Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Os micro-organismos quando se apresentam em biofilme expressam propriedades distintas de quando estÃo na forma planctÃnica. Uma dessas propriedades à uma maior tolerÃncia aos agentes antimicrobianos. O objetivo deste estudo foi avaliar a formaÃÃo biofilmes de dermatÃfitos in vitro e ex vivo, em lamÃnulas de poliestireno e fragmentos de unha, respectivamente, bem como a sua sensibilidade a trÃs agentes antifÃngicos (itraconazol, voriconazol e griseofulvina) na forma plantÃnica e em biofilmes. Para tal, num primeiro momento, foram utilizadas 26 cepas isoladas de espÃcimes clÃnicos de origem humana e animal: Trichophyton rubrum (4) Trichophyton tonsurans (6), Trichophyton mentagrophytes (3), Microsporum gypseum (3) e Microsporum canis (10). Os biofilmes foram, inicialmente, formados em placas de microdiluiÃÃo, e as cepas foram classificadas, pela quantidade de biomassa, como nÃo formadoras (2/26), fracas (7/26), moderada (1/26) e fortes formadoras de biofilme (16/26). Em seguida, cepas fortes formadoras de biofilmes foram escolhidas, sendo uma de cada espÃcie, para formaÃÃo de biofilmes em lamÃnulas e fragmentos de unha, para anÃlises pela microscopia Ãptica, confocal e eletrÃnica de varredura, posteriormente. As anÃlises demonstraram que todas as espÃcies formaram biofilmes in vitro e ex vivo, com densidade e arquitetura distintas. M. gypseum e M. canis produziram biofilmes com maior e menor quantidade de biomassa, respectivamente. Em um segundo momento, conforme as preconizaÃÃes do documento M38-A2 do CLSI, foram determinadas as concentraÃÃes inibitÃria mÃnima (CIMs) das trÃs drogas contra as 26 cepas de dermatÃfitos, na forma plantÃnica. Os valores CIMs variaram entre 0,00195-0,25 Âg/ml para itraconazol; 0,00195-0,125 para voriconazol e <0,0039-4 Âg/ml para griseofulvina. Posteriormente foram formados biofilmes, em placas de microdiluiÃÃo, que foram tratados com as mesmas drogas, nos valores de CIM, 10 x CIM e 50 x CIM. A viabilidade celular dos biofilmes foi quantificada utilizando o ensaio colorimÃtrico XTT. Para reduzir de forma significativa a atividade metabÃlica dos biofilmes (P<0,05) foi necessÃrio usar 50 x CIM, para as trÃs drogas. Este estudo pode contribuir para melhorar a compreensÃo da fisiopatologia do microrganismo e tolerÃncia ou resistÃncia ao tratamento. / The microorganisms when presented in biofilm express properties different from when they are in the planktonic form. One of these properties is a higher resistance to antimicrobial agents. The aim of this study was to evaluate the formation of dermatophytesâ biofilms in in vitro and ex vivo assay performed in polystyrene coverslip and nail fragments, respectively, and their susceptibility to three antifungal agents (itraconazole, voriconazole and griseofulvin) in planktonics and biofilm forms. To this end, at first, they were used 26 strains isolated from clinical specimens of human and animal: Trichophyton rubrum (4) Trichophyton tonsurans (6), Trichophyton mentagrophytes (3), Microsporum gypseum (3) e Microsporum canis (10). The biofilms were initially formed in microdilution plates, and the strains were classified by the amount of biomass as non producers (2/26), weak (7/26), moderate (1/26) and strong biofilm producers (16/26). Then, strains, strong producers of biofilms, were chosen, one of each species, to biofilm formation in coverslip Thermanox and nail fragments for later analysis by optical, confocal and scanning electron microscopy. The analyzes demonstrated that all species formed biofilms in vitro and ex vivo, with different density and architecture. M. gypseum and M. canis produced biofilms with higher and lower amounts of biomass, respectively. At a second step, according to the recommendations of the CLSI M38-A2 protocol, the minimum inhibitory concentration (MIC) values for the three antifungal agents against these 26 strains were determined, in the planktonic form. MICs values ranged from 0.00195-0.25 &#956;g/ml for itraconazol, 0.00195-0.125 for voriconazole and <0.0039-4 &#956;g / ml for griseofulvin. Subsequently, biofilms were formed, in microdilution plates and treated with the same drugs, in MIC, 10 x MIC and 50 x MIC values. The cell viability of the biofilms was quantified using the XTT colorimetric assay. In order to significantly reduce the metabolic activity of biofilms (P <0.05), 50 x MIC was required, for the three drugs. This study may contribute to improve the understanding of the pathophysiology of the microorganism and tolerance or resistance to treatment.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O adenovÃrus humano (ADVh) à um agente viral comumente relacionado a infecÃÃes do trato respiratÃrio, tanto superior quanto inferior, principalmente em crianÃas com idade inferior a cinco anos. Os ADVh sÃo classificados em sete espÃcie (A-G) e divididos em 54 tipos. A proteÃna hexon à a principal responsÃvel pela variaÃÃo antigÃnica inter e intragrupos desse vÃrus. O objetivo desse estudo foi caracterizar os perÃodos de circulaÃÃo e a diversidade de espÃcie e tipos de ADVh encontrados em Fortaleza, Cearà â Brasil, durante 150 meses consecutivos (janeiro de 2001 a junho de 2013). A imunofluorescÃncia indireta (IFI) foi utilizada para a detecÃÃo dos ADVh, vÃrus sincicial respiratÃrio, influenza A e B, parainfluenza 1, 2 e 3, jà a imunofluorescÃncia direta (IFD) foi utilizado na detecÃÃo do metapneumovÃrus humano (MPVh) . A PCR e Nested-PCR seguida do sequenciamento das seis primeiras regiÃes hipervariÃvel do gene Hexon foram utilizadas para caracterizar as espÃcies e tipos dos ADVh. Os ADVh foram detectados 290 (3,41%) das 8.517 amostras, sendo 60 (20,69%) destas encontradas em coinfecÃÃo com um, dois ou trÃs vÃrus. Um total de 190 (65,52%) ADVh foram molecularmente caracterizados, sendo 162 pertencente à espÃcie ADVh-B (85,72%), 21 à ADVh-C (11,11%) e 6 à ADVh-E (3,17%), ficando um cepa sem identificaÃÃo. As espÃcies circularam durante todo o perÃodo analisados sendo observado o predomÃnio da espÃcie B em quase todos os anos. Sete diferentes tipos foram identificados circulando em Fortaleza durante o perÃodo analisado. Os tipos predominantes foram o 3 (67,73%) e o 7 (17,80%). O ADVh-3 foi encontrado em todos os anos, jà o ADVh-7 nÃo foi observado nos anos de 2006, 2010 e 2011. Somente em 2011 todos os tipos identificados da espÃcie C circularam, e o Ãnico representante da espÃcie E, o ADVh-4, comeÃou a ser identificado na nossa populaÃÃo apenas a partir de 2007. O melhor conhecimento da circulaÃÃo de ADVh poderà ser alcanÃado se a vigilÃncia for contÃnua e associada ao uso de mÃtodos de maior sensibilidade na detecÃÃo desses vÃrus.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O Streptococcus (S.) pneumoniae à considerado como o principal agente causador de morbidade e mortalidade em crianÃas menores de cinco anos de idade. As doenÃas pneumocÃcicas comeÃam com o estabelecimento da colonizaÃÃo do S. pneumoniae na nasofaringe. O principal fator de risco para colonizaÃÃo à o confinamento, como em crianÃas que frequentam creches. Nas Ãltimas dÃcadas, o aumento do nÃmero de cepas de S. pneumoniae resistentes à antibiÃticos &#946;-lactÃmicos e a outras classes de antimicrobianos tem dificultado o tratamento da infecÃÃo pneumocÃcica. Atualmente cerca de 13 sorotipos de S. pneumoniae respondem por mais de 85% dos isolados invasivos. A vacina pneumocÃcica polissacarÃdica conjugada 10-valente (VPC-10) foi recentemente incluÃda no calendÃrio de vacinaÃÃo nacional. Os objetivos desse estudo foram determinar a prevalÃncia, a resistÃncia antimicrobiana, os genÃtipos de S. pneumoniae que colonizam a nasofaringe de crianÃas usuÃrias de creches em Fortaleza, Brasil, bem como para avaliar a cobertura potencial da VPC-10. Entre janeiro e dezembro de 2011, os isolados de crianÃas portadores foram recuperados a partir de swabs de nasofaringe. Foram determinadas as sensibilidades para penicilina, ceftriaxona, sulfametoxazol/trimetoprim, amoxilina, clindamicina e eritromicina, das cepas isoladas utilizando-se o mÃtodo de e-test.. A detecÃÃo dos genes de resistÃncia à penicilina foi realizada por PCR. A genotipagem capsular dos isolados de portadores foi realizada pela tÃcnica de multiplex PCR. Foram isolados S. pneumoniae em 165 (56,7%) das 291 crianÃas saudÃveis usuÃrias de creches. Dos 162 isolados de portadores, submetidos à determinaÃÃo da concentraÃÃo inibitÃria mÃnima, foi encontrada uma taxa resistÃncia de 27,8% para penicilina, 75,3% para sulfametoxazol/trimetoprim, 13,6% para eritromicina e 10,5% para clindamicina. NÃo foi detectada resistÃncia à ceftriaxona e à amoxicilina. A porcentagem de isolados de S. pneumoniae com mutaÃÃo em pelo menos um dos genes que determinam resistÃncia à penicilina foi de 68,2%. Os genÃtipos capsulares de 115 isolados foram identificados em 129 viÃveis. Os genÃtipos mais comuns foram 6A/6B, 14, 15B/15C, 19F e 23F, com os sorotipos 6A/6B, 14, 19F e 23F mais associados com a resistÃncia. A cobertura estimada para VPC-10 foi de 74.4%. O presente estudo verificou que a taxa de portadores de S. pneumoniae à alta, assim como a resistÃncia aos antimicrobianos penicilina e sulfametoxazol/trimetoprima, e que a cobertura potencial da VPC-10 à elevada frente aos genÃtipos de S. pneumoniae identificados, isolados de crianÃas usuÃrias de creches em Fortaleza.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / EspÃcies do gÃnero Aeromonas, encontradas com frequÃncia em ambientes aquÃticos, sÃo importantes patÃgenos humanos. Este estudo teve como objetivo geral isolar cepas clÃnicas e ambientais de Aeromonas spp., assim como, investigar a presenÃa de genes de virulÃncia e avaliar a sensibilidade a antimicrobianos in vitro, bem como, o mecanismo de resistÃncia. As amostras clÃnicas e ambientais foram identificadas por meio de testes bioquÃmicos e metodologia automatizada Vitek2Â (bioMeriÃux). A detecÃÃo de genes de virulÃncia para enterotoxina citotÃxica (act), hemolisina (asa1) e sistema de secreÃÃo III (ascV) foi feita por PCR simples. A sensibilidade aos antimicrobianos seguiu recomendaÃÃes dos documentos M7-A9 e M45-A2 do CLSI. A caracterizaÃÃo do mecanismo de resistÃncia foi realizada mediante testes fenotÃpicos para detecÃÃo de Ã-lactamases. Dos isolados clÃnicos foram identificados dezenove A. hydrophila, trÃs A. veronii bv. sobria e uma A. caviae. As 35 cepas ambientais foram identificadas como A. hydrophila (n=11), A. veronii bv. sobria (n=22), A. veronii bv. veronii (n=1) e A. caviae (n=1). Em relaÃÃo aos genes de virulÃncia das cepas clÃnicas, foram detectados os genes act, asa1 e ascV nas proporÃÃes 69,5; 8,6 e 34,7%, respectivamente. Enquanto nas cepas ambientais foram encontrados os percentuais de 51,4; 45,7 e 54,2%, respectivamente. Observou-se resistÃncia a piperacilina-tazobactam e a amoxicilina-clavulanato, em 3 e 15 cepas clÃnicas, respectivamente. Ademais, houve resistÃncia a ceftazidima, meropenem, imipenem, ciprofloxacina e trimetoprim-sulfametoxazol, com uma cepa resistente a cada antimicrobiano. Quanto Ãs cepas ambientais, detectou-se resistÃncia somente a piperacilina-tazobactam e amoxicilina-clavulanato em 1 e 17 cepas, respectivamente. Em relaÃÃo a detecÃÃo de Ã-lactamases, foi detectada AmpC em doze cepas clÃnicas e sete ambientais. Em suma, apesar de ter sido obtido um maior percentual de resistÃncia em cepas de origem humana, as cepas ambientais tambÃm apresentaram este fenÃmeno e em ambas foram detectados genes de virulÃncia. Portanto, Ã importante realizar o monitoramento do potencial patogÃnico e sensibilidade de isolados ambientais. / Aeromonas spp., frequently found in aquatic environments, are important human pathogens. This study had the main objectives of isolating clinical and environmental strains of Aeromonas spp. and investigating the presence of virulence genes, antimicrobial susceptibility in vitro and resistance mechanism. Clinical and environmental samples were identified by biochemical tests and the automated Vitek2Â (bioMeriÃux) method. The virulence genes cytotoxic enterotoxin (act), haemolysin (asa1) and type III secretion system (ascV) were detected by simple PCR. The antimicrobial susceptibility was determined according to the recommendations of M7-A9 and M45-A2 do CLSI. The characterization of resistance mechanism was performed by detection of Ã-lactamases phenotypic tests. From the clinical isolates, 19 A. hydrophila, 3 A. veronii bv. sobria and 1 A. caviae were identified The 35 environmental strains were identified as A. hydrophila (n= 11), A. veronii bv. sobria (n= 22), A. veronii bv. veronii (n= 1) and A. caviae (n= 1). Regarding the virulence genes of clinical strains, the act, asa1 and ascV genes were detected in the proportions 69.5, 8.6 and 34.7%, respectively. The respective percentages for the environmental strains were 51.4, 45.7% and 54.2%. Resistance was observed to piperacillin-tazobactam and amoxicillin-clavulanate in 3 and 15 clinical strains, respectively. Moreover, there was resistance to ceftazidime, meropenem, imipenem, ciprofloxacin and trimethoprim-sulfamethoxazole, with one strain resistant to each antimicrobial agent. As for the environmental strains, resistance was detected only to piperacillin-tazobactam and amoxicillin-clavulanate and, in 1 and 17 strains, respectively. Regarding the detection of Ãâlactamases, AmpC was detected in clinical (n= 12) and environmental strains (n= 7). In short, despite having observing higher percentage of resistance in strains of human origin, environmental strains also showed this phenomenon and virulence genes were detected in both strains. Thus, it is important to monitor the antimicrobial susceptibility and pathogenic potential of the environmental isolates.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A intrÃnseca resistÃncia apresentada pela bactÃria Burkholderia pseudomallei à um grave empecilho para o tratamento da melioidose. Muitas pesquisas focam na busca de adjuvantes que aumentem a sensibilidade desta bactÃria aos antimicrobianos. Nesse contexto, a aÃÃo inibitÃria do farnesol frente Ãs cepas de B. pseudomallei, na forma planctÃnica, jà foi relatada em estudo prÃvio. Diante disso, esse estudo objetivou analisar a atividade in vitro do farnesol contra cepas de B. pseudomallei na forma de biofilme. Aliado à anÃlise da aÃÃo do farnesol isoladamente, foi investigada a combinaÃÃo desse composto com os antimicrobianos amoxicilina, ceftazidima, doxiciclina, imipenem e sulfametoxazol/trimetoprim frente ao biofilme. A sensibilidade foi avaliada por meio do teste de microdiluiÃÃo em caldo e a leitura da viabilidade celular feita com a resazurina. A concentraÃÃo inibitÃria mÃnima em biofilme (CEMB) para o farnesol foi de 75 a 2400 mM. Ademais, o farnesol reduziu em atà 256, 16, 4 e 4 vezes os valores de CEMB para ceftazidima, amoxicilina, doxiciclina e sulfametoxazol/trimetoprim, respectivamente (P<0.05). Por meio de tÃcnicas de microscopia, tais como Ãptica, confocal e eletrÃnica, observou-se que o farnesol foi capaz de causar danos na matriz do biofilme, facilitando assim, a penetraÃÃo dos antibiÃticos. Deste modo, o presente estudo mostrou a eficÃcia do farnesol contra biofilmes de B. pseudomallei e seu efeito potenciador, em especial com ceftazidima, amoxicilina, doxiciclina e sulfametoxazol/trimetoprim / The intrinsic antimicrobial resistance of Burkholderia pseudomallei is a serious challenge to the treatment of melioidosis. Many studies have searched for adjuvants that increase susceptibility bacteria to antimicrobials. In this context, the antimicrobial activity of farnesol against B. pseudomallei in planktonic growth has been reported. Thus, the aim of this study was to analyze the in vitro activity of farnesol alone against Burkholderia pseudomallei biofilms, as well as its combination with the antibacterials amoxicillin, doxycycline, ceftazidime and sulfamethoxazole-trimethoprim. Susceptibility was assessed by the broth microdilution test and cell viability was read with the oxidation-reduction indicator dye resazurin. The interaction between farnesol and antibacterial drugs against B. pseudomallei biofilms was evaluated through the calculation of the fractional inhibitory concentration index. The minimum biofilm erradication concentration (MBEC) for farnesol was 75 to 2400 mM. In addition, farnesol significantly reduced the MBEC values for ceftazidime,amoxicillin, doxycycline and sulfamethoxazole-trimethoprim by 256, 16, 4 and 4 times respectively (P<0.05). Optical, confocal and electronic microscopic analyses of farnesol treated B. pseudomallei biofilms demonstrated that this compound damages biofilm matrix,facilitating antimicrobial penetration in the biofilm structure. This study demonstrated the effectiveness of farnesol against B. pseudomallei biofilms and its potentiating effect on the activity of antibacterial drugs, in particular ceftazidime, amoxicