SANTOS NETA, Maria Adalgiza dos. Atividade antifúngica in vitro de compostos naftoquinoidais contra cepas de Candida tropicalis resistentes ao fluconazol. 2012. 76 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica)- Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-04-29T13:53:19Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_masantosneta.pdf: 1150276 bytes, checksum: ed1432baf1dd700de8bcbaf44fa10651 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-04-29T16:29:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_masantosneta.pdf: 1150276 bytes, checksum: ed1432baf1dd700de8bcbaf44fa10651 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-29T16:29:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_masantosneta.pdf: 1150276 bytes, checksum: ed1432baf1dd700de8bcbaf44fa10651 (MD5) Previous issue date: 2012 / The incidence of opportunistic infections caused by fungi, with emphasis on Candida species has increased substantially. Studies report that there has been a notable increase of infections by non-albicans species (Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida parapsilosis and Candida krusei). Clinical isolates resistant to azoles, particularly fluconazole, are increasingly reported. The naphthoquinones are an important class of active molecules biologically presenting antibacterial, antifungal, antiviral, antiinflammatory, antipyretic, anti-cancer and trypanocidal and has been tested extensively in several pharmacological studies. In recent years intensified the interest in in this substances, not only due to your importance in vital biochemical processes as well as the increasing emphasis that they show in various pharmacological studies. This study aimed to evaluate and compare the effect of antifungal naphthoquinones against strains of Candida tropicalis resistant and susceptible to fluconazole, using different techniques such as broth microdilution methods, procedures Flow Cytometry procedures and Comet assay. We use seven strains of Candida tropicalis resistant to fluconazole for this study, which were isolated from blood and were part of the collection of yeasts Experimental Laboratory Bioprospecting in yeast (LABEL), affiliated with the Faculty of Pharmacy, Federal University of Ceará. We used three compounds of naphthoquinones against the seven strains of Candida tropicalis and were subjected to in vitro sensitivity tests, which showed an antifungal activity potent. Through Flow Cytometry, it was possible to assess morphological changes and membrane integrity of these compounds fronts to significant strains in addition to mitochondrial dysfunction and production of reactive oxygen species. Through the Comet assay was possible to find significant damage to DNA. In summary, the results suggest that these compounds may be used as antifungal agents for the treatment of candidemia. / A incidência de infecções oportunistas causadas por fungos, com destaque para as leveduras do gênero Candida vem aumentando substancialmente. Estudos relatam que tem sido observado um notável crescimento de infecções por espécies não albicans (Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida parapsilosis e Candida krusei). Isolados clínicos resistentes aos azólicos, em especial ao fluconazol, são cada vez mais relatados. As naftoquinonas são uma importante classe de moléculas biologicamente ativas, apresentando atividades antibacteriana, antifúngica, antiviral, anti-inflamatória, antipirética, anticancerígena e tripanocida e tem sido amplamente testadas em vários estudos farmacológicos. Nos últimos anos intensificou-se o interesse nestas substâncias, não só devido à sua importância em processos bioquímicos vitais, como também ao destaque cada vez maior que apresentam em variados estudos farmacológicos. O presente trabalho buscou avaliar e comparar o efeito antifúngico de naftoquinonas frente a cepas de Candida tropicalis resistentes e sensíveis ao fluconazol, utilizando diferentes técnicas tais como métodos de microdiluição em caldo, procedimentos de citometria de fluxo e ensaio do Cometa. Utilizamos sete cepas de Candida tropicalis resistentes ao fluconazol para esse estudo, as quais foram isoladas de sangue e faziam parte da colecção de leveduras do Laboratório de Bioprospecção Experimental em leveduras (LABEL), afiliado com a Faculdade de Farmácia da Universidade Federal do Ceará . Foi utilizado três compostos de naftoquinonas frente à 07 cepas de Candida tropicalis e foram submetidas aos testes de Sensibilidade in vitro , onde apresentaram uma potente atividade antifúngica. Através da Citometria de Fluxo, foi possível avaliar alterações morfológicas e de integridade da membrana significativas desses compostos frentes às cepas, além de disfunção mitocondrial e produção de espécies reativas de oxigênio. Através do ensaio do Cometa foi possível encontrar danos significativos ao DNA. Em síntese, os resultados sugerem que estes compostos podem ser usados como agentes antifúngicos para o tratamento de candidemias.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_4463_.pdf: 2463617 bytes, checksum: 6f1b43fe12a243fee41aae39133a8316 (MD5) Previous issue date: 2010-12-10 / RESUMO: A frequência de candidemia tem aumentado nas últimas décadas, com crescente ocorrência de espécies não-albicans. Candida tropicalis representa, em geral, a espécie não-albicans mais freqüente no Brasil e pode apresentar crescimento tipo trailing nos testes de microdiluição em caldo, frente a drogas azólicas, o que dificulta e confunde a leitura dos valores de CIM. Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a ocorrência de candidemia causada por C. tropicalis no HUCAM e seu perfil de suscetibilidade a fluconazol, itraconazol e anfotericina B, conforme metodologia de referência M27-A3 (CLSI, 2008), propor modificações deste teste, além de avaliar a influência de diferentes períodos de incubação e formas de leitura. Isolados de Candida tropicalis foram selecionados, através da realização de teste de suscetibilidade de acordo com M27-A3, e submetidos aos testes modificados, como a incubação na temperatura de 42°C, a adição de TSA ou a adição do composto colorimétrico resazurina. Os resultados obtidos nos testes modificados foram avaliados através da determinação das concordâncias categóricas e essenciais com o teste padrão. Os resultados mostraram que no período de 2006 a 2009, a frequência de candidemia no HUCAM variou de 1,21 a 1,65 casos/1.000 admissões hospitalares e de 0,16 a 0,25 casos/1.000 pacientes-dia. C. albicans representou 45% na etiologia dos episódios, seguida por C. tropicalis (26%), C. parapsilosis (14%), C. glabrata (10%) e outras (C. krusei, C. guilliermondii e C. lusitaniae). Os maiores percentuais de resistência a fluconazol e a itraconazol ocorreram com 48 horas de incubação, em relação ao período de 24 horas (26% versus 5% e 17% versus 1,2%, respectivamente). 28,05% dos isolados apresentaram crescimento tipo trailing para uma ou para as duas drogas testadas. As concordâncias categóricas e essenciais dos testes modificados, em relação à metodologia padrão, variaram de 70 a 87%, com 24 horas de incubação e para ambas a drogas. Com 48 horas de incubação, as modificações introduzidas (incubação a 42ºC e adição de TSA) propiciaram menores percentagens de concordâncias categóricas e essenciais que o método com adição de resazurina. A incubação a 42°C correlacionou com as melhores concordâncias entre as formas de leitura visual e espectrofotométrica, em comparação com o método padrão. Diferentes perfis de crescimento tipo trailing foram observados, sendo que os três métodos modificados foram eficazes em reduzir este fenômeno com 24 horas de incubação, mas apenas os métodos a 42ºC e com TSA foram capazes de reduzir o trailing com 48 horas de incubação. A análise de prontuários médicos permitiu verificar que isolado com crescimento tipo trailing apresentou resposta terapêutica satisfatória ao fluconazol e que isolado que permaneceu resistente nos testes modificados não respondeu a tratamento com fluconazol, in vivo. PALAVRAS CHAVES: Candida tropicalis, Candidemia; Teste de suscetibilidade

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-08-22T13:22:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertaçã DRR Version Final (OK).pdf: 1691284 bytes, checksum: 6912ca404ab994c56e027c6e09ea8939 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-22T13:22:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertaçã DRR Version Final (OK).pdf: 1691284 bytes, checksum: 6912ca404ab994c56e027c6e09ea8939 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / CNPQ / Os biossurfactantes são moléculas anfipáticas produzidas por micro-organismos e possuem importância recentemente devido às várias e importantes aplicações industriais e ambientais. Estes compostos possuem vantagens como biodegradabilidade, produção a partir de fontes renováveis além de funcionalidade sobre condições extremas de pH, salinidade e temperatura. Entretanto, a sua utilização na indústria depende da redução do custo associado a sua produção, sendo uma possível estratégia o uso de fontes renováveis como os resíduos agro-industriais. Neste sentido, a linhagem de Candida tropicalis demonstrou habilidade para converter resíduos agro-industriais (soro de leite, manipueira e óleo de soja pós-fritura) em meio de produção de biossurfactante empregando um planejamento fatorial 2 3 . A seleção da melhor condição do planejamento foi avaliada utilizando como variável resposta tensão superficial. Desta forma, o melhor resultado foi obtido no meio basal (3% de soro de leite, 7% de manipueira e 10% óleo de soja pós-fritura), observando-se uma redução da tensão superficial da água de 72 para 30,8 mN/m. Ao mesmo tempo, a degradação de petroderivados foi avaliada no meio Bushnell Haas, com o indicador redox 2,6- diclorofenol – indofenol e com a linhagem selvagem aclimatada em óleo diesel a 30%. Os resultados obtidos evidenciaram que a levedura aclimatada apresentou o melhor resultado para o diesel com 98% de degradação. Em seguida, a linhagem foi identificada molecularmente como Candida tropicalis. Desse modo foi realizado um perfil de crescimento e produção do biossurfactante durante 96 horas de cultivo a 150 rpm, com redução da tensão superficial do meio de 70 mN/m para 28,9 mN/m. O biossurfactante produzido demonstrou estabilidade em condições extremas de pH (2- 12), temperatura (4, 70, 100 e 120°C) e concentração salina (2-10%). O rendimento do biossurfactante isolado foi de 3,9 g/L, com uma concentração micelar crítica de 1,5%. Além disso, o novo biossurfactante foi caracterizado como polimérico (51% de proteinas, 37% de lípidos e 11 % de carbohidratos), apresentando uma atividade antimicrobiana para as bactérias Pseudomonas aeruginosa sp. Salmonella sp. UCP 6017, Serratia marcescens UCP 1549, Eschericia coli, Lactobacillus sp., Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Bacillus licheniformis UCP 1013, e a levedura Candida albicans. Ao mesmo tempo, o biossurfactante demonstrou não ser tóxico quando testado em sementes de Brassica oleracea, Lactuca sativa L., Solanum lycopersicum. Os resultados obtidos confirmaram o elevado potencial biotecnológico da Candida tropicalis na biotransformação de rejeitos agroindustriais na produção de um novo biossurfactante, indicando uma diversidade de aplicações em processos biotecnológicos (biorremediação com poluentes hidrofóbicos), como também para a saúde atuando contra bactérias Gram positivas e negativas, além da levedura oportunista C. albicans. / Surfactants are amphipathic molecules produced by microorganisms and have been gaining importance recently due to several important industrial and environmental applications. These compounds have advantages such as biodegradability; production from renewable sources other feature under extreme conditions of pH, salinity and temperature. However, its use in the industry depends on reducing the cost associated with its production, being one possible strategy the use of renewable sources such as agro-industrial waste. Therefore, Candida tropicalis demonstrated ability to convert agro-industrial waste (whey, cassava wastewater and post-fry soy oil) in biosurfactant production medium employing a factorial design 23. The selection of the best condition of the planning was assessed using as variable surface tension response. Thus, the best result was obtained in basal medium (3% whey, 7% cassava wastewater and 10% soybean oil post-frying), observing a reduction of the surface tension of water from 72 to 30.8 mN/m. At the same time, petro derivatives degradation was evaluated in the middle Bushnell Haas, redox indicator with 2,6-dichlorophenol - indophenol and the wild type strain acclimatized for diesel fuel to 30%. The results showed that the acclimatized yeast showed the best result for the diesel with 98% degradation. Then, the strain was identified as Candida tropicalis molecularly. Thus, it performed a growth profile and production of the biosurfactant for 96 hours of cultivation at 150 rpm, reducing the surface tension from 70 mN/m to 28,9 mN/m. The produced biosurfactant showed stability in extremes conditions of pH (2-12), temperature (4, 70, 100 and 120°C) and salt concentrations (2-10%). The yield of isolated biosurfactant was 3.9 g/L, with a critical micelle concentration of 1.5%. Furthermore, the new biosurfactant was characterized as a polymeric (51% protein, 37% lipid and 11% carbohydrate), having an antimicrobial activity for Pseudomonas aeruginosa sp. Salmonella sp. UCP 6017, Serratia marcescens UCP 1549, Eschericia coli, Lactobacillus sp., Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Bacillus licheniformis UCP 1013, and the yeast Candida albicans. At the same time, the biosurfactant was not toxic when tested in Brassica oleracea, Lactuca sativa L., Solanum lycopersicum. The results confirmed the high biotechnological potential of Candida tropicalis in the biotransformation of agroindustrial wastes for the production of a new biosurfactant indicating a variety of applications in biotechnology processes (bioremediation with hydrophobic pollutants) as well health acting against positive and Gram negative bacteria, as well as opportunistic yeast C.albicans.

SERPA, J. F. Produção da enzima xilose redutase por Candida tropicalis ATCC750 usando hidrolisado hemicelulósico do bagaço de caju. 2016. 68 f, Dissertação (Mestrado em Engenharia Química) – Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Hohana Sanders (hohanasanders@hotmail.com) on 2016-12-05T17:04:31Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_jfserpa.pdf: 1668343 bytes, checksum: 23472e000e232c0bab4b717ec91b621a (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2016-12-26T14:16:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_jfserpa.pdf: 1668343 bytes, checksum: 23472e000e232c0bab4b717ec91b621a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-26T14:16:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_jfserpa.pdf: 1668343 bytes, checksum: 23472e000e232c0bab4b717ec91b621a (MD5) Previous issue date: 2016-03-15 / Xylose reductase enzyme (EC 1.1.1.21) has potential application in the production of xylitol, and is an intracellular enzyme commonly found in yeast. Xylitol is a carbohydrate-alcohol used in food, dental, pharmaceutical and cosmetic industries. The large-scale production of this enzyme, as well as its industrial application for the production of xylitol and other bioproducts, has been limited due to the high price of commercial xylose. This problem has motivated researchers to develop better techniques for reducing the costs of obtaining XR, for example, the search for new raw material and the process conditions. Among possible feedstocks, lignocellulosic materials, as cashew apple bagasse, are low cost sources with potential applications in bioprocesses. In this context, the aim of this study was to evaluate the production of xylose reductase enzyme (XR) and xylitol by biotechnological processes by the yeast Candida tropicalis ATCC750 and hemicellulose hydrolysate from cashew apple bagasse (CAB) as substrate. The hemicellulose hydrolysate from cashew apple bagasse (HBCD) was obtained by acid hydrolysis with diluted sulfuric acid (H2SO4) and it used as a culture medium. The processes were conducted in orbital shaker at 150 rpm and different temperatures (25 °C, 30 °C, 35 °C and 45 °C). The xylose reductase enzyme extracts were used to reduce xylose to xylitol and the XR activity was determined by NADPH oxidation reaction at 25 °C. According to the analyzed data using hemicellulose hydrolysate (HBCD) medium, the highest microbial growth was observed at 25 °C and 30 °C and slightly growth at 40 °C. Under the experimental conditions evaluated, the production of xylitol was not observed, but there were the production of xylose reductase enzyme and ethanol. The XR from Candida tropicalis resulted in a crude extract with a higher enzymatic activity in the temperature of production at 25 °C (0.265 U/mL). In the partial characterization of the enzyme, the optimum pH and temperature were 7.0 and 50 °C, respectively. Subsequently, the gel electrophoresis was performed under denaturing conditions for identification of the enzyme fractions, which identify a heterodimeric structure with a molecular weight of approximately 30 kDa. The results showed that the cashew apple bagasse hydrolysate did not favor the xylitol production in the studied conditions; however, it is a potential means for biotechnological production of the enzyme xylose reductase (XR). / A enzima xilose-redutase (EC 1.1.1.21) tem potencial aplicação na produção de xilitol a partir de xilose, e é uma enzima intracelular comumente encontrada em leveduras. O xilitol é um açúcar-álcool utilizado em indústrias alimentícia, odontológica, farmacêutica e de cosmético. A produção em larga escala desta enzima, bem como a sua aplicação industrial para a fabricação de xilitol e outros bioprodutos de valor agregado, tem sido limitado devido ao alto preço da xilose comercial. Este problema tem incentivado aos pesquisadores a trabalhar para o desenvolvimento de melhores técnicas para reduzir os custos de obtenção da XR, como, por exemplo, a busca por novas fontes de matéria-prima e condições do processo. Entre as possíveis matérias-primas, os materiais lignocelulósicos como, o bagaço de caju, são fontes de baixo custo com potenciais aplicações em bioprocessos. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a produção da enzima xilose redutase (XR) e de xilitol por processos biotecnológicos, através da levedura Candida tropicalis ATCC750 utilizando o hidrolisado hemicelulósico de bagaço de caju (BC) como substrato. O hidrolisado hemicelulósico do bagaço de caju (HBCD) foi obtido por hidrólise com ácido sulfúrico (H2SO4) diluído e aplicado como meio de cultivo. A produção da enzima foi realizado por bioprocessos conduzidos em agitador orbital a 150 rpm a diferentes temperaturas (25 °C, 30 °C, 35 °C e 45 °C). O extrato enzimático produzido foi utilizado para reduzir a xilose em xilitol e determinou-se a atividade da XR através da reação de oxidação de NADPH a 25 °C. De acordo com os dados analisados, o maior crescimento microbiano foi observado nas temperaturas de 25 °C e 30 °C, e diminuiu consideravelmente a 40 °C usando o meio hidrolisado hemicelulósico do bagaço de caju (HBCD). Nas condições avaliadas, não houve a produção de xilitol ocorrendo, no entanto, a produção da enzima xilose redutase e de etanol. A XR da Candida tropicalis resultou em um extrato bruto com uma maior atividade enzimática na temperatura de produção de 25 °C (0,265 U/mL). Na caracterização parcial da enzima, pH e a temperatura ótima da atividade enzimática foram pH 7,0 e 50 °C, respectivamente. Posteriormente, realizou-se a eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes para a identificação das frações da enzima, obtendo uma indicação de uma estrutura dimérica com peso molecular de, aproximadamente, 30 KDa. Com os resultados apresentados, pode-se considerar que o hidrolisado de bagaço de caju não favoreceu a produção de xilitol, contudo, é um meio potencial para a produção biotecnológica da enzima xilose redutase (XR).

SILVA, N. C. G. Estudo da biotransformação de fenol por Candida tropicalis ATCC 750 livre e imobilizada em bagaço de caju. 2017. 87 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia Química)-Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Hohana Sanders (hohanasanders@hotmail.com) on 2017-07-19T12:42:59Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_ncgsilva.pdf: 1798797 bytes, checksum: e8ab0fc61c5f4341acb792025acd2872 (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2017-07-20T16:33:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_ncgsilva.pdf: 1798797 bytes, checksum: e8ab0fc61c5f4341acb792025acd2872 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-20T16:33:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_ncgsilva.pdf: 1798797 bytes, checksum: e8ab0fc61c5f4341acb792025acd2872 (MD5) Previous issue date: 2017-03-10 / Biological treatments have been widely studied for being more efficient and economical than to physical and chemical treatments of waste water containing phenol. However, microbial biotransformation undergoes inhibitory effects at higher phenol concentrations which represents a bottleneck for successful bioremediation. The use of immobilized cells guarantees a greater resistance of the microorganism to factors that interfere in the processes. In this context, a phenol biotransformation by a pure culture of Candida tropicalis ATCC 750 free and immobilized in cashew-apple bagasse was studied using a discontinuous reactor, in order to develop a viable process of biotransformation. Cashew-apple bagasse was used because it is a cheap and abundant support alternative. Degradation kinetics of phenol with immobilized cells was compared with degradation kinetics using free cells. The maximum degradation rates were 16.17 mg.g-1.h-1 (99.7%) and 15.25 mg.g-1.h-1 (99.8%) for free and immobilized cells, respectively. The best conditions of degradation was obtained at 30 °C, pH 6.0, 150 rpm and 1100 mg.L-1 initial phenol concentration, for studies with free and immobilized cells. 73% of the immobilized cells can be effectively retained during storage at 4 °C for up to 30 days and can be reused for more than eight cycles of biotransformation. In addition, after a previous adaptation of the microorganism to the medium with phenol, it was possible to obtain biotransformation results for concentrations of 1400-2000 mg.L-1 phenol. The analysis of the metabolic pathway showed that the degradation process of the phenol follows the path of ortho-cleavage of the aromatic ring by the enzyme 1,2-dihydroxyigenase leading to the formation of cis, cis muconic acid. For studies with immobilized cells, a simple evaluation of the external mass transfer was performed in order to identify any type of limitation by diffusion effects, consisting of such limitations occurring, but at a low intensity. The results obtained justify the applicability of cashew-apple bagasse as a support matrix for the immobilization of C. tropicalis ATCC 750 to biotransformation of phenolic compounds from industrial waste water, and is a promising process. / Tratamentos biológicos têm sido amplamente estudados por se mostrarem mais eficientes e econômicos em relação a tratamentos físicos e químicos de águas residuais contendo fenol. Contudo, a biotransformação microbiana sofre efeitos inibitórios em certas concentrações de fenol, o que representa um gargalo para uma biorremediação bem sucedida. O uso de células imobilizadas pode vir a proporcionar uma maior resistência do micro-organismo a fatores que interferem no processo. Neste contexto, estudou-se a biotransformação de fenol por uma cultura pura de Candida tropicalis ATCC 750 livre e imobilizada em bagaço de caju in natura, num reator descontínuo utilizando, a fim de se desenvolver um processo viável. O bagaço de caju foi usado por ser uma alternativa de suporte barato e abundante. A cinética de biotransformação do fenol com células imobilizadas foi comparada com a cinética utilizando células livres. As taxas de biotransformação máximas foram 16,17 mg.g-1.h-1 (99,7%) e 15,25 mg.g-1.h-1 (99,8%) para células livres e células imobilizadas, respectivamente. A biotransformação do fenol ocorreu de forma mais eficiente a 30 °C, pH 6,0, 150 rpm e concentração inicial de fenol de 1100 mg.L-1, para os estudos com células livres e imobilizadas. Estudos revelaram que 73% das células imobilizadas podem ser efetivamente retidas durante o armazenamento a 4 °C e até 30 dias podendo ser reutilizadas por mais de oito ciclos de biotransformação. Além disso, após uma adptação prévia do micro-organismo ao meio com fenol, foi possível obter resultados de biotransformação para concentrações iniciais de fenol de 1400 mg.L-1 a 2000 mg.L-1. A análise da rota metabólica mostrou que o processo de biotransformação do fenol pela levedura estudada segue pela rota de orto-clivagem do anel aromático pela enzima 1.2-dihidroxigenase levando à formação do cis, cis ácido mucônico. Para os estudos com células imobilizadas, foi realizada uma avaliação simples da transferência de massa externa, a fim de idenficar algum tipo de limitação por efeitos difusionais, constando que tais limitações ocorriam, mas em pequena intensidade. Os resultados obtidos justificam a aplicabilidade do bagaço de caju como matriz de suporte para a imobilização de C. tropicalis ATCC 750 na biotransformação de compostos fenólicos de águas residuais industriais e apresenta um processo promissor.

OLIVEIRA, Jonathas Sales de. Sensibilidade a antifúngicos, atividade exoenzimática e produção de biofilme por cepas de Candida tropicalis de origem animal. 2013. 73 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T13:14:07Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T13:27:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T13:27:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) Previous issue date: 2013 / In recent years there has been a significant increase in the incidence of fungal infections caused by Candida species. Although C. albicans be considered the principal representing of the genus, other species have been gaining prominence. C. tropicalis, for example, has been associated with serious invasive cadidiases, being the first or second type of non-Candida albicans Candida most commonly isolated in humans with candidemia and candiduria and is frequently isolated from healthy animals and animals with candidiasis. To establish infection, C. tropicalis expresses many virulence factors such as the secretion of enzymes phospholipases and proteases, biofilm production, among others. This study aimed to evaluate the in vitro antifungal susceptibility profile and production of virulence factors in strains of C. tropicalis (n=100) isolated from several animal species. The strains were subjected to in vitro susceptibility testing by broth microdilution test, M27-A3 protocol, standardized by the Clinical and Laboratory Standards Institute against amphotericin B, itraconazole and fluconazole. We also evaluated the virulence attributes, such as proteases and phospholipases production and biofilm formation. Regarding the susceptibility of C. tropicalis strains, 38% were resistant to itraconazole, 40% were resistant to fluconazole and 34% were resistant to both azoles. None of the strains were resistant to amphotericin B. Regarding the production of proteases, 84% of the strains secreted these enzymes in the medium with pH 5.0, whereas only 40% of the strains were active at pH 3.5. Only 8% of the strains produced phospholipases. The strains showed different pattern in biofilm production, which 63,2% were strong producers, 17,6% were moderate producers, and 13,3% were weak producers. In sumary, the C. tropicalis strains isolated from animals showed high rate of resistance to azoles and expressed important virulence factors, indicating a potential threat to human and animal health. / Nos últimos anos houve um aumento significativo na incidência de infecções fúngicas causadas por leveduras do gênero Candida. Apesar de C. albicans ser considerada a principal representante do gênero, outras espécies vêm ganhando destaque. C. tropicalis, por exemplo, tem sido associada à cadidíases invasivas graves, sendo a primeira ou segunda espécie de Candida não-albicans mais comumente isolada em candidemia e candidúria em humanos, além de ser frequentemente isolada da microbiota de animais saudáveis e com candidíase. Para estabelecer a infecção, C. tropicalis expressa diversos fatores de virulência, como a secreção de enzimas protease e fosfolipase, a produção de biofilme, dentre outros. O presente trabalho buscou avaliar o perfil de sensibilidade antifúngica in vitro e produção de fatores de virulência de cepas de C. tropicalis (n=100) isoladas de diferentes espécies animais. As cepas foram submetidas a teste de sensibilidade in vitro por meio do método de microdiluição em caldo, protocolo M27-A3, padronizado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute, frente anfotericina B, itraconazol e fluconazol. Foram avaliados ainda os atributos de virulência: produção de enzimas proteases e fosfolipases e produção de biofilme. Quanto ao perfil de sensibilidade das cepas de C. tropicalis, 38% foram resistentes a itraconazol, 40% resistentes a fluconazol e 34% foram resistentes a ambos os derivados azólicos. Nenhuma cepa apresentou resistência a anfotericina B. Quanto a produção de proteases, 84% das cepas secretaram estas enzimas em meio com pH 5,0, enquanto somente 40% das cepas foram ativas em pH 3,5. Somente 8% das cepas produziram fosfolipases. As cepas apresentaram padrão diferenciado na produção de biofilme, em que 63,2% foram consideradas fortes produtoras, 17,6% foram consideradas moderadas produtoras e 13,3% foram consideradas fracas produtoras. Em suma, os isolados de C. tropicalis provenientes de animais apresentaram resistência a derivados azólicos e expressaram fatores de virulência importantes, indicando potencial risco à saúde humana e animal.

We have inestigated the expression of the genes hydratase-dehydrogenase-epimerase (HDE), acyl-CoA oxidase (AOX) and catalase (CATL) of the diploid yeast Candida tropicalis. These genes encode enzymes which are localized to the peroxisome. Expression of each gene was monitored by immunoblot analysis of yeast lysates using antibodies directed against each protein. We demonstrate that carbon sources influence expression of these genes, and do so in a coordinate fashion. We expressed C. tropicalis HDE in Saccharomyces cerevisiae and demonstrate that this trifunctional enzyme can be regulated by S. cerevisiae in a fashion that closely resembles that of C. tropicalis. Expression of constructs containing deletions in the upstream region of the HDE gene allowed us to localize regions responsible for regulating the expression of this gene. Regions were identified that are responsible for both repression by glucose and induction by oleic acid. A glucoseresponsive region lies between nucleotides -466 and -334. An oleic acid-responsive region lies between nucleotides -333 and -281. An additional region controlling derepression by nonfermentable carbon sources is located downstream of nucleotide -281. Comparison of the upstream nucleotide sequences of HDE, AOX and CATL both to each other, and to upstream regions of other oleic acid-responsive genes of C. tropicalis has identified possible consensus nucleotide sequences for glucose-and oleic acid-responsive upstream elements. Since the regulation of the HDE gene in S. cerevisiae closely resembles that of C. tropicalis, this implies that similar mechanisms of transcriptional control operate in both yeasts. / Thesis / Master of Science (MS)

SILVA, Cecília Rocha da. Efeito da combinação de amiodarona com fluconazol, in vitro, frente a isolados de C. tropicalis resistentes ao fluconazol : novos olhares para antigos fármacos. 2012. 88 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-23T15:28:48Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_crsilva.pdf: 1205725 bytes, checksum: c2595207f40718543809683053127039 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-08-06T11:50:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_crsilva.pdf: 1205725 bytes, checksum: c2595207f40718543809683053127039 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T11:50:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_crsilva.pdf: 1205725 bytes, checksum: c2595207f40718543809683053127039 (MD5) Previous issue date: 2012 / Candida tropicalis is a diploid yeast causing superficial infections and / or systemic, which can be acquired endogenously or exogenously and can affect several organs. In Brazil, among the species of Candida spp. The C.tropicalis is the second most common species isolated in Ceará and is rarely studied. Nowadays, we have experienced a significant increase in invasive fungal infections. But antifungal drugs on the market are restricted to a small number when compared to the antibacterial. Therefore, this fact coupled with the increased frequency of cross-resistance is necessary to search for new therapeutic strategies. Amiodarone (AMD) is traditionally used to treat patients with arrhythmia. Recent studies have shown a broad antifungal activity of this drug when combined with fluconazole (FLC). In the present study we induced