCC 64548 e C. krusei ATCC 6258. 100% dos isolados foram sensíveis a anfotericina B, voriconazol e caspofungina e 89,9% a fluconazol. Dois isolados (7,4%) apresentaram sensibilidade dependente da dose e um (3,7%) apresentou resistência ao fluconazol. Na análise qualitativa da atividade proteolítica, 77,7% dos isolados apresentaram atividade. A maioria dos isolados de C. albicans (50%) e Candida não-albicans (32%) apresentou atividade proteolítica moderada. A adição de fluconazol ao cultivo não promoveu alterações significativas na atividade proteolítica dos isolados padrões, enquanto anfotericina B inibiu o crescimento de C. glabrata ATCC 90030 e C. krusei ATCC 6258. Na análise quantitativa, todos os isolados se apresentaram ativos, sendo que a maior atividade foi observada em Candida complexo “psilosis” 210 (100%) e a menor em C. albicans 257 (2,44%). A maioria dos isolados de C. albicans (50%) foi classificada como fracamente proteolítica, enquanto Candida não-albicans (53%) como moderadamente proteolítica. A presença de antifúngicos no cultivo alterou significativamente o percentual de degradação da maioria dos isolados. A maior diferença de percentual foi observada em C. lusitaniae 286, que na presença de ¼ da IC90 de anfotericina B aumentou 13,7x em relação à ausência do fármaco. O método quantitativo de determinação da atividade proteolítica apresentou maior sensibilidade. 63% dos isolados de C. albicans apresentaram alta atividade metabólica e 68% de Candida não-albicans, atividade moderada. A maior atividade metabólica foi observada em C. albicans 120 (61,72%) e a menor em C krusei ATCC 6258 (2,35%). A atividade metabólica da maioria dos isolados foi significativamente alterada. A maior diferença de percentual foi observada em Candida complexo “psilosis” 210, que na presença de ½ da IC50 de fluconazol apresentou redução de 8x na atividade metabólica em relação à ausência do fármaco. Houve expressão de SAP2 apenas em C. albicans ATCC 64548, que foi reduzida significativamente na presença de ¼ da IC90 de anfotericina B. A atividade de Sap pode ser considerada um fator potencial associado à virulência, uma vez que o isolado que apresentou a maior atividade apresentou sensibilidade antifúngica reduzida. / Candida spp. has become in recent decades, major causative agents of invasive infections, responsible for high rates of mortality and morbidity. It is believed that the secreted aspartate protease (Sap) is a factor directly associated with infection exerting decisive role in the pathogenicity of Candida spp. and that the exposure to subinibitory concentrations of antifungals may increase the production of Sap and to select resistant isolates. We analyzed isolates of Candida albicans and Candida non-albicans from cases of hospital infection. We evaluated the protein profile of the isolates of Candida spp. by SDS-PAGE. We evaluated also the susceptibility profile of the isolates against antifungals of use conventional in regimens therapeutics (fluconazole and amphotericin B) and newer antifungals that are not yet part of the hospital routine (voriconazole and caspofungin). It was determined the proteolytic activity qualitative and quantitative of Sap and metabolic activity of isolates of C. albicans and Candida non-albicans grown in the presence and absence of subinhibitory concentrations of fluconazole and amphotericin B. Was established the correlation between the tests and, finally, the expression of the SAP2 gene in C. albicans ATCC 64548 and C. krusei ATCC 6258 was evaluated. 100% of the isolates were susceptible to amphotericin B, voriconazole and caspofungin and 89.9% to fluconazole. Two isolates (7.4%) showed susceptibility dose dependent and one (3.7%) showed resistance to fluconazole. In the qualitative analysis of proteolytic activity, 77.7% of the isolates showed activity. The most isolates of C. albicans (50%) and Candida non-albicans (32%) had moderate proteolytic activity. The addition of fluconazole to culture did not promote significant changes in the proteolytic activity of the isolates patterns, while amphotericin B inhibited the growth of C. glabrata ATCC 90030 and C. krusei ATCC 6258. In quantitative analysis, all isolates were active, being that the highest activity was observed in Candida complex “psilosis” 210 (100%) and the lowest in C. albicans 257 (2.44%). The most of the C. albicans isolates (50%) were classified as weakly proteolytic, while Candida non-albicans (53%) as moderately proteolytic. The presence of antifungals in the culture significantly changed the percentage of substrate degradation of the most of isolates. The greatest difference of percentage was observed in C. lusitaniae 286, which in the presence of ¼ IC90 of amphotericin B increased 13.7x regarding to absence of the drug. The quantitative method of determining the proteolytic activity presented greater sensitivity. 63% of the isolates of Candida albicans showed high metabolic activity and 68% of Candida non-albicans had moderate activity. The higher metabolic activity was observed in C. albicans 120 (61.72%) and lowest in C krusei ATCC 6258 (2.35%). The metabolic activity of the most of the isolates was significantly altered. The major difference of percentages was observed in Candida complex “psilosis” 210, which in the presence of ½ IC50 of fluconazole showed reduction of 8x in the metabolic activity regarding to absence of the drug. There was expression of SAP2 only in C. albicans ATCC 64548, which was significantly reduced in the presence of ¼ IC90 of amphotericin B. The Sap activity may be considered a potential factor associated to virulence, once that the isolate that showed the greatest activity showed susceptibility reduced. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES