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Efeito inibitório de drogas antituberculose frente à Histoplasma capsulatum var. capsulatum e Cryptococcus spp. : síntese de análogos químicos, atividade antifúngica in vitro e mecanismo de ação / Inhibitory effect of antituberculosis drugs against H. capsulatum var. capsulatum and Cryptococcus spp. : synthesis of chemical analogues, antifungal activity in vitro and mechanism of action.

Marques, Francisca Jakelyne de Farias January 2013 (has links)
MARQUES, Francisca Jakelyne de Farias. Efeito inibitório de drogas antituberculose frente à Histoplasma capsulatum var. capsulatum e Cryptococcus spp. : síntese de análogos químicos, atividade antifúngica in vitro e mecanismo de ação. 2013. 116 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-04-08T13:29:35Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_fjfmarques.pdf: 1708517 bytes, checksum: 5f8bebad58291a654fe5aa6509b143fb (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-04-08T13:48:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_fjfmarques.pdf: 1708517 bytes, checksum: 5f8bebad58291a654fe5aa6509b143fb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-08T13:48:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_fjfmarques.pdf: 1708517 bytes, checksum: 5f8bebad58291a654fe5aa6509b143fb (MD5) Previous issue date: 2013
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Detecção de integrons e genes cassetes relacionados com a resistência a antimicrobianos em Vibrio spp. isolados de hemolinfa de camarões Litopenaeus vannamei (BONNE, 1931)

Carvalho, Edirsana Maria Ribeiro de January 2013 (has links)
CARVALHO, E. M. R. de. Detecção de integrons e genes cassetes relacionados com a resistência a antimicrobianos em Vibrio spp. isolados de hemolinfa de camarões Litopenaeus vannamei (BONNE, 1931). 2013. 136 f. Tese (doutorado) - Universidade Federal do Ceará, Instituto de Ciências do Mar, Programa de Pós-Graduação em Ciências Marinhas Tropicais, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Nadsa Cid (nadsa@ufc.br) on 2014-07-21T16:54:31Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_emrdecarvalho.pdf: 2633826 bytes, checksum: ba52c175c608828ed8d0b10b3f3bac09 (MD5) / Approved for entry into archive by Nadsa Cid(nadsa@ufc.br) on 2014-07-21T17:26:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_emrdecarvalho.pdf: 2633826 bytes, checksum: ba52c175c608828ed8d0b10b3f3bac09 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-21T17:26:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_emrdecarvalho.pdf: 2633826 bytes, checksum: ba52c175c608828ed8d0b10b3f3bac09 (MD5) Previous issue date: 2013 / The objective of this study was to evaluate the resistance profile and the presence of resistance gene cassettes in vibrios isolated from shrimp hemolymph. Shrimp (n=80) were collected from four farms in Acaraú (A and B) and Aracati (C and D), Northeastern Brazil. The hemolymph was evaluated quantitatively for vibrios by spread plating. In the samples from Farms A and B, vibrio counts ranged from <10 to 3.4 x 106 CFU/mL and from <10 to 3.5 x 10³ CFU/mL, respectively. The corresponding figures for Farms C and D were <10 to 8.5 x 10³ CFU/mL and <10 to 1.6 x 10³ CFU/mL. All but one of the isolates from Acaraú (81/82) were identified down to the species: V. alginolyticus, V. coralliilyticus, V. harveyi, V. parahaemolyticus and V. mimicus. In the samples from Aracati, 41 isolates were identified, predominantly V. coralliilyticus, V. cholerae, V. mimicus and V. parahaemolyticus. Approximately 28% of the strains were resistant to at least one of the antibiotics tested. The antibiotics GEN, NAL, NIT, SUT, CIP, CLO and FLF were efficient. The drugs to which resistance was observed included AMP, CFL, ERI, TET and OTC. A considerable number of strains (87.9%) displayed intermediate levels of resistance while multiresistance was observed for 52 strains (41.6%). The MAR index of strains resistant to two or more antibiotics ranged from 0.2 to 0.26. The minimum inhibitory concentration of the isolates was 80-160 µg/L (AMP), 32-512 µg/L (CFL), 64-512 µg/L, 64-256 µg/L (ERI) and 128 µg/L (OTC). Following plasmidial curing, 52% (n=13) of the isolates displayed unchanged resistance profiles, while 48% changed to intermediate levels. In 32%, the gene intI1 was detected, while the gene was present in 100% of the plasmids, along with the cassettes blaP1 and ereA2. The finding of resistance to clinical antibiotics (AMP and CFL) suggests such drugs may have been released into the environment. The high level of intermediate resistance may be the result of survival-driven mutagenic processes. The observed resistance was of chromosomal origin or related to stable mobile elements. The presence of class 1 integrons in the chromosome and plasmids of vibrios isolated from shrimp hemolymph may pose a threat to the aquatic environment since integrons can be transferred between microorganisms. / O objetivo da pesquisa foi estabelecer perfis de resistência a diferentes antimicrobianos e detectar integrons e genes cassetes em Vibrio spp. da hemolinfa de camarões. Foram realizadas duas coletas em quatro fazendas, localizadas nos municipios de Acaraú (A e B) e Aracati (C e D). Em cada coleta foram utilizados 10 exemplares, totalizando 80 camarões. Nas amostras de hemolinfa dos camarões originários de Acaraú, as contagens de Vibrio spp. variaram de <10 a 3,4 x 106 UFC/mL , em B foram de <10 a 3,5 x 10³ UFC/mL. Em Aracati, as contagens foram < 10 a 8,5 x 10³ UFC/mL (fazenda C) e de <10 a 1,6 x 10³ UFC/mL (fazenda D). As 82 estirpes isoladas das amostras originadas das fazendas A e B foram identificadas até espécie, sendo as mais frequentes: V. alginolyticus; V. coralliilyticus; V. harveyi; V. parahaemolyticus e V. mimicus. A partir das amostras das fazendas C e D, 41isolados foram identificados, sendo que as espécies de maior frequência foram: V. coralliilyticus; V. cholerae, V. mimicus; V. parahaemolyticus. Vinte e oito por cento dos isolados apresentaram resistência a pelo menos um dos antimicrobianos testados. Os fármacos para os quais os micro-organismos apresentaram resistência foram: AMP, CFL, ERI, TET e OTC. Os antimicrobianos GEN, NAL, NIT, SUT, CIP, CLO e FLF foram eficazes contra as estirpes testadas. Observou-se que 87,9% das estirpes foram resistentes intermediárias e constatou-se multirresistência em 41,6%. O índice MRA entre as resistentes, variou de 0,2 a 0,26. Os valores de CIM para os isolados foram: para AMP de 80 a 160 µg/L; para CFL de 64 a 512 µg/L; para ERI de 64 a 256 µg/L e para OTC, de 128 µg/L. Entre os isolados que não apresentaram alteração na resistência após a “cura” foram de 52%, porém, 48% passaram a ser intermediárias. As 25 estirpes de Vibrio com resistência múltipla foram selecionadas para testes de biologia molecular, sendo que 32% delas apresentaram o gene intI1. Nos plasmídios, esse percentual foi de 100%, com presença de genes cassetes blaP1 e ereA2. Conclui-se pela presença de estirpes resistentes a fármacos clínicos (AMP e CFL), que resíduos dessas drogas podem estar no ambiente. O alto percentual de intermediários pode estar relacionado a alguma mutação que os isolados estejam sofrendo para sobreviver no ambiente. A origem genética da resistência pode estar relacionada ao cromossomo ou a elementos móveis estáveis. Os integrons detectados no cromossomo e em plasmídios no genoma dos víbrios é uma variável importante para o entendimento da dinâmica de transferência de resistência no ambiente aquático.
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Estratégias de estocagem de sporothrix spp. e análise da sensibilidade das cepas ante aos derivados terpênicos farnesol e terpinen-4-ol in vitro / Porotrichosis is a subcutaneous mycosis that affects humans and animals caused by the dimorphic fungi of the genus Sporothrix

Silva, Natalya Fechine January 2014 (has links)
SILVA, Natalya Fechine. Estratégias de estocagem de sporothrix spp. e análise da sensibilidade das cepas ante aos derivados terpênicos farnesol e terpinen-4-ol in vitro. 2014. 62 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-04-29T13:40:44Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_nfsilva.pdf: 1031976 bytes, checksum: f1b00a7bbed02907d8e918295451ee8e (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-04-29T13:45:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_nfsilva.pdf: 1031976 bytes, checksum: f1b00a7bbed02907d8e918295451ee8e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-29T13:45:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_nfsilva.pdf: 1031976 bytes, checksum: f1b00a7bbed02907d8e918295451ee8e (MD5) Previous issue date: 2014 / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis that affects humans and animals caused by the dimorphic fungi of the genus Sporothrix. The storage of such microorganisms in culture collections is necessary to monitor the strains of Sporothrix spp. over the years. Despite the existence of effective antifungal therapies against this disease the search for new drugs for the treatment is necessary. Compounds such as farnesol and terpinen-4-ol have been tested against yeasts and filamentous fungi and have shown a broad antifungal spectrum. Thus, the present study aimed to seek new strategies for the preservation of biological and genetic patrimony of the genus Sporothrix, evaluate the in vitro inhibitory activity of farnesol and terpinen-4-ol against strains of Sporothrix spp., as well as evaluating the mechanisms of action of these compounds. Regarding the storage, 20 Sporothrix spp. strains were used and stocked under the following conditions: saline (0.9% NaCl) at 4 °C, 10% glycerol plus 10% lactose and 10% glycerol plus 10% sucrose maintained at -20 °C and -80 °C, stocked in intervals of 3, 6 and 9 months. The viability of the strains was evaluated by the macro and micromorphological aspects. For this purpose, the samples were subcultured in potato agar for seven days at 28 °C and evaluated for texture and pigmentation of the strains. For the micromorphological analysis, conidia count was performed using the ranges of 0-10, 10-50, 50-100 and >150 conidia as reference ranges. 40 Sporothrix spp. strains in the filamentous phase were used for the analysis of the inhibitory activity of the terpenes. The study was conducted using broth microdilution assay, described in M38-A2 document, standardized by CLSI. 16 Sporothrix spp. strains were used for the investigation of the mechanism of action of the terpenes in relation to the cell membrane permeability and readings were performed in a spectrophotometer at a wavelength of λ=260 nm, in order to verify the amount of nucleic acid and at λ=280 nm, in order to verify the amount of protein released into the medium. Sporothrix spp. strains showed 100% viability for growth on potato agar in all stock conditions tested, while in relation to the conidia count the stock methods that showed better results were saline at 4 °C, glycerol plus lactose and glycerol plus sucrose kept at -20 °C. The terpenes farnesol and terpinen-4-ol inhibited all Sporothrix spp. isolates tested with MIC values ranging from 0.015 to 1.0 mM for farnesol (geometric mean of 0.09) and 0.57 to 9.27 mM for terpinen-4-ol (geometric mean of 2.35). CFM values ranged between 0.125 to 4.0 mM and 1.15 to 37.1 mM for farnesol and terpinen-4-ol, respectively. Farnesol was the most active compound for all Sporothrix strains. There was no significant loss of intracellular material after treatment of fungal cells with concentrations of MIC and MIC/2 of terpenes tested when compared to the corresponding untreated samples. Therefore, it was observed that the terpenes showed no ability to lyse the Sporothrix cells, suggesting that its main mechanism of action is not associated with irreversible damage to the cell membrane structure. Thus, further studies are needed to better understand the mechanisms involved in the antifungal activity of the terpenes evaluated. / A esporotricose é uma micose subcutânea que acomete humanos e animais, causada pelos fungos dimórficos do gênero Sporothrix. A estocagem de tais micro-organismos em coleções de culturas se faz necessária para o monitoramento das cepas de Sporothrix spp. ao longo dos anos. Apesar da existência de terapias antifúngicas eficazes contra esta doença, a busca por novas drogas para o tratamento se faz necessária. Compostos como farnesol e terpinen-4-ol foram testados frente a leveduras e fungos filamentosos e têm demonstrado um amplo espectro antifúngico. Desta maneira, o presente trabalho teve por objetivo buscar novas estratégias de preservação do patrimônio biológico e genético de espécies do gênero Sporothrix, avaliar a atividade inibitória in vitro de farnesol e terpinen-4-ol frente a cepas de Sporothrix spp., bem como avaliar os mecanismos de ação desses compostos. Em relação à estocagem foram utilizadas 20 cepas de Sporothrix spp. nas seguintes condições: em solução salina (NaCl a 0,9%) à 4 °C, glicerol 10% acrescido de lactose 10% e glicerol 10% acrescido de sacarose 10% mantidas nas temperaturas de -20 °C e -80 °C, estocadas nos intervalos de tempo de 3, 6 e 9 meses. A viabilidade das cepas foi avaliada através dos aspectos macro e micromorfológicos. Para tanto, as amostras foram repicadas em ágar batata e, após sete dias de incubação a 28 °C foram avaliados quanto à textura e pigmentação das cepas. Para a análise micromorfológica foi feita a contagem de conídios, tendo como referência os seguintes intervalos de 0-10, 10-50, 50-100 e >150 conídios. Para a análise da atividade inibitória dos compostos foram utilizadas 40 cepas de Sporothrix spp. na fase filamentosa. O estudo foi desenvolvido utilizando ensaio de microdiluição em caldo, descrito no documento M38-A2, padronizado pelo CLSI. Para a investigação do mecanismo de ação das drogas em relação à permeabilidade da membrana celular, foram utilizadas 16 cepas de Sporothrix spp. e realizadas leituras em espectrofotômetro nos comprimentos de onda de λ = 260 nm, com intuito de verificar a quantidade de ácido nucleico e λ = 280 nm, com intuito de verificar a quantidade de proteína liberada no meio. As cepas de Sporothrix spp. apresentaram viabilidade de 100% para o crescimento em ágar batata em todas as condições de estoque testadas, enquanto que em relação à contagem de conídios os métodos de estoque que apresentaram melhor resultado foram a solução salina a 4°C, glicerol acrescido de lactose e glicerol acrescido de sacarose mantidos a -20°C. Os derivados terpênicos farnesol e terpinen-4-ol inibiram todos os isolados de Sporothrix spp. testados com valores de CIM variando de 0,015 a 1,0 μM para o farnesol (média geométrica de 0,09) e de 0,57 a 9,27 mM para terpinen-4-ol (média geométrica de 2,35). Os valores CFM variaram entre de 0,125 a 4,0 μM e de 1,15 a 37,1 mM para farnesol e terpinen-4-ol, respectivamente. Farnesol foi o composto mais ativo para as todas as cepas de Sporothrix. Não houve perda significativa de material intracelular após tratamento das células fúngicas com concentrações de CIM e CIM/2 dos terpenos testados quando comparados com as correspondentes amostras não tratadas. Dessa forma, foi possível observar que os terpenos não apresentaram capacidade de lise frente às células de Sporothrix, o que sugere que seu principal mecanismo de ação não está relacionado com danos irreversíveis na estrutura da membrana celular. Assim, novos estudos são necessários para melhor compreensão dos mecanismos envolvidos na atividade antifúngica dos terpenos avaliados.
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Histoplasmose em indivíduos HIV positivos no estado do Ceará : estudo clínico epidemiológico e teste de sensibilidade antimicrobiana de cepas de Histoplasma capsulatum var. Capsulatum / Histoplasmosis in HIV-positive individuals in the state of Ceará : clinical epidemiological study and antimicrobial susceptibility testing Histoplasma capsulatum strains var. capsulatum

Fechine, Maria Auxiliadora Bezerra January 2011 (has links)
FECHINE, Maria Auxiliadora Bezerra. Histoplasmose em indivíduos HIV positivos no estado do Ceará : estudo clínico epidemiológico e teste de sensibilidade antimicrobiana de cepas de Histoplasma capsulatum var. Capsulatum. 2011. 145 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-18T16:39:36Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_mabfechine.pdf: 2306536 bytes, checksum: 9a4341ab0036a97ed174ec65665bcd65 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-05-18T16:40:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_mabfechine.pdf: 2306536 bytes, checksum: 9a4341ab0036a97ed174ec65665bcd65 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-18T16:40:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_mabfechine.pdf: 2306536 bytes, checksum: 9a4341ab0036a97ed174ec65665bcd65 (MD5) Previous issue date: 2011 / Histoplasmosis, caused by the fungus Histoplasma capsulatum, is the most prevalent of the systemic mycoses and a marker disease for acquired immune deficiency syndrome (AIDS). A descriptive analysis was carried out of 254 cases of patients suffering from histoplasmosis and AIDS between 2006 and 2010 in the state of Ceará, northeastern Brazil, noting the epidemiological, clinical, laboratory and therapeutic aspects. Additionally, the in vitro sensitivity profile of strains of H. capsulatum in the filamentous and yeast phases was tested by the microdilution method against the antifungals amphotericin B, fluconazole, itraconazole, voriconazole and caspofungin and the combined antimicrobial sulfametoxazol-trimetoprim, according to protocol M-27A2 from the CLSI. The results were compared with those of strains obtained from southeastern Brazil. In 39.37% of the cases, histoplasmosis was the first event indicating AIDS and in 80.4% of the patients the CD4 cell count was under 100 cells/ml. The levels of lactate dehydrogenase were high in all the patients evaluated, with impaired hepatic and renal function evolving to death being observed in 41.7% of the cases. The in vitro sensitivity profile demonstrated there was no antifungal resistance in the strains analyzed and all the strains were sensitive to sulfametoxazol-trimetoprim. The MFC levels of caspofungin, itraconazole, voriconazole and sulfametoxazol-trimetoprim were higher for the strains from the Northeast than those from the Southeast. In recent years there has been a significant increase in the number of histoplasmosis cases in HIV-positive individuals in the state of Ceará, but the results showed no resistance among the strains of H. capsulatum tested. These showed sensitivity of sulfametoxazol-trimetoprim, but there was a difference in sensitivity between the strains from the northeastern and southeastern regions of Brazil / A histoplasmose, causada pelo fungo Histoplasma capsulatum, é a mais prevalente das micoses sistêmicas e doença marcadora da síndrome de imunodeficiência adquirida (AIDS). Foi realizada análise descritiva de 254 casos de histoplasmose em pacientes com AIDS, no período de 2006 a 2010, no Estado do Ceará, Nordeste do Brasil, descrevendo os aspectos epidemiológicos, clínicos, laboratoriais e terapêuticos. Adicionalmente, buscou-se determinar o perfil de sensibilidade in vitro de cepas de H.capsulatum. O teste de sensibilidade in vitro foi realizado, pelo método da microdiluição, segundo protocolo M-27A2 do CLSI, em cepas de H. capsulatum nas fases filamentosa e leveduriforme, frente os antifúngicos anfotericina B, fluconazol, itraconazol, voriconazol e caspofungina, e o antimicrobiano sulfametoxazol-trimetoprim, comparando-se cepas obtidas dos casos do período analisado e cepas clínicas oriundas de pacientes do Sudeste do Brasil. Em 39,37% dos casos, a histoplasmose foi o primeiro evento definidor de SIDA e em 80,4% dos pacientes a contagem de células CD4 era menor do que 100 cells/ml. Os níveis de lactato desidrogenase estavam elevados em todos os pacientes avaliados, observando-se comprometimento da função hepática e renal, com evolução para óbito em 41,7% dos casos. O perfil de sensibilidade in vitro demonstrou que não há fenômeno de resistência antifúngica entre as cepas avaliadas, e todas as cepas foram sensíveis ao sulfametoxazol-trimetoprim. A CFM das drogas caspofungina, itraconazol, voriconazol e sulfametoxazol-trimetoprim foi mais elevada para as cepas oriundas do Nordeste em relação às cepas do Sudeste do Brasil. Existe aumento significativo no número de casos de histoplasmose em indivíduos HIV positivos no Estado do Ceará, Nordeste do Brasil, em relação a estudos anteriores, mas não há fenômeno de resistência entre as cepas de H. capsulatum, e estas demonstram sensibilidade ao sulfametoxazol-trimetoprim, com diferença no perfil de sensibilidade entre as cepas do Nordeste e Sudeste do Brasil.
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Atividade in vitro de agentes antimicrobianos contra biofilmes de Staphylococcus ssp. de otite canina / In vitro activity of antimicrobial agents against Staphylococcus ssp. biofilms from canine otitis

Moreira, Camila Alencar January 2011 (has links)
Camila Alencar Moreira. Atividade in vitro de agentes antimicrobianos contra biofilmes de Staphylococcus ssp. de otite canina. 2011. 103 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-06-17T14:04:10Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_camoreira.pdf: 3719314 bytes, checksum: d72587f50967ba4b42036432a799459a (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-06-18T15:37:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_camoreira.pdf: 3719314 bytes, checksum: d72587f50967ba4b42036432a799459a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-18T15:37:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_camoreira.pdf: 3719314 bytes, checksum: d72587f50967ba4b42036432a799459a (MD5) Previous issue date: 2011 / Historically, bacteria have been seen as isolated organisms; however, it is now clear that the vast majority of bacteria exist in complex communities known as biofilms. Bacteria in biofilms are adhered to various surfaces, both abiotic and biotic (teeth, bones, mucosa), often forming a highly dynamic ecosystem, which is structured and organized. An example of infection, which can involve the formation of biofilm is otitis - defined as an acute or chronic inflammation of the ear, which may extend from the external ear canal to the inner ear. Described as the most common disease of the external ear canal in dogs, it has a multifactorial etiology, including fungi and bacteria, especially of the genus Staphylococcus. Bacteria of this genus are commensal to skin and mucous membranes, but can act as opportunistic pathogens in favorable conditions and are often associated with a wide variety of infections in humans and animals with many reports of refractoriness to usual treatments. In biofilm, bacteria can be ten to a hundred times more resistant to antibiotics when compared to the same bacteria in planktonic growth. The struggle to fight infections involving bacterial biofilms is a major challenge of microbiology today, which, in turn, leads to the search for new therapeutic options. Thus, this study aimed to evaluate the in vitro inhibitory effect of six substances – three classic antimicrobial agents ciprofloxacin, chloramphenicol, gentamicin; and three non-classic antimicrobial agents thymol, carvacrol, hydrogen peroxide (H2O2) - against staphylococcal strains from canine otitis in planktonic growth and in biofilm. We analyzed 54 clinical strains isolated from purulent secretion of canine otitis, divided into five species: S. intermedius, S. simulans, S. haemolyticus, S.epidermidis and S. lugdunensis. The 16 strains classified as biofilm producers (11 S. intermedius and five S. simulans), according to result obtained by the Congo red agar test and confirmed by scanning electron microscopy (SEM), were used in broth microdilution assay for determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum biofilm inhibitory concentration (MBIC). With regards to the biofilm-producing strains, the following results were observed: the values for ciprofloxacin were 0,12 ≤MIC≤0,5 mcg/mL (mean 0,28 mcg/mL) and 0,5≤MBIC≤8 mcg/mL (mean 1,79 mcg/mL); for chloramphenicol 2≤MIC≤16 mcg/mL (mean 7,41 mcg/mL) and 8≤MBIC≤32 mcg/mL (mean 20,71 mcg/mL); for gentamicin 0,5≤MIC≤4 mcg/mL (mean 2,09 mcg/mL) and 4≤MBIC≤64 mcg/mL (mean 24,24 mcg/mL); for thymol 32≤MIC≤512 mcg/mL (mean 137,41 mcg/mL) and 256≤MBIC≤2048 mcg/mL (mean 768 mcg/mL); carvacrol 32≤MIC≤512 mcg/mL (mean 128 mcg/mL) and 256≤MBIC≤4096 mcg/mL (mean 993,88 mcg/mL); and for H2O2 for 32≤MIC≤128 mcg/mL (mean 99,76 ppm) and 128≤MBIC≤4096 ppm (mean 1874,82 ppm). The presented data indicates the therapeutic potential of the six antibiotics studied in the treatment of staphylococcal infections associated with biofilm, which warrants further studies to investigate the mechanisms of action of these drugs on biofilms and the design of in vivo experiments to confirm the significance of these findings. / Historicamente, as bactérias foram vistas como organismos que vivem isolados, no entanto, é claro, agora, que a grande maioria de bactérias existe em comunidades complexas, conhecidas como biofilmes. As bactérias em biofilmes se encontram aderidas a superfícies diversas, tanto abióticas como bióticas (dente, osso, mucosa), compondo um ecossistema altamente estruturado, dinâmico e organizado. Um exemplo de infecção que pode envolver a presença formação de biofilme é a otite - definida como inflamação aguda ou crônica da orelha, podendo se estender desde o epitélio do conduto auditivo externo até a orelha interna. Descrita como a doença mais comum do canal auditivo externo em cães, possui uma etiologia multifatorial, que inclui fungos e bactérias, principalmente do gênero Staphylococcus. Bactérias desse gênero são comensais de pele e mucosas, mas podem atuar como patógenos oportunistas em condições propícias e são frequentemente associadas a uma ampla variedade de infecções em seres humanos e animais com vários relatos de refratariedade aos tratamentos usuais. Em um biofilme, as bactérias podem ser dezenas de vezes mais resistentes aos antibióticos, quando comparadas às mesmas bactérias em crescimento planctônico. O combate a infecções envolvendo bactérias em biofilme é um grande desafio da microbiologia mundial, que leva à busca de novas opções terapêuticas. Com efeito, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito inibitório in vitro de seis substâncias – três agentes antimicrobianos clássicos, ciprofloxacina, cloranfenicol, gentamicina; e três agentes antimicrobianos não-clássicos timol, carvacrol, peróxido de hidrogênio (H2O2) – contra cepas estafilocócicas de otite canina em crescimento planctônico e em biofilme. Foram avaliadas 54 cepas clínicas isoladas de secreção purulenta de cães com otite, divididas entre cinco espécies: S. intermedius, S. simulans, S. haemolyticus, S. epidermidis e S. lugdunensis. As 16 cepas classificadas como produtoras de biofilme (11 de S. intermedius e cinco de S. simulans), segundo resultado obtido pelo teste do ágar vermelho Congo e confirmação por microscopia eletrônica de varredura (MEV), foram usadas em ensaios de microdiluição em caldo para determinação de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração inibitória mínima em biofilme (CIMB). Com relação às cepas produtoras de biofilme, foram observados os seguintes resultados: os valores para ciprofloxacina foram 0,12 ≤CIM≤0,5 mcg/mL (média 0,28 mcg/mL) e 0,5≤CIMB≤8 mcg/mL (média 1,79 mcg/mL); para cloranfenicol 2≤CIM≤16 mcg/mL (média 7,41 mcg/mL) e 8≤CIMB≤32 mcg/mL (média 20,71 mcg/mL); para gentamicina 0,5≤CIM≤4 mcg/mL (média 2,09 mcg/mL) e 4≤CIMB≤64 mcg/mL (média 24,24 mcg/mL); para timol 32≤CIM≤512 mcg/mL (média 137,41 mcg/mL) e 256≤CIMB≤2048 mcg/mL (média 768 mcg/mL); carvacrol 32≤CIM≤512 mcg/mL (média 128 mcg/mL) e 256≤CIMB≤4096 mcg/mL (média 993,88 mcg/mL); e para H2O2 32≤CIM≤128 ppm (média 99,76 ppm) e 128≤CIMB≤4096 ppm (média 1874,82 ppm). Os dados obtidos apontam para o potencial terapêutico dos seis antibióticos estudados no tratamento de infecções estafilocócicas associadas a biofilme, sendo necessários novos estudos para investigar os mecanismos de ação dessas drogas sobre o biofilme, bem como o delineamento de experimentos in vivo para confirmar a significância desses achados.
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Ocorrência e perfil de resistência aos antimicrobianos de bactérias isoladas de lavado broncoalveolar de pacientes internados em hospitais de Fortaleza no período de janeiro de 1996 a dezembro de 2001 / Occurrence and antimicrobial resistance profile of bacteria isolated from bronchoalveolar lavage of patients admitted to hospitals in Fortaleza in the period from January 1996 to December 2001

Bandeira, Tereza de Jesus Pinheiro Gomes January 2002 (has links)
BANDEIRA, Tereza de Jesus Pinheiro Gomes. Ocorrência e perfil de resistência aos antimicrobianos de bactérias isoladas de lavado broncoalveolar de pacientes internados em hospitais de Fortaleza no período de janeiro de 1996 a dezembro de 2001. 2002. 101 f. Dissertação (Mestrado em Saúde Pública) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2002. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-01-09T11:30:37Z No. of bitstreams: 1 2002_dis_tjpgbandeira.pdf: 498204 bytes, checksum: 67001cfec7eb472cdd6f1a0d43c53a79 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-01-09T11:31:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2002_dis_tjpgbandeira.pdf: 498204 bytes, checksum: 67001cfec7eb472cdd6f1a0d43c53a79 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-09T11:31:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2002_dis_tjpgbandeira.pdf: 498204 bytes, checksum: 67001cfec7eb472cdd6f1a0d43c53a79 (MD5) Previous issue date: 2002 / Hospital acquired pneumonia (HAP) is associated with high morbidity and mortality in hospitalized patients. Early, appropriate, and adequate empiric antibiotic therapy can save lives of more than half of all HAP patients and must be based on local data. This study will provide local patterns of antibiotic resistance. Practically all primary therapy of HAP is empiric and information from surveillance program of a given hospital is very important. We studied 588 Bronchoalveolar lavage cultures results from hospitalized patients performed in a private lab during a period of 6 years from 1996 to 2001. As a result of searching patient’s records, two groups were assigned: Group 1, n=147, patients with HAP notified by Nosocomial Infection Commission according to Center for Disease Control and Prevention-CDC; Group 2, n=382, patients with No-Nosocomial Pneumonia. Bacteriologic cultures were done quantitatively with a threshold of >= 105 according to Kahn and Jones (1987), Salataet al. (1987) and Carvalho (1997). Identification and susceptibility tests were performed on VITEK BioMerrieux except for Streptococcus pneumoniae and Stenotrophomonas maltophilia. In patients from Group 1, the five most frequent agents were: P. aeruginosa 56 cases (38,1%), S.aureus 24 (16,3%), K. pneumonia 12 (8,2%), Acinetobacter spp 12 (8,2%) and S. marcescens 10 (6,8%). Group 2 shows: P. aeruginosa 113 (29,6%), Staphylococcus aureus 89 (23,3%), Klebsiella pneumoniae 32 (8,4%), Acinetobacter spp 31 (8,1%) and Candida spp 20 (5,2%). There was no significant difference between resistance profile of isolates when distributed in two groups except S. aureus/Oxacilina (p=0,027), P.aeruginosa/Piperacilina/Tazobactam (p=0,003). The resistance profile in total (n=751) was: P. aeruginosa/Imipenem 40,8%, Acinetobacter spp/Imipenem 10,0%, Acinetobacter spp/AmpicilinaSulbactam 44,3% e S. aureus/Oxacilina 67,3%. The time between admission date and culture request was more than 7days in 60,18% in both groups. Conclusion: a) drug-resistance in lower respiratory tract infection(LRTI) is a serious concern mainly with high prevalence of multi-R gram-negative like P. aeruginosa and Acinetobacter with high resistance for Imipenem and other β- Iactâmic and S. aureus with high resistance to Oxacilina. There was no significant difference between the two groups. Group 2 did not show characteristics of Community-Acquired Pneumoniae (CAP) maybe because of large intervals of time between admission and request of culture, or this kind of patient had either severe CAP with no response to prior multiple antimicrobial therapy or previous hospitalizations or even had recent hospitalization and consequent colonization. Forwards molecular studies should be performed on isolates to provide better characterization of lower respiratory tract pathogens. / Justificativa – A pneumonia hospitalar (PH) é causa de morbidade e mortalidade elevadas em pacientes hospitalizados. A terapia antimicrobiana empírica adequada e precoce pode salvar a vida de mais da metade dos pacientes com PH e deve ser baseada em padrões locais de sensibilidade a antimicrobianos. Praticamente todo tratamento de PH é, inicialmente, empírico. O objetivo deste trabalho é contribuir com o conhecimento do padrão regional de resistência de microrganismos nesse contexto. Metodologia – Foram estudados 588 resultados de culturas de lavado bronco-alveolar (LBA) de pacientes internados em Fortaleza, processados na rotina de um laboratório privado, no período de janeiro de 1996 a dezembro de 2001. Como resultado de pesquisa aos prontuários médicos desses pacientes, dois grupos foram criados: Grupo 1, com n=147, composto por pacientes com pneumonia hospitalar (PH) notificada segundo os critérios do Center for Disease Control and Prevention (CDC); Grupo 2, com n=382, pacientes com pneumonia não-hospitalar (PNH). Utilizou-se a técnica quantitativa de cultivo descrita nos trabalhos de Kahn e Jones (1987), Salata et al. (1987) e Carvalho (1997). Identificação e antibiogramas foram realizados no equipamento VITEK BioMerrieux, exceto para Streptococcus pneumoniae e Stenotrophomonas maltophilia cujos antibiogramas foram realizados pelo método Kirby-Bauer e E-test respectivamente. Resultados – No Grupo 1, os cinco microrganismos mais freqüentes foram Pseudomonas aeruginosa [56 casos (38,1%)], Staphylococcus aureus [24 casos (16,3%)], Klebsiella pneumoniae [12 casos (8,2%)], Acinetobacter spp [12 casos (8,2%)] e Serratia marcescens [10 casos (6,8%)]. No Grupo 2, encontraram-se, mais freqüentemente, Pseudomonas aeruginosa [113 casos (29,6%)], Staphylococcus aureus [89 casos (23,3%)], Klebsiella pneumoniae [32 casos (8,4%)] e Acinetobacter spp [31 casos (8,1%)]. Não foi observada diferença significativa entre os dois grupos para a etiologia. O mesmo ocorreu com o perfil de resistência dos organismos, exceto para o Grupo 1 com S. aureus/oxacilina (p=0,027) e P. aeruginosa/piperacilina/tazobactam (p=0,003). No perfil de resistência do conjunto total de amostras (n=751), destaca-se a de P. aeruginosa ao imipenem, de 40,8%; de Acinetobacter spp ao imipenem, de 10,0%; de Acinetobacter spp a Ampicilina/Sulbactam, de 44,3%; e de S. aureus a oxacilina, de 67,3%. O intervalo de tempo entre a data de internação e a realização da cultura foi maior do que 7 dias em 60,18% dos casos. Conclusão - no trato respiratório, o problema da multiresistência bacteriana é evidente e preocupante com alta prevalência de bacilos gram-negativos multiresistentes, marcadamente P. aeruginosa e Acinetobacter spp., assim como elevada resistência a oxacilina nas amostras de Staphylococcus aureus. O Grupo 2 não possui características de pneumonia comunitária (PC), provavelmente, porque o tempo entre a internação e a realização da cultura foi longo o suficiente para permitir a colonização do trato respiratório superior pela microflora do ambiente hospitalar. É possível que o Grupo 2 seja constituído por pacientes com pneumonia comunitária severa refratária à antibioticoterapia que necessita internação, ou que tiveram várias internações anteriores, com conseqüente colonização por microflora hospitalar. Investigações subseqüentes devem conferir atenção especial a esse aspecto. Pode ser útil, neste contexto, o emprego de técnicas de Biologia Molecular para melhor caracterização dos microrganismos isolados.
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Atividade antifúngica in vitro e mecanismo de ação de análogos químicos da isoniazida frente a Coccidioides posadasii / Antifungal activity in vitro and mechanism of action of chemical analogues of isoniazid against Coccidioides posadasii

Melo, Charlline Vládia Silva de January 2014 (has links)
MELO, Charlline Vládia Silva de. Atividade antifúngica in vitro e mecanismo de ação de análogos químicos da isoniazida frente a Coccidioides posadasii. 2014. 80 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by Eliene Nascimento (elienegvn@hotmail.com) on 2015-03-11T14:16:58Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvlmelo.pdf: 1418913 bytes, checksum: 8e7ca0b761e03c5831be6c466907127d (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-03-11T14:19:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvlmelo.pdf: 1418913 bytes, checksum: 8e7ca0b761e03c5831be6c466907127d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T14:19:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvlmelo.pdf: 1418913 bytes, checksum: 8e7ca0b761e03c5831be6c466907127d (MD5) Previous issue date: 2014 / Coccidioidomicose é uma micose sistêmica que acomete o homem e outros animais domésticos e silvestres, causada pelo fungo dimórfico geofílico Coccidioides posadasii. Nos últimos anos, a melhoria dos métodos de diagnóstico micológico e o aumento da ocorrência de doenças imunossupressoras causaram grande impacto na incidência das micoses profundas e oportunistas no mundo. Apesar da existência de terapias antifúngicas eficazes contra a coccidioidomicose, a busca por novas drogas para o tratamento desta doença se faz necessária. O objetivo desse estudo foi determinar o efeito inibitório, in vitro, e o mecanismo de ação dos análogos químicos da isoniazida, isolados e em combinação com os antifúngicos anfotericina B (AMB) e itraconazol (ITC), frente a cepas de Coccidioides posadasii (n=12). Para isso 12 cepas de C.posadasii, foram repicadas em ágar dextrose batata e utilizadas na realização dos testes de sensibilidade frente ao agente antituberculose isoniazida (INH) e seus análogos químicos. Os ensaios foram conduzidos por meio do teste de macrodiluição em caldo ou definição da concentração inibitória mínima (CIM) e o sinergismo foi avaliado pelo método do tabuleiro. Os análogos químicos inibiram o crescimento de todas as cepas de C. posadasii testadas isoladamente, com valores de CIM para cada composto que variaram de 100 a 400 µg/mL, para os análogos P3-[N’-(1- (4-methoxifeniletilideno) isonicotinohidrazida] P5- [N’- (1-m-tolileilidene) isonicotinohidrazida] e P6- [N’-(1-(4-metilfenil) etilideno) isonicotinohidrazida], de 25 a 100 µg/mL para a PACT- N’- (1-feniletilideno) isonicotinohidrazida e de 0,0625 a 0,125 µg/mL para AMB e 0,125 a 0,5 µg/mL para ITC. Quanto a combinação entre as drogas antifúngicas e os análogos químicos da droga isoniazida, todos foram capazes de inibir o crescimento in vitro das cepas de C. posadasii. Sinergismo foi detectado em 8 combinações não sendo observado nenhum antagonismo em nenhuma delas. Os análogos da isoniazida apresentaram valores de CIM de 2, 4, 8, 16, 32 vezes superior à atividade da droga antituberculose padrão. A extração dos esteróis e a permeabilidade da membrana fúngica foram averiguadas, respectivamente, por saponificação com aquecimento e por meio da leitura do sobrenadante da suspensão fúngica em comprimento de onda de 260 e 280 nm. Todos os compostos inibiram o crescimento in vitro das cepas de C. posadasii. Foi observado que os análogos da isoniazida isolados e em combinação com antifúngicos foram capazes de causar redução do teor de ergosterol celular; apenas os análogos P3 e P6 foram capazes de alterar a permeabilidade da membrana plasmática nas condições testadas. Em conclusão, os resultados mostram que os análogos derivados da isoniazida possuem atividade inibitória frente a C. posadasii
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Sensibilidade a antifúngicos, atividade exoenzimática e produção de biofilme por cepas de Candida tropicalis de origem animal / Antifungal susceptibility, exoenzyme activity and biofilm production by Candida tropicalis strains from animal sources

Oliveira, Jonathas Sales de January 2013 (has links)
OLIVEIRA, Jonathas Sales de. Sensibilidade a antifúngicos, atividade exoenzimática e produção de biofilme por cepas de Candida tropicalis de origem animal. 2013. 73 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T13:14:07Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T13:27:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T13:27:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) Previous issue date: 2013 / In recent years there has been a significant increase in the incidence of fungal infections caused by Candida species. Although C. albicans be considered the principal representing of the genus, other species have been gaining prominence. C. tropicalis, for example, has been associated with serious invasive cadidiases, being the first or second type of non-Candida albicans Candida most commonly isolated in humans with candidemia and candiduria and is frequently isolated from healthy animals and animals with candidiasis. To establish infection, C. tropicalis expresses many virulence factors such as the secretion of enzymes phospholipases and proteases, biofilm production, among others. This study aimed to evaluate the in vitro antifungal susceptibility profile and production of virulence factors in strains of C. tropicalis (n=100) isolated from several animal species. The strains were subjected to in vitro susceptibility testing by broth microdilution test, M27-A3 protocol, standardized by the Clinical and Laboratory Standards Institute against amphotericin B, itraconazole and fluconazole. We also evaluated the virulence attributes, such as proteases and phospholipases production and biofilm formation. Regarding the susceptibility of C. tropicalis strains, 38% were resistant to itraconazole, 40% were resistant to fluconazole and 34% were resistant to both azoles. None of the strains were resistant to amphotericin B. Regarding the production of proteases, 84% of the strains secreted these enzymes in the medium with pH 5.0, whereas only 40% of the strains were active at pH 3.5. Only 8% of the strains produced phospholipases. The strains showed different pattern in biofilm production, which 63,2% were strong producers, 17,6% were moderate producers, and 13,3% were weak producers. In sumary, the C. tropicalis strains isolated from animals showed high rate of resistance to azoles and expressed important virulence factors, indicating a potential threat to human and animal health. / Nos últimos anos houve um aumento significativo na incidência de infecções fúngicas causadas por leveduras do gênero Candida. Apesar de C. albicans ser considerada a principal representante do gênero, outras espécies vêm ganhando destaque. C. tropicalis, por exemplo, tem sido associada à cadidíases invasivas graves, sendo a primeira ou segunda espécie de Candida não-albicans mais comumente isolada em candidemia e candidúria em humanos, além de ser frequentemente isolada da microbiota de animais saudáveis e com candidíase. Para estabelecer a infecção, C. tropicalis expressa diversos fatores de virulência, como a secreção de enzimas protease e fosfolipase, a produção de biofilme, dentre outros. O presente trabalho buscou avaliar o perfil de sensibilidade antifúngica in vitro e produção de fatores de virulência de cepas de C. tropicalis (n=100) isoladas de diferentes espécies animais. As cepas foram submetidas a teste de sensibilidade in vitro por meio do método de microdiluição em caldo, protocolo M27-A3, padronizado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute, frente anfotericina B, itraconazol e fluconazol. Foram avaliados ainda os atributos de virulência: produção de enzimas proteases e fosfolipases e produção de biofilme. Quanto ao perfil de sensibilidade das cepas de C. tropicalis, 38% foram resistentes a itraconazol, 40% resistentes a fluconazol e 34% foram resistentes a ambos os derivados azólicos. Nenhuma cepa apresentou resistência a anfotericina B. Quanto a produção de proteases, 84% das cepas secretaram estas enzimas em meio com pH 5,0, enquanto somente 40% das cepas foram ativas em pH 3,5. Somente 8% das cepas produziram fosfolipases. As cepas apresentaram padrão diferenciado na produção de biofilme, em que 63,2% foram consideradas fortes produtoras, 17,6% foram consideradas moderadas produtoras e 13,3% foram consideradas fracas produtoras. Em suma, os isolados de C. tropicalis provenientes de animais apresentaram resistência a derivados azólicos e expressaram fatores de virulência importantes, indicando potencial risco à saúde humana e animal.
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Perfil de sensibilidade e genotipagem de leveduras isoladas de pacientes com candidemia em dois hospitais de referência terciária de Fortaleza-Ceará / Sensitivety profile to antifulgal and evaluate the genotypical profile of the yeast isolated from candidemic patients tertiary care hospital from Northeast Brazil

Medrano, Délia Jéssica Astete January 2004 (has links)
MEDRANO, Delia Jessica Astete. Perfil de sensibilidade e genotipagem de leveduras isoladas de pacientes com candidemia em dois hospitais de referência terciária de Fortaleza - Ceará. 2004. 146 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T15:52:19Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_djamedrano.pdf: 1543027 bytes, checksum: bf8abffaae3f0d8ea1a8c267957fc295 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:19:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_djamedrano.pdf: 1543027 bytes, checksum: bf8abffaae3f0d8ea1a8c267957fc295 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:19:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_djamedrano.pdf: 1543027 bytes, checksum: bf8abffaae3f0d8ea1a8c267957fc295 (MD5) Previous issue date: 2004 / The systemic infections caused by yeasts of the genus Candida are considered opportunist mycoses of high risk in hospital environments. These infections represent important therapeutical challenge, by reason of arising of species resistent to some antifungals, associated with high rate of mortality. Therefore, this work sought: To verify the frequency of fungemias at Dr. César Cals Hospital and Albert Sabin Children Hospital; identify the etiological agents implicated; determine the sensitivety profile to antifulgal and evaluate the genotypical profile of the species isolated from patients with recurrency. For this, were recuperated from 4627 hemcultures, 55 yeast-positive hemocultures at HGCC and from 5316 hemocultures 87 yeast-positive hemocultures at HIAS. From them, 23 patients at HGCC and from 43 at HIAS that had clinical histories with complet data entered this study. The mycological diagnosis was performed through biochemical and morphological characteristics of the etiological isolated. The test of sensitivety to antifungal- amphotericin B, fluconazole, itraconazole and cetoconazole- utilized the microdilution method in broth, reported in the document M27-A2 of the NCCLS. The genotyping techniques were performed through PFGE (Pulsed Field Gel Electrophresis), RAPD (Randomly amplified polymorphic DNA analysis). Within the period from june of 2000, to june of 2002 at HGCC, were analysed 4627 hemocultures, being positives 1051, of which 55 (5,2%) were positive for yeast of the genus Candida. On the other hand, in the period from june of 2001 to july of 2002 at HIAS, were analysed 5316 hemocultures, of which 87 (5,72%) were yeast-positive of the genus Candida and Rhodotorula.The main specie involved in the genus Candida, was C. parapsilosis with 36% and 42% of the cases at HGCC and HIAS respectively. The main risk factors associated with candidemia, were: the previous antibiotic therapy, central venous catheter, parenteral nutrition, gastric probe, mechanical ventilation, surgery and prematurity. About the resistance to antifungals drugs was observed that amphotericin B showed a resistance level of 4%, fluconazole-56%, itraconazole-52% and cetoconazole- 86%. The PFGE technique caracterized a cromossomic profile of 6 bands for C. parapsilosis and 4 for C. tropicalis. This technique permited the diferentiation of one cepa with changed pattern of bands for the last episode of the patient 4. The technique of RAPD chacacterized a distribution pattern of predominant bands for C. parapsilosis and was capable of characterize 4 genetical profiles, denoting reinfection in 3 patients and 2 genomic profiles were found for C. tropicalis. This assay shows the emergency of the non- albicans Candida, specially the C. parapsilosis, as main responsible for the cases of candidemia in the two hospitals of tertiary indication of Fortaleza, associated with a high resistance in vitro to antifungals. The genetical variability found in C. parapsilosis and C. tropicalis through the PFGE and RAPD techniques, revealed reinfection pictures, which rises the possibility that these be due to a contamination among patients or indirectly through the healthy workers. / As infecções fúngicas sistêmicas causadas por leveduras do gênero Candida são consideradas micoses oportunistas de alto risco em ambientes hospitalares. Essas infecções representam importante desafio terapêutico, em razão do surgimento de espécies resistentes a antifúngicos, associados a altos índices de mortalidade. Por esta razão, este trabalho objetivou: Verificar a freqüência de fungemias no Hospital Geral Dr. César Cals (HGCC) e Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS); identificar os agentes etiológicos implicados; determinar o perfil de sensibilidade aos antifúngicos e avaliar o perfil genotípico das espécies isoladas de pacientes com quadros de recorrência. Para isso foram recuperadas, de 4 627 hemoculturas, 55 hemoculturas positivas para leveduras do HGCC, e, de 5 316 hemoculturas, 87 positivas para leveduras do HIAS. Destas, 23 do HGCC e 43 pacientes do HIAS que possuíam histórias clínicas com dados completos entraram neste estudo. O diagnóstico micológico foi realizado por meio das características bioquímicas e morfológicas dos agentes etiológicos isolados. O teste de sensibilidade aos antifúngicos - anfotericina B, fluconazol, itraconazol e cetoconazol - utilizou o método de microdiluição em caldo, descrito no documento M27-A2 do NCCLS. As técnicas de genotipagem foram realizadas por eletroforese em campo pulsátil (PFGE) e amplificação aleatória do DNA (RAPD). Entre o período do junho do 2000 a junho do 2002, no HGCC, foram analisadas 4 627 hemoculturas, sendo positivas 1051, das quais 55 (5,2%) foram positivas para leveduras do gênero Candida. Em contrapartida, no período de junho do 2001 a junho do 2002, no HIAS, foram analisadas 5316 hemoculturas, sendo positivas 1520 amostras, das quais 87 (5,72%) foram positivas para leveduras dos gêneros Candida e Rhodotorula. A principal espécie envolvida, dentro do gênero Candida, foi a C. parapsilosis com 36% e 42% no HGCC e HIAS, respectivamente. Os principais fatores de risco foram: a antibioticoterapia prévia (n=19; 90%), cateter venoso central, nutrição parenteral, sondagem gástrica , ventilação mecânica, cirurgia e prematuridade. Quanto à resistência a drogas antifúngicas, foi observado que anfotericina B apresentou um índice de resistência de 4%, fluconazol- 52%, itraconazol- 50% e cetoconazol- 86%. A técnica do PFGE caracterizou um perfil cromossômico de 6 bandas para C. parapsilosis e 4 para C. tropicalis. Esta técnica permitiu a diferenciação de uma cepa com padrão de bandas alterado para o último episódio do paciente 4. A técnica de RAPD caracterizou um padrão de distribuição de bandas predominante para C. parapsilosis e foi capaz de caracterizar 4 perfis genômicos, indicando re-infecção em 3 pacientes e 2 perfis genômicos foram encontrados para C. tropicalis . Este ensaio demonstra a emergência das Candida não-albicans, especialmente a C. parapsilosis, como principal responsável pelos casos de candidemias em dois hospitais de indicação terciária de Fortaleza, associado a uma alta resistência in vitro aos antifúngicos. A variabilidade genética encontrada nas C. parapsilosis e C. tropicalis, mediante as técnicas do PFGE e RAPD, revelaram quadros de re-infecção, os quais erguem a possibilidade de que estas sejam decorrentes de uma contaminação entre pacientes ou indiretamente, por intermédio de trabalhadores da saúde.
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Efeito inibitório in vitro de drogas antituberculose, antifúngicas e análogos químicos da isoniazida frente a Histoplasma capsulatum var. capsulatum / In vitro inhibitory effect of the antituberculosis drugs, antifungal drugs and and chemical analogs of isoniazid against Histoplasma capsulatum var. capsulatum

Marques, Francisca Jakelyne de Farias January 2009 (has links)
MARQUES, Francisca Jakelyne de Farias. Efeito inibitório in vitro de drogas antituberculose, antifúngicas e análogos químicos da isoniazida frente a Histoplasma capsulatum var. capsulatum. 2009. 130 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T16:15:53Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_fjfmarques.pdf: 1958302 bytes, checksum: 215586f2e098a7dee17df6403a12292e (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:23:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_fjfmarques.pdf: 1958302 bytes, checksum: 215586f2e098a7dee17df6403a12292e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:23:17Z (GMT). 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The aim of this study was to determine the in vitro inhibitory effect of the antituberculosis drugs: isoniazid (INH), pyrazinamide (PZA) and ethambutol (EMB); antifungal drugs: amphotericin B (AMB), fluconazole (FLC), itraconazole (ITC) and voriconazole (VRZ) and chemical analogs of isoniazid against strains of H. capsulatum (n=30), as well as to evaluate the use of different culture media for the performance of the susceptibility tests. For such, first, the antituberculosis agents INH, PZA and EMB and the analogs of isoniazid were tested isolatedely, and then, in association with the antifungal drugs FLC, ITC and VRZ, against 18 strains of H. capsulatum, previously grown onto BHI agar, through broth macrodilution technique. Each of the 12 remaining strains grown onto potato agar, BHI agar, 2% malt extract agar and lactritmel agar were microscopically analyzed, concerning the presence of tuberculate macroconidia, which were quantified as follows: 0-10, 10-50 and >50 macroconidia/field. Fungal cultures were used to determine the susceptibility of H. capsulatum to the antifungal agents AMB, FLC, ITC and VRZ, through broth microdilution methodology. The antituberculosis drugs inhibited the in vitro growth of the fungal strains, with MICs ranging from 0.04 to 0.30 mg/mL for INH; 0.55 to 3.13 mg/mL for PZA and 1.56 to 6.25 mg/mL for EMB. Concerning antifungal drugs, all the strains were susceptible, with MIC values ranging from 0.0625 to 0.25 µg/mL for AMB; 15.62 to 62.5 µg/mL for FLC; 0.0039 to 0.0312 µg/mL for ITC, and 0.00156 to 0.25 µg/mL for VRZ. When associating antituberculosis drugs with azole derivatives, all associations inhibited the in vitro growth of H. capsulatum strains, and synergy was observed for the nine combinations tested. Analogs of isoniazide presented MICs of 2, 4, 8 and 15-fold better than the standard antituberculosis drug. Basing on micromorphological analysis, the lowest quantification of macroconidia/field (0-10) was observed for 11, 10, 6 and 7 strains previously grown onto potato agar, BHI agar, malt agar and lactritmel agar, respectively. Malt agar was the most adequate medium for the production of macroconidia, 10-50 and >50/field, with a total of six strains; followed by lactritmel agar, with 5 strains. Concerning the relationship between MIC and culture medium used during the test, it was observed that inoculum from strains grown onto malt agar and BHI agar allowed the detection of the MIC for 11 strains. On the other hand, for those inocula grown onto potato agar and lactritmel agar, the MIC values were not detected for 8 and 5 strains, respectively. The results of this study provide additional data on the antifungal potential of antituberculosis drugs and their interactions with azole derivatives. However, new studies are necessary in order to determine the mechanism of action of these compounds on fungal cellular metabolism. / Nos últimos anos, a melhoria dos métodos de diagnóstico micológico e as doenças imunossupressoras causaram grande impacto na incidência das micoses profundas e oportunistas em todo o mundo, fato que impulsionou a realização de estudos de prospecção por novas drogas antifúngicas. A histoplasmose é uma micose sistêmica, causada pelo fungo Histoplasma capsulatum var. capsulatum que, em pacientes hígidos, pode mimetizar a tuberculose quanto aos aspectos clínicos e radiológicos. Alguns casos de histoplasmose refratária ao tratamento com drogas antifúngicas convencionais vêm sendo descritos. O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito inibitório, in vitro, das drogas antituberculose: isoniazida (INH), pirazinamida (PZA) e etambutol (EMB); antifúngicas: anfotericina B (AMB), fluconazol (FLC), itraconazol (ITC) e voriconazol (VRZ) e de análogos químicos da isoniazida frente a cepas de H. capsulatum (n=30), assim como avaliar o emprego de diferentes meios de cultura para a realização dos testes de sensibilidade. Para isso, primeiramente, foram repicadas 18 cepas de H. capsulatum em ágar BHI e utilizadas na realização dos testes de sensibilidade frente aos agentes antituberculose citados e análogos químicos da isoniazida, isolados e em combinação com os antifúngicos FLC, ITC e VRZ por meio da técnica de macrodiluição em caldo. Cada uma das 12 cepas restantes foi repicada em ágar batata dextrose, ágar BHI, ágar malte a 2% e ágar lactrimel e, analisadas ao microscópio óptico quanto a presença de macroconídios tuberculados, sendo quantificados de acordo com os parâmetros: (0-10); (10-50); (>50) macroconídios/campo. As culturas foram empregadas na determinação dos testes de sensibilidade frente aos agentes antifúngicos AMB, FLC, ITC e VRZ, utilizando a técnica de microdiluição em caldo. As drogas antituberculose inibiram o crescimento das cepas in vitro com valores de CIM de 0,04 a 0,30 mg/mL para INH, 0,55 a 3,13 mg/mL para PZA e 1,56 a 6,25 mg/mL para EMB. No tocante às drogas antifúngicas, todas as cepas foram sensíveis apresentando valores de CIM que variaram de 0,0625 a 0,25 µg/mL para AMB; 15,62 a 62,5 µg/mL para FLC; 0,0039 a 0,0312 µg/mL para ITC e 0,00156 a 0,25 µg/mL para VRZ. Quanto às combinações entre os fármacos antituberculose e os derivados azólicos, todas foram capazes de inibir o crescimento in vitro das cepas de H. capsulatum, sendo detectado sinergismo nas nove combinações. Os análogos da isoniazida apresentaram valores de CIM 2, 4, 8 e 15 vezes superior a atividade da droga antituberculose padrão. A partir da análise micromorfológica do fungo repicados nos quatro meios de cultura foi identificado a menor quantificação (0-10 macroconídios/campo) para ágar batata, ágar BHI, ágar malte e ágar lactrimel, perfazendo um total de 11, 10, 6 e 7 cepas, respectivamente. O meio de cultura ágar malte foi o mais adequado para produção de macroconídios (10-50) e (>50), norteando um total de 6 cepas, seguido do meio lactrimel, 5 cepas. Em relação a determinação da CIM e o meio de cultura utilizado para o procedimento, observou-se que quando o inóculo era proveniente de cepas em ágar malte e ágar BHI foi possível a visualização da CIM em 11 cepas. Enquanto repiques feitos em ágar batata e lactrimel não foi possível determinar os valores de CIM para 8 e 5 cepas, respectivamente. Os resultados deste estudo fornecem dados adicionais sobre o potencial antifúngico das drogas antituberculose e suas interações com os derivados azólicos. Entretanto, novos estudos se fazem necessário, visando determinar os mecanismos de ação desses compostos no metabolismo celular dos fungos.

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