resistance in seven strains of Candida tropicalis and evaluate a possible synergism between FLC and AMD. The evaluation of the interaction of the drugs was determined by calculating the Fractionary Inhibitory Concentration (FICI) and by flow cytometry, where we also evaluated the likely mechanism of action of this synergism. The isolates used in this study belong to the Laboratory of Experimental Bioprospecting in yeast (LABEL) the UFC. For the fulfillment of the methodology, the strains were recovered from stock and identified by molecular biology. The induction was carried out adapting the protocol of Pinto and Silva (2009). Sensitivity tests were performed using the broth microdilution test standardized by the CLSI, the document M27-A3. To evaluate the synergism used the technique of checkboard. Finally, to determine the possible mechanism of action of synergism, we determine the membrane integrity, mitochondrial transmembrane potential, formation of reactive oxygen species (ROS), comet assay, analysis of the oxidation of purine bases and caspases. Strains C.tropicalis after ~ 100 days reached an MIC> 64μg/mL. The sensitivity tests were MIC> 64μg/mL both the FLC as AMD. Of the strains tested, six showed synergism. The treatment changed the FLC + AMD plasma membrane integrity and mitochondrial increased levels of intracellular ROS, cause DNA damage and therefore led cell death by apoptosis. / Candida tropicalis é uma levedura diplóide causadora de infecções superficiais e/ou sistêmicas, as quais podem ser adquiridas de maneira endógena ou exógena e podem acometer diversos órgãos. No Brasil, dentre as espécies de Candida spp., a C.tropicalis é a segunda espécie mais comumente isolada e no Ceará é pouco estudada. Nos dias atuais, temos vivenciado um aumento significativo das infecções fúngicas invasivas. Porém as drogas antifúngicas disponíveis no mercado são restritas a um pequeno número quando comparadas as antibacterianas. Logo, este fato unido ao aumento da frequência de resistência cruzada faz necessária a busca por novas estratégias terapêuticas. A amiodarona (AMD) é usada classicamente para tratar pacientes com arritmia. Trabalhos recentes têm demonstrado uma ampla atividade antifúngica desta droga quando associado ao fluconazol (FLC). No presente estudo induzimos resistência em sete cepas de Candida tropicalis e avaliamos um eventual sinergismo entre FLC e AMD. A avaliação da interação das drogas foi determinada através do cálculo da Fractionary Inhibitory Concentration (FICI) e por meio da técnica de citometria de fluxo, onde também avaliamos o provável mecanismo de ação desse sinergismo. Os isolados utilizados no estudo pertencem ao Laboratório de Bioprospecção Experimental em Leveduras (LABEL) da UFC. Para o cumprimento da metodologia, as cepas foram recuperadas do estoque e identificadas por biologia molecular. A indução foi realizada adaptando-se o protocolo de Pinto e Silva (2009). Os testes de sensibilidade foram realizados utilizando-se o teste de microdiluição em caldo padronizado pelo CLSI, segundo o documento M27-A3. Para avaliar o sinergismo utilizou-se a técnica do checkboard. Por fim, para verificar o possível mecanismo de ação do sinergismo, determinamos a integridade de membrana, potencial transmembrana mitocondrial, formação de espécies reativas de oxigênio (ROS), teste do cometa, análise da oxidação de bases purinas e caspases. As cepas de C.tropicalis após ~100 dias atingiram um CIM > 64µg/mL. Os testes de sensibilidade apresentaram CIM > 64µg/mL tanto para o FLC como para AMD. Das cepas testadas, seis apresentaram sinergismo. O tratamento FLC+AMD alterou a integridade da membrana plasmática e mitocondrial, aumentou os níveis de ROS intracelularmente, causou danos ao DNA e, consequentemente, conduziu morte celular por apoptose.

Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Cristiane Duque / Banca: Janaina de Cássia Orlandi Sardi / Resumo: O gênero Candida pode ser encontrado em até 50% dos indivíduos saudáveis não causando danos aparentes, porém, sob condições predisponentes como doenças sistêmicas ou condições fisiológicas, pode tornar-se patogênico causando inflamação e destruição tecidual. Candida spp. na forma de biofilmes são importantes no desenvolvimento de infecções, pois estão associados a altos níveis de resistência a agentes antimicrobianos. Terapias alternativas com extratos naturais abrem novas perspectivas para prevenção e controle das doenças bucais na busca de efeitos terapêuticos favoráveis. O Terpinen-4-ol é um monoterpeno que atua na indução da perda da membrana e apresenta amplo espectro de atividade antimicrobiana e atividade anti-inflamatória. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antifúngico, sinérgico/aditivo, inibição da adesão em células orais e alteração dos fatores de virulência do Terpinen-4-ol sobre Candida albicans e Candida tropicalis. Assim, foi realizada a identificação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) do Terpinen-4-ol sobre cepas padrão de C. albicans (ATCC 90028) e C. tropicalis (ATCC4563), empregando-se o método de microdiluição em caldo. Biofilmes mono e dual-espécies foram preparados usando o modelo de placa de microtitulação estática e quantificados por unidades formadoras de colônias (UFC/mL). O efeito do Terpinen-4-ol na adesão de C.albicans e C. tropicalis foi realizado em co-cultura com células orais NOK Si como tam... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The genus Candida can be found in up to 50% of healthy individuals without causing apparent damage, however, under predisposing conditions such as systemic diseases or physiological conditions, can become pathogenic causing inflammation and tissue destruction. Candida spp. in the form of biofilms are important in the development of infections because they are associated with high levels of resistance to antimicrobial agents. Alternative therapies with natural extracts open new perspectives for prevention and control of oral diseases in search of favorable therapeutic effects. The Terpinen-4-ol is a monoterpene engaged in membrane loss of induction and presents broad spectrum of antimicrobial and anti-inflammatory activity. The aim of this study was to evaluate the antifungal effect, synergistic / additive inhibition of adhesion on oral cells and modification of virulence factors of Terpinen-4-ol of Candida albicans and Candida tropicalis. Thus, the identification of Minimum Inhibitory Concentration was performed (MIC) and Minimum Fungicidal Concentration (MFC) of Terpinen-4-ol on standard strains C. albicans (ATCC 90028) and C. tropicalis (ATCC4563), using the method microdilution broth. Biofilms mono and dual-species were prepared using the microtiter plate static model and quantitated by colony forming units (CFU / mL). The effect of Terpinen-4-ol in the adhesion on C. tropicalis and C. albicans was carried out in co-culture with oral cells NOK Si as well as virulence facto... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A incidÃncia de infecÃÃes oportunistas causadas por fungos, com destaque para as leveduras do gÃnero Candida vem aumentando substancialmente. Estudos relatam que tem sido observado um notÃvel crescimento de infecÃÃes por espÃcies nÃo albicans (Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida parapsilosis e Candida krusei). Isolados clÃnicos resistentes aos azÃlicos, em especial ao fluconazol, sÃo cada vez mais relatados. As naftoquinonas sÃo uma importante classe de molÃculas biologicamente ativas, apresentando atividades antibacteriana, antifÃngica, antiviral, anti-inflamatÃria, antipirÃtica, anticancerÃgena e tripanocida e tem sido amplamente testadas em vÃrios estudos farmacolÃgicos. Nos Ãltimos anos intensificou-se o interesse nestas substÃncias, nÃo sà devido à sua importÃncia em processos bioquÃmicos vitais, como tambÃm ao destaque cada vez maior que apresentam em variados estudos farmacolÃgicos. O presente trabalho buscou avaliar e comparar o efeito antifÃngico de naftoquinonas frente a cepas de Candida tropicalis resistentes e sensÃveis ao fluconazol, utilizando diferentes tÃcnicas tais como mÃtodos de microdiluiÃÃo em caldo, procedimentos de citometria de fluxo e ensaio do Cometa. Utilizamos sete cepas de Candida tropicalis resistentes ao fluconazol para esse estudo, as quais foram isoladas de sangue e faziam parte da colecÃÃo de leveduras do LaboratÃrio de BioprospecÃÃo Experimental em leveduras (LABEL), afiliado com a Faculdade de FarmÃcia da Universidade Federal do Cearà . Foi utilizado trÃs compostos de naftoquinonas frente à 07 cepas de Candida tropicalis e foram submetidas aos testes de Sensibilidade in vitro , onde apresentaram uma potente atividade antifÃngica. AtravÃs da Citometria de Fluxo, foi possÃvel avaliar alteraÃÃes morfolÃgicas e de integridade da membrana significativas desses compostos frentes Ãs cepas, alÃm de disfunÃÃo mitocondrial e produÃÃo de espÃcies reativas de oxigÃnio. AtravÃs do ensaio do Cometa foi possÃvel encontrar danos significativos ao DNA. Em sÃntese, os resultados sugerem que estes compostos podem ser usados como agentes antifÃngicos para o tratamento de candidemias / The incidence of opportunistic infections caused by fungi, with emphasis on Candida species has increased substantially. Studies report that there has been a notable increase of infections by non-albicans species (Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida parapsilosis and Candida krusei). Clinical isolates resistant to azoles, particularly fluconazole, are increasingly reported. The naphthoquinones are an important class of active molecules biologically presenting antibacterial, antifungal, antiviral, antiinflammatory, antipyretic, anti-cancer and trypanocidal and has been tested extensively in several pharmacological studies. In recent years intensified the interest in in this substances, not only due to your importance in vital biochemical processes as well as the increasing emphasis that they show in various pharmacological studies. This study aimed to evaluate and compare the effect of antifungal naphthoquinones against strains of Candida tropicalis resistant and susceptible to fluconazole, using different techniques such as broth microdilution methods, procedures Flow Cytometry procedures and Comet assay. We use seven strains of Candida tropicalis resistant to fluconazole for this study, which were isolated from blood and were part of the collection of yeasts Experimental Laboratory Bioprospecting in yeast (LABEL), affiliated with the Faculty of Pharmacy, Federal University of CearÃ. We used three compounds of naphthoquinones against the seven strains of Candida tropicalis and were subjected to in vitro sensitivity tests, which showed an antifungal activity potent. Through Flow Cytometry, it was possible to assess morphological changes and membrane integrity of these compounds fronts to significant strains in addition to mitochondrial dysfunction and production of reactive oxygen species. Through the Comet assay was possible to find significant damage to DNA. In summary, the results suggest that these compounds may be used as antifungal agents for the treatment of candidemia