Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_4463_.pdf: 2463617 bytes, checksum: 6f1b43fe12a243fee41aae39133a8316 (MD5) Previous issue date: 2010-12-10 / RESUMO: A frequência de candidemia tem aumentado nas últimas décadas, com crescente ocorrência de espécies não-albicans. Candida tropicalis representa, em geral, a espécie não-albicans mais freqüente no Brasil e pode apresentar crescimento tipo trailing nos testes de microdiluição em caldo, frente a drogas azólicas, o que dificulta e confunde a leitura dos valores de CIM. Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a ocorrência de candidemia causada por C. tropicalis no HUCAM e seu perfil de suscetibilidade a fluconazol, itraconazol e anfotericina B, conforme metodologia de referência M27-A3 (CLSI, 2008), propor modificações deste teste, além de avaliar a influência de diferentes períodos de incubação e formas de leitura. Isolados de Candida tropicalis foram selecionados, através da realização de teste de suscetibilidade de acordo com M27-A3, e submetidos aos testes modificados, como a incubação na temperatura de 42°C, a adição de TSA ou a adição do composto colorimétrico resazurina. Os resultados obtidos nos testes modificados foram avaliados através da determinação das concordâncias categóricas e essenciais com o teste padrão. Os resultados mostraram que no período de 2006 a 2009, a frequência de candidemia no HUCAM variou de 1,21 a 1,65 casos/1.000 admissões hospitalares e de 0,16 a 0,25 casos/1.000 pacientes-dia. C. albicans representou 45% na etiologia dos episódios, seguida por C. tropicalis (26%), C. parapsilosis (14%), C. glabrata (10%) e outras (C. krusei, C. guilliermondii e C. lusitaniae). Os maiores percentuais de resistência a fluconazol e a itraconazol ocorreram com 48 horas de incubação, em relação ao período de 24 horas (26% versus 5% e 17% versus 1,2%, respectivamente). 28,05% dos isolados apresentaram crescimento tipo trailing para uma ou para as duas drogas testadas. As concordâncias categóricas e essenciais dos testes modificados, em relação à metodologia padrão, variaram de 70 a 87%, com 24 horas de incubação e para ambas a drogas. Com 48 horas de incubação, as modificações introduzidas (incubação a 42ºC e adição de TSA) propiciaram menores percentagens de concordâncias categóricas e essenciais que o método com adição de resazurina. A incubação a 42°C correlacionou com as melhores concordâncias entre as formas de leitura visual e espectrofotométrica, em comparação com o método padrão. Diferentes perfis de crescimento tipo trailing foram observados, sendo que os três métodos modificados foram eficazes em reduzir este fenômeno com 24 horas de incubação, mas apenas os métodos a 42ºC e com TSA foram capazes de reduzir o trailing com 48 horas de incubação. A análise de prontuários médicos permitiu verificar que isolado com crescimento tipo trailing apresentou resposta terapêutica satisfatória ao fluconazol e que isolado que permaneceu resistente nos testes modificados não respondeu a tratamento com fluconazol, in vivo. PALAVRAS CHAVES: Candida tropicalis, Candidemia; Teste de suscetibilidade

Orientador: Angélica Zaninelli Schreiber / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T18:50:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Biancalana_FernandaSimasCorrea_D.pdf: 1602190 bytes, checksum: f9f6d1fcbc7dcd1bf6b7e3dc9f3c4a90 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Nos últimos anos, os fungos demáceos têm sido intensamente reconhecidos como importantes patógenos, principalmente em pacientes imunocomprometidos, sendo reportadas como patogênicas mais de 100 espécies de 60 diferentes gêneros. O tratamento das infecções causadas por estes fungos é difícil, bastante demorado e algumas vezes sem sucesso, portanto, se fazem necessários mais estudos sobre a suscetibilidade destes patógenos a antifúngicos in vitro. Alguns autores têm demonstrado a excelente eficácia in vivo da terbinafina, em combinação com outros antifúngicos, para o tratamento destas infecções, porém são poucos os que avaliam seu efeito in vitro isoladamente, e menos ainda os relatos sobre associação desta com outros antifúngicos. A maioria dos trabalhos utiliza apenas o inóculo com conídios, que não é a principal morfologia do fungo encontrada no paciente. A realização de testes utilizando hifas poderia mimetizar as características do fungo no tecido infectado, demonstrando melhor o potencial terapêutico do antifúngico. Existem poucos relatos na literatura sobre avaliação dinâmica de crescimento de fungos, e nenhum deles realizado com fungos demáceos. Partindo deste princípio, foi investigada neste estudo a suscetibilidade in vitro de conídios e hifas fungos demáceos dos gêneros Alternaria, Bipolaris, Cladophialophora, Curvularia, Exophiala e Fonsecaea frente a anfotericina B, itraconazol e voriconazol e terbinafina, e esta última em combinação com os demais antifúngicos através da metodologia do tabuleiro de xadrez e avaliação dinâmica de crescimento. Quando avaliados isoladamente, o voriconazol foi o antifúngico mais ativo, seguido de itraconazol, terbinafina e anfotericina B, utilizando conídios. Quando foi feita a associação, os resultados indicaram 100% de sinergismo nas interações entre terbinafina e voriconazol, 96,5% de sinergismo entre anfotericina B e terbinafina e 75,9% de sinergismo entre terbinafina e itraconazol. Nenhum caso de antagonismo foi observado. Voriconazol e itraconazol demonstraram maior atividade frente a hifas dos isolados avaliados, seguidos de terbinafina e anfotericina B. Os isolados de C. bantiana e F. pedrosoi demonstraram altos valores de CIM frente a anfotericina B. Os valores de CIM obtidos para as hifas foram menores que os dos conídios, chegando a duas ou quatro diluições abaixo do valor da CIM. Os resultados demonstraram 100% de sinergismo entre a terbinafina e os azólicos ou a anfotericina quando utilizadas hifas no sistema BCT. Concluindo, os resultados obtidos neste trabalho sugerem que a forma de hifas dos isolados avaliados é mais suscetível que a de conídios frente aos antifúngicos avaliados tanto isoladamente, como em associação. / Abstract: In recent years, the dematiaceous fungi have been widely recognized as important pathogens, especially in immunocompromised patients, being reported as pathogenic, more than 100 species of 60 different genera. Treatment of infections caused by these fungi is difficult, time consuming and sometimes without success, therefore, more studies are needed about the susceptibility of the pathogens to antifungal agents in vitro. Some studies have demonstrated excellent in vivo efficacy of terbinafine in combination with other antifungals to treat these infections, but few ones have evaluated the in vitro effect of terbinafine alone, and even less are about association with other antifungal agents. Most used only the inoculum with conidia, which is not the essencial morphology of the fungus found in the patient. Testing susceptibility using hyphae could mimic the characteristics of the fungus in infected tissue, demonstrating more clearly the therapeutic potential of the antifungal agent. There are few reports in the literature on dynamic evaluation of mold growth, and none of them performed with dematiaceous fungi. With this assumption, was investigated in this study the in vitro susceptibility of terbinafine alone and in combination with amphotericin, itraconazole and voriconazole against conidia and hyphae of dematiaceous fungi belonging to genera: Alternaria, Bipolaris, Cladophialophora, Curvularia, Exophiala and Fonsecaea, using the checkerboard methodology and evaluation of dynamic growth. When evaluated alone, voriconazole was the most active antifungal agent, followed by itraconazole, terbinafine and amphotericin B, using the broth microdilution method with conidia. In the association, the results indicated 100% of synergism in interactions between voriconazole and terbinafine, 96.5% of synergism between amphotericin and terbinafine and 75.9% of synergism between terbinafine and itraconazole. No case of antagonism was observed. Voriconazole and itraconazole demonstrated the highest activity with the use of BCT with hyphae of isolates evaluated, followed by terbinafine and amphotericin B. Isolates of C. bantiana and F. pedrosoi showed higher MIC values compared to amphotericin B. MIC values obtained for hyphae were lower than those of conidia two or four dilutions below the MIC value. The results demonstrated 100% synergistic interactions between terbinafine and azoles or amphotericin when testing hyphae in BCT system. In conclusion, the present results suggest that the hyphae form of tested isolates are more susceptible than conidia to the antifungal agent evaluated alone or in combination. / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Angelica Zaninelli Schreiber, Maria Luiza Moretti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T13:48:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Loyola_AnaBeatrizAlkmimTeixeira_D.pdf: 5844968 bytes, checksum: 4d27c47d59746710e359ef7d4b61f1b7 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Os fungos filamentosos do gênero Aspergillus são fungos hialinos, saprófitas, encontrados no solo e na vegetação em decomposição e têm sido, crescentemente, relatados em casos de infecções sistêmicas ou disseminadas. A patogenicidade destes fungos oportunistas está na alta concentração dos microconídios no ar, facilitando a sua inalação. Infecções por Fusarium spp são altamente resistentes à terapia disponível, com prognostico desfavorável e taxa de mortalidade em torno de 57% dos casos. Vários relatos têm descrito a tolerância in vitro, ou resistência, de espécies de Aspergillus aos agentes antifúngicos após falha terapêutica com anfotericina B. A infecção por Aspergillus sp em pacientes imunossuprimidos apresenta taxa de mortalidade em torno de 86%, independente do tratamento antifúngico. Assim, testes de suscetibilidade a antifúngicos são de estrema importância. O teste de microdiluição, utilizando suspensão de conídios, foi recentemente padronizado pelo CLSI. No entanto, em regra, as infecções causadas por fungos filamentosos são caracterizadas pela presença de hifas no tecido infectado, sendo portanto, a realização do teste de suscetibilidade com hifas, de grande interesse clinico. A concentração inibitória mínima (CIM) de vários agentes antifúngicos pode ser determinada pela observação da inibição de crescimento de um hifa isolada. Há poucos relatos na literatura sobre a medição automatizada do crescimento de hifas de Aspergillus sp. e nenhum relato para hifas de Fusarium sp. pelo sistema 'BioCell-tracer POT. MARCA REGISTRADA¿... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Aspergillus and Fusarium species are hyaline moulds that are usually found in the soil and plants. These organisms have emerged as a cause of disseminated invasive disease. It has been suggested that airborne conidia might invade the respiratory tract with primary lung or sinus localisation Fusarium species are largely resistant to available chemotherapy and are correlated with poor prognosis and lethal outcome in 57% of the cases. Several reports have described in vitro tolerance or resistance of Aspergillus spp to antifungal infection in immunossupressed patients shows mortality around 86%, independente of antifungal treatment. Antifungal susceptibility testing of filamentous fungi has therefore become more importante. Since most infections caused by filamentous fungi are characterized by the presence of hyphal elements in the tissue, the monitoring of hyphal susceptibility might be of clinical interest. The MICs of several antifungal agents cam be determined based on the growth rate of a single hypha. There are only few reports for automatic growth evaluation for Aspergillus spp and no reports for Fusarium spp using the 'BioCell-tracer POT. MARCA REGISTRADA¿ system. In this work, we selected four clinical isolates of Aspergillus and four clinical isolates of Susarium. For all strains we prodeeded microdilution and hypha susceptibility antifungal evaluation with amphotericin B and itraconazole...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Angelica Zaninelli Schreiber / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T15:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Correa_FernandaSimas_M.pdf: 2038543 bytes, checksum: 170a6e791e2c64d599b88b8485092a96 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Dermatófitos do gênero Microsporum acometem preferencialmente pele e pêlos, sendo M.canis e M.gypseum as espécies mais isoladas em nosso meio. Antifúngicos tópicos e sistêmicos são indicados para o tratamento destas dermatofitoses, que é considerado mais difícil quando comparado ao de outros gêneros de fungos queratinofílicos. Deste modo, a determinação da suscetibilidade aos antifúngicos in vitro destes microrganismos é de interesse para embasamento da terapêutica empírica, avaliação de falhas terapêuticas, e testes de novos antifúngicos. No entanto, os dermatófitos não foram incluídos no documento relacionado do CLSI (M38-A, 2002). Os estudos disponíveis até o momento, utilizando conídios dos fungos, apresentam resultados muito divergentes, devido a falta de padronização e o grande número de variáveis pré-analíticas envolvidas. Em adição, uma vez que a forma de hifas predomina no tecido infectado, há controvérsias sobre o fato de se a forma conidial seria adequada para os testes. Há poucos relatos na literatura sobre avaliação dinâmica de crescimento de fungos e a taxa de inibição destes por drogas antifúngicas, mas nenhum destes realizados com dermatófitos. Este estudo se propôs a determinar condições para realização do teste de suscetibilidade pelo método de microdiluição em caldo e padronizar a avaliação de crescimento dinâmico pelo sistema BCT® para seis cepas do gênero Microsporum, determinando respectivamente CIM e CFM e taxas de inibição de crescimento frente a ciclopirox olamina, terbinafina e griseofulvina. Os resultados obtidos apontaram: ágar batata como o melhor meio de cultura para produção de conídios, inóculo de 1x 103 células/ml, incubação de 7 dias a 28ºC e leitura final considerando 100% de inibição do crescimento para o teste de microdiluição em caldo. Os resultados de CIM variaram de 1,0 a 16,0 µg/ml para ciclopirox olamina, de 0,005 a 0,004 µg/ml para terbinafina e de 2,5 a 20,0 µg/ml para griseofulvina. No Sistema Automatizado BioCell-Tracer® os testes foram realizados com: concentração de PLL de 0,05%; inóculo ? 1x106 conídios/ml em 5?l; incubação a 30ºC por 72 a 96h; 30ºC como temperatura de realização do teste e tempo total de experimento de 3 horas e 30 minutos. Todas as cepas apresentaram taxa de inibição de crescimento acima de 85% na fase de exposição à droga frente aos antifúngicos avaliados, na concentração equivalente ao resultado de CIM obtido pela técnica de microdiluição em caldo e, em pelo menos, uma diluição abaixo / Abstract: Dermatophytes of the genus Microsporum preferentially invade skin and hair, being M.canis and M.gypseum the most prevalent species in our routine. Topics and systemic antifungal agents are indicated for the treatment of theses dermatophytoses, which is considered more difficult when compared to other genera of keratinofilic fungi. By the way, the determination of in vitro antifungal susceptibility of these organisms is interesting as a guide of empiric therapy, evaluation of therapeutic failures and to evaluate new antifungal agents. However, dermatophytes were not included in the CLSI document (M38-A, 2002). The studies available until now, using fungi conidia, present divergent results due to the lack of standartization and the large number of pre-analytical variables involved. In addiction, once the hyphae forms predominate in infected tissues, there are controversies about if the conidial form would be adequate for the tests. There are few articles in the literature about dynamical evaluation of fungi growth and their growth inhibition rate in contact with antifungal agents, but none with dermatophytes. This study proposed the determination of conditions for broth microdilution susceptibility test and the standardization of dynamical growth evaluation by the BCT® system for six strains of Microsporum sp, determining respectively MIC and MFC and the inhibition rate after application of ciclopirox olamine, terbinafine and griseofulvin. The results pointed: potato dextrose agar as the best culture medium for conidium production, inoculum concentration of 1x 103 conidia/ml, incubation for 7 days at 28ºC and test enpoint at 100% of growth inhibition for broth microdilution test. The MIC results ranged from 1,0 to16,0 µg/ml for ciclopirox olamine, 0,005 to 0,004 µg/ml for terbinafine and 2,5 to 20,0 µg/ml for griseofulvin. On the automatizated system BioCell-Tracer®, the tests were realized with: PLL concentration of 0,05%; inocula of ? 1x106 conídia/ml in 5?l; incubation at 30ºC for 72 to 96hand also 30ºC as the test temperature, 3 hours and 30 minutes as total time of experiment. All strains showed growth inhibition rate above 85% on drug exposure phase against the antifungal agents evaluated, in MIC obtained by both microdilution method and, at least, one dilution below / Mestrado / Patologia Clinica / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Mariangela Ribeiro Resende, Maria Luiza Moretti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T01:04:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferrari_MichelaDeLuca_D.pdf: 2448021 bytes, checksum: 102166bb9666827fb2f7de549ded2752 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The complete abstract is available with the full electronic document / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica

Orientadores: Mariangela Ribeiro Resende, Maria Luiza Moretti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T14:58:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferrari_MichelaDeLuca_M.pdf: 2800534 bytes, checksum: 6c0f0dc17633a5c05f98eaf42e330cb7 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Os objetivos do presente estudo foram estimar a prevalência de resistência do M. tuberculosis aos fármacos de primeira linha entre pacientes com tuberculose diagnosticados no Hospital de Clínicas da Unicamp e avaliar o desempenho do método de microdiluição em placa com [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5diphenyl-tetrazolium bromide] (MTT) comparado ao Bactec MGIT 960®. No período foram notificados 360 casos de tuberculose. Destes 211 casos apresentaram cultura positiva para Mycobacterium sp, sendo incluídos 105 casos, nos quais foi identificado o M. tuberculosis. Dentre estes pacientes a apresentação pulmonar da TB ocorreu em 64,8% e co-infecção pelo HIV em 37,1%. A prevalência de resistência a qualquer fármaco foi de 6,7%; multidrogarresistência (RMP e INH) e resistência a INH e SM foram detectadas em 1%, em 3,8% e em 3,8% dos casos, respectivamente. Todos os isolados foram susceptíveis ao EMB. A resistência primária foi encontrada em quatro casos e resistência adquirida em três. Houve associação entre tratamento prévio e resistência (p=0,0181), as demais variáveis estudadas não foram associadas. Dentre os 119 isolados de M. tuberculosis incluídos para a avaliação do desempenho do MTT, ocorreu concordância de 100% para INH e EMB entre os métodos MTT e Bactec MGIT960®, de 99% para RMP (sensibilidade: 90%), enquanto que para SM houve concordância inferior aquela apresentada pelos outros fármacos (95,2%; sensibilidade: 90,9%). A prevalência de resistência entre os casos novos atendidos no Hospital de Clínicas da Unicamp no período de estudo foi de 3,8% para isoniazida, 1% para rifampicina, 3,8% para etambutol e 1% multidrogarresistente. Resistência a qualquer fármaco foi observada em 6,7% dos casos. O método colorimétrico com MTT apresentou bom desempenho e representa uma alternativa acurada, simples e de reduzidos custos, viável e sustentável para locais e países com limitados recursos. / Abstract: This cross-sectional, hospital-based study conducted between January 2006 and March 2008 sought to estimate the resistance of M. tuberculosis to first-line drugs among patients with tuberculosis confirmed by culture at a Brazilian hospital and evaluate the performance of the [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide] (MTT) microplate assay in comparison to the Bactec MGIT 960. During the study period were reported to the surveillance system 360 tuberculosis cases, 211 out of these were confirmed by positive culture for Mycobacterium sp and 105 out of these had M. tuberculosis isolated on culture and were included to the prevalence study. Pulmonary involvement was present in 64.8% of cases and HIV co-infection was found in 37.1%. The prevalence of M. tuberculosis resistance was 6.7%; multidrug-resistance [rifampin (RMP) and isoniazid (INH)] and resistance to INH and streptomycin (SM) were detected in 1%, in 3.8% and in 3.8% of cases, respectively. All isolates were susceptible to ethambutol (EMB). The resistance was primary in four cases and acquired in three cases. Previous treatment was associated with resistance (p=0.0181). Among 119 isolates of M. tuberculosis included to the MMTT performance evaluation, there was 100% observed agreement for INH and EMB between the MTT and Bactec MGIT 960¿ methods. For RMP, the observed agreement was 99% (sensitivity: 90%), and for SM, the level of agreement was lower (95.2%; sensibility 90.9%) than those of the other drugs. The prevalence of M. tuberculosis resistance among the new cases during the study period was 6.7%; multidrug-resistance and resistance to INH and streptomycin (SM) were detected in 1%, in 3.8% and in 3.8% of cases, respectively. The colorimetric method with tetrazolium (MTT) represents an accurate, simple and low cost alternative that is both viable and sustainable for settings with limited resources. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:55:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao mestrado Nazareth Klein.pdf: 9490018 bytes, checksum: a860548b52d0cb66494dd6a26c4306df (MD5) Previous issue date: 2006-10-23 / Este estudo foi conduzido para se avaliar a prevalência e a distribuição das espécies de Candida spp., isoladas de diversos materiais biológicos, obtidos de pacientes internados no Hospital Universitário Cassiano Antonio de Moraes (HUCAM), Vitória-ES, durante o período de janeiro de 2003 a dezembro 2005, e descrever o perfil de suscetibilidade de Candida não-albicans a drogas antifúngicas. A dentificação da espécie Candida albicans foi realizada no meio cromogênico CHROMagar-Candida® e confirmada pela indução positiva de tubo germinativo e/ou clamidoconídeo. A identificação das espécies não-albicans foi realizada pelos seus padrões morfológicos e bioquímicos e pelo sistema comercial API 20 C AUX. O perfil de suscetibilidade às drogas antifúngicas anfotericina B, itraconazol e fluconazol foi estabelecido pelo método de referência, microdiluição em caldo, de acordo com o documento M27-A2 do CLSI, 2002. Estudo comparativo foi realizado, empregandose o método Etest® para as cepas de Candida tropicalis, sendo incluída nesta etapa, a droga voriconazol. Os resultados mostraram 268 isolados de Candida spp., no geral, um predomínio de Candida não-albicans (54%), incluindo C. tropicalis (26%), C. parapsilosis (14%), C. glabrata (10%), C. Krusei (2%), C. guilliermondii (1.5%) e C. lusitaniae (0.5%). Ocorreu uma marcante transição na prevalência de Candida não-albicans, durante os três anos de estudo, oscilando na freqüência de 39% dos isolamentos em 2003 para 74% em 2005. As espécies não-albicans foram mais isoladas de urina (47%), seguido de sangue (39%) e cateter (8%). As maiores ocorrências foram na Unidade de Tratamento Intensivo Geral e Clínica Médica, com 23% em cada setor. A resistência para as espécies não-albicans ao fluconazol foi de 4% e, de suscetível dose-dependente (SDD) ao fluconazol e ao itraconazol foi de 2% e 3%, respectivamente (metodologia CSLI). Com esta metodologia, 98% das cepas de C. tropicalis foram sensíveis ao fluconazol e ao itraconazol, mas 2% foram SDD para estas drogas. Com o método Etest®, 2% dessas cepas foram resistentes (R) a ambas as drogas e 19% foram SDD ao itraconazol. Nenhum isolado de Candida não-albicans foi resistente a anfotericina B ou ao voriconazol. Todos os isolados de Candida albicans foram sensíveis às três drogas analisadas. Em conclusão: a) Houve uma marcante tendência para o isolamento de C. não-albicans no HUCAM, com predomínio de C. tropicalis. b) Observou-se, reduzida suscetibilidade ao fluconazol e ao itraconazol apenas para as espécies C. tropicalis, C. krusei e C. glabrata. c) O método Etest®, usando o meio de ágar Casitone, apresentou ótima concordância com o método de referência para as drogas anfotericina B (100%) e fluconazol (96%), no entanto, para o itraconazol, essa concordância foi de 62%. / This study was carried out to evaluate the prevalence and distribution of the species of Candida spp. Isolated from several biological materials obtained from patients interned at the Hospital Universitário Cassiano Antonio de Moraes (HUCAM), Vitória-ES, during the period of January 2003 to December 2005, and to describe the profile of susceptibility of Candida non-albicans to antifungal drugs. The identification of the species of Candida albicans was made into the chromogenic medium CHROMagar-Candida® and confirmed through the positive induction of a germinative tube and/or clamidoconídeo. The identification of the species nonalbicans was made through of morphologic and biochemical patterns and through the commercial system API 20 C AUX. The profile of susceptibility to the antifungal drugs amphotencin B itraconazole and fluconazole was established by the reference method, broth microdilution, according to the document M27-A2 from CLSI, 2002. A comparative study was conducted, using the method Etest® for the strains of Candida tropicalis being included at this stage, the drug voriconazole. The results showed that 268 isolates of Candida spp. were obtained during the period of the study and, in general, a predominance was observed in the isolation of Candida nonalbicans (54%) at HUCAM, including C. tropicalis (26%), C. parapsilosis (14%), C. glabrata (10%), C. krusei (2%), C. guilliermondii (1.5%) and C. lusitaniae (0.5%). There was a relevant transition in the prevalence of Candida non-albicans during the three years of study, oscillating in the frequency from 39% of the isolations in 2003 to 74% in 2005. The non-albicans species were more isolated from urine (47%), followed by blood (39%) and catheter (8%). The biggest occurrences were noticed in patients interned at the General Intensive Care Unit and Medical Clinic with a rate of 23% in each one. The resistance rate noticed for the non-albicans species to fluconazol was of 4% and, of susceptible dose-dependent (SDD) to fluconazole and to itraconazole was of 2% and 3% respectively (methodology CSLI). With the use of this methodology, it was observed that 98% of the strains of C.tropicalis were sensitive to fluconazole and to itraconazole, but 2% were SDD to these drugs. When the method Etest® was used, 2% of these samples were resistant to both drugs and 19% were SDD to itraconazole. No isolated of Candida non-albicans was resistant to amphotericin B or to voriconazole. All the isolates of Candida albicans were sensitive to the three drugs analyzed. With this study it was concluded that there was a striking tendency to the isolation of C. non-albicans, with the predominance of C. tropicalis. Reduced susceptibility to fluconazole and itraconazole was also noticed only in the species C. tropicalis, C. krusei and C. glabrata, reinforcing the concern about a high number of isolations of these species non-albicans at HUCAM. The Etest® method using the medium of agar Casitone, showed an excellent concordance with the reference method to the drugs amphotericin B (100%) and fluconazole (96%). However, for the itraconazole this agreement was of 62%.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Bruna Malacarne.pdf: 2452979 bytes, checksum: bd4d5918bd0a11fc40527e153ad97a3d (MD5) Previous issue date: 2010-12-10 / A frequência de candidemia tem aumentado nas últimas décadas, com crescente ocorrência de espécies não-albicans. Candida tropicalis representa, em geral, a espécie não-albicans mais freqüente no Brasil e pode apresentar crescimento tipo trailing nos testes de microdiluição em caldo, frente a drogas azólicas, o que dificulta e confunde a leitura dos valores de concentração inibitória mínima (CIM). Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a ocorrência de candidemia causada por C. tropicalis no Hospital Universitário Cassiano Antônio de Moraes (HUCAM), Vitória Espírito Santo, e seu perfil de suscetibilidade a fluconazol, itraconazol e anfotericina B, conforme metodologia de referência M27-A3 (CLSI, 2008), propor modificações deste teste, além de avaliar a influência de diferentes períodos de incubação e formas de leitura. Isolados de Candida tropicalis (82) testados pelo método referência foram selecionados e submetidos aos testes modificados, como incubação na temperatura de 42°C, adição de Tricostatina A (TSA) e do composto colorimétrico resazurina. Os resultados obtidos nos testes modificados foram avaliados através da determinação das concordâncias categóricas e essenciais com o teste padrão. Os resultados mostraram que no período de 2006 a 2009, a frequência de candidemia no HUCAM variou de 1,21 a 1,65 casos/1.000 admissões hospitalares e de 0,16 a 0,25 casos/1.000 pacientes-dia. C. albicans representou 45% dos episódios, seguida por C. tropicalis (26%), C. parapsilosis (14%), C. glabrata (10%) e outras (C. krusei, C. guilliermondii e C. lusitaniae). Os maiores percentuais de resistência de C. tropicalis a fluconazol e a itraconazol ocorreram com 48 horas de incubação (26% versus 5% e 17% versus 1,2%, respectivamente). Foi observado que 28,05% dos isolados apresentaram crescimento tipo trailing para uma ou para as duas drogas testadas. As concordâncias categóricas e essenciais dos testes modificados, em relação à metodologia padrão, variaram de 70 a 87%, com 24 horas de incubação e para ambas a drogas. Com 48 horas de incubação, as modificações introduzidas (incubação a 42ºC e adição de TSA) propiciaram menores percentagens de concordâncias categóricas e essenciais que o método com adição de resazurina. A incubação a 42°C correlacionou com as melhores concordâncias entre as formas de leitura visual e espectrofotométrica, em comparação com o 9 método padrão. Diferentes perfis de crescimento tipo trailing foram observados, sendo que as três modificações realizadas foram eficazes em reduzir este fenômeno com 24 horas de incubação, mas apenas os métodos a 42ºC e com TSA foram capazes de reduzir o trailing com 48 horas de incubação. A análise de prontuários médicos permitiu verificar que isolado com crescimento tipo trailing apresentou resposta terapêutica satisfatória ao fluconazol e que isolado que permaneceu resistente nos testes modificados não respondeu a tratamento com fluconazol, in vivo / The frequency of candidemia has increased in recent decades, with raising occurrence of non-albicans species. In general, Candida tropicalis is the most frequent non-albicans species in Brazil and may present trailing growth in broth microdilution tests with azole drugs, which complicates and confuses the reading of MIC values. The objectives of this study were evaluate the occurrence of candidemia caused by C. tropicalis in HUCAM and your susceptibility profile with fluconazole, itraconazole and amphotericin B, according to reference methodology M27-A3 (CLSI, 2008) propose modifications in this test, and evaluate the influence of different incubation periods and ways of reading. Isolates of Candida tropicalis were selected and submitted to the modified tests: incubation temperature of 42°C, addition of TSA and colorimetric compound resazurin. The results obtained with modified tests were evaluated through essential and categorical agreements considering the reference methodology. The results showed that in the period of 2006 to 2009, the frequency of candidemia in HUCAM ranged from 1.21 to 1.65 cases / 1,000 admissions and 0.16 to 0.25 cases / 1,000 patient-days. C. albicans accounted for 45% of the episodes, followed by C. tropicalis (26%), C. parapsilosis (14%), C. glabrata (10%) and other ones (C. krusei, C. guilliermondii and C. lusitaniae). The highest percentages of resistance to fluconazole and itraconazole occurred with 48 hours of incubation (26% versus 5% and 17% versus 1.2%, respectively). 28.05% of the isolates showed trailing growth for one or both drugs. The categorical and essential agreements of the modified tests when compared with the standard methodology, ranged from 70 to 87%, with 24 hours of incubation and for both drugs. With 48 hours of incubation, the modifications (incubation at 42°C and addition of TSA) provided smaller percentages of categorical and essential agreements when compared with the addition of resazurin. The best agreement between ways of reading (visual and spectrophotometric) was obtained with the incubation at 42°C, compared with the standard method. Different trailing growth profiles were observed and the three modified methods were effective in reducing this phenomenon with 24 hours of incubation, but only the methods 42°C and TSA were able to reduce it at 48 hour. The analysis of medical records indicated that isolated with trailing growth showed 11 satisfactory therapeutic response to fluconazole and the isolated that remained resistant in the modified tests did not respond to treatment with fluconazole in vivo

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_juliana_nunes_vieira.pdf: 749761 bytes, checksum: d10f921e3d83dd0cb845cc767149a9f3 (MD5) Previous issue date: 2012-03-14 / The rapid development of resistance to gastrointestinal parasites anthelmintics has shown the limited efficiency of this method in the suppression of endoparasitoses in ruminants, and has furthered research in alternative control methods. The use of chemicals in animal anthelmintic treatment, in association with nematophagous fungi used for biological control, is a strategy that has proven to be effective in reducing the nematode population density of farm animals. This study aims to verify the in vitro susceptibility of the nematophagous fungi Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans, Paecilomyces fumosoroseus, Paecilomyces lilacinus, Paecilomyces marquandii and Paecilomyces variotii against the antiparasitic drugs albendazole, thiabendazole, ivermectin (100%), levamisole (7.5%) and closantel (10%) by using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). MICs ranged between 4 and 0,031µg/mL for albendazole, thiabendazole and ivermectin, between 0,937 and 0,117µg/mL for levamisole, and between 0,625 and 0,034 for closantel. The results obtained showed that all antiparasitic drugs tested had an in vitro inhibitory effect on nematophagous fungi, being able to jeopardize the fungus action as a biological control bioagent. / O rápido desenvolvimento de resistência de parasitos do trato gastrintestinal a antihelmínticos tem demonstrado limitada eficiência desse método para o controle de determinadas endoparasitoses em ruminantes, incentivado assim, pesquisas com métodos alternativos de controle parasitário. A utilização de compostos químicos no tratamento anti-helmíntico de animais, em associação com fungos nematófagos usados no controle biológico, é uma estratégia que vem se mostrando eficaz para a redução da densidade populacional de nematódeos nos animais de produção e pouco se sabe sobre seu emprego simultâneo. Este trabalho teve por objetivo verificar, através da Concentração Inibitória Mínima (CIM), a suscetibilidade in vitro dos fungos nematófagos Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans, Paecilomyces fumosoroseus, Paecilomyces lilacinus, Paecilomyces marquandii e Paecilomyces variotii aos antiparasitários albendazol, tiabendazol e ivermectina (100%), levamisol (7,5%) e closantel (10%). As CIMs variaram de 4 a 0,031µg/mL para albendazol, tiabendazol e ivermectina, de 0,937 a 0,117µg/mL para o levamisol e de 0,625 a 0,039µg/mL para o closantel, dependendo do fungo testado. Os resultados mostram que todos os antiparasitários testados tiveram efeito inibitório in vitro sobre os fungos nematófagos, podendo comprometer suas ações como bioagentes de controle biológico.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao-simonebrmaifrede.pdf: 1273260 bytes, checksum: d5439bcf28dc75da348359e5efa529ef (MD5) Previous issue date: 2009-03-06 / INTRODUÇÃO: Onicomicose é a infecção da unha causada por amplo espectro de espécies fúngicas, incluindo leveduras e fungos filamentosos dermatófitos e nãodermatófitos. Devido à variável suscetibilidade dos diversos agentes etiológicos às drogas antifúngicas, o diagnóstico laboratorial vem sendo considerado uma ferramenta importante para se estabelecer a etiologia e auxiliar na escolha do tratamento da onicomicose. Com base na elevada porcentagem de falha terapêutica no tratamento da onicomicose, tem-se evidenciado o interesse na padronização de testes de suscetibilidade in vitro de fungos filamentosos. OBJETIVOS: Estabelecer a freqüência das onicomicoses em relação a outras dermatomicoses; definir a etiologia das onicomicoses através do isolamento e identificação dos fungos; comparar o padrão de suscetibilidade entre fungos dermatófitos e não-dermatófitos às drogas fluconazol, cetoconazol, itraconazol, miconazol, ciclopirox, terbinafina e griseofulvina. MÉTODOS: As amostras clínicas foram colhidas através de raspagem e/ou fragmentação da unha e o exame microscópico direto foi realizado através do tratamento destas amostras com hidróxido de potássio (KOH) a 20% e tinta Parker. As culturas foram realizadas nos meios de ágar Sabouraud dextrose adicionado de 0,05 mg.mL-1 de cloranfenicol e ágar Mycose, incubados à temperatura ambiente e por um período de até 15 dias. A identificação dos fungos filamentosos foi baseada na observação de suas características macroscópicas e microscópicas e os testes de suscetibilidade in vitro a drogas antifúngicas foram baseados no Documento M38-A do CLSI. RESULTADOS: O diagnóstico laboratorial das dermatomicoses foi estabelecido em 69% dos 1.008 pacientes com lesões sugestivas de dermatomicoses encaminhados ao Laboratório de Diagnóstico Micológico do Depto. de Patologia / UFES, no período de 12/03/2004 a 14/08/2008. Onicomicose foi diagnosticada em 333 pacientes e os grupos de fungos mais isolados foram: leveduras 55,6%, fungos filamentosos não-dermatófitos 27,2% e dermatófitos 17,3%. Fungos dermatófitos foram mais inibidos in vitro que fungos não-dermatófitos. As drogas fluconazol e griseofulvina inibiram apenas fungos dermatófitos, enquanto a terbinafina foi a droga que mais inibiu os dois grupos de fungos e em baixas concentrações. A quantificação do inóculo por contagem em hemocitômetro e em placas de ágar Sabouraud revelou que o acerto do inóculo em espectrofotômetro pode ter uma boa correspondência se estabelecido em faixas de transmitância diferenciadas para os diversos tipos de fungos. CONCLUSÃO: É necessário estabelecer o diagnóstico laboratorial das onicomicoses, já que estas podem ser causadas por diversos agentes etiológicos e com diferentes suscetibilidades in vitro a várias drogas antifúngicas. / INTRODUCTION: Onychomycosis is the nail infection caused by a wide spectrum of fungi species, including yeasts, dermatophyte and nondermatophyte mould. Due to the variable susceptibility of the several etiologic agents to the antifungal drugs, the laboratorial diagnosis is being considered an important tool to establish the etiology and to help in the choice of the treatment of onychomycosis. Based on the high percentage of therapeutic flaw in the treatment of onychomycosis, there has been some evident interest in the standardization of the susceptibility tests in vitro of filamentous fungi. OBJECTIVES: To establish the frequency of the onychomycosis in relation to other dermatomycosis; to define the etiology of the onychomycosis by the isolation and identification of the fungi; to compare the pattern of susceptibility among dermatophytes and nondermatophytes mould to drugs such as fluconazole, cetoconazole, itraconazole, miconazole, ciclopirox, terbinafine and griseofulvine. METHODS: The clinical samples were collected by the scratching and/or fragmentation of the nail and the direct microscopic examination was made by the treatment of these samples with potassium hydroxide (KOH) at 20% and Parker ink. The cultures were made in dextrose agar Sabouraud with 0,05 mg.mL-1 of cloranphenicol and agar Mycosel, incubated to room temperature and for a period of up to 15 days. The identification of the filamentous fungi was based on the observation of its macroscopic and microscopic characteristics and the tests of susceptibility in vitro to the antifungal drugs were based on CLSI M38-A reference method. RESULTS: The laboratorial diagnosis of the dermatomycosis was established in 69% of the 1.008 patients with lesions that suggested dermatomycosis sent to the Laboratory of Mycologic Diagnosis from the Dept. of Pathology / UFES, in the period of 03/12/2004 to 08/14/2008. Onychomycosis was diagnosed in 333 patients and the groups of more isolated fungi were: yeasts 55,6%, nondermatophyte mould 27,2% and dermatophytes 17,3%. Dermatophytes were more inhibited in vitro than nondermatophytes ones. Drugs such as fluconazole and griseofulvine inhibited just dermatophytes fungi while terbinafine was the drug which most inhibited both groups of fungi and in low concentrations. The quantification of the inoculum for counting in haemocytometer and in plates of agar Sabouraud revealed that the correctness of the inoculum in espectrofotometer may have established a good correspondence in transmission bands differentiated for the various types of fungi. CONCLUSION: It is necessary to establish the laboratorial diagnosis of the onychomycosis, as these may be caused by several etiologic agents and with different susceptibilities in vitro to several antifungal drugs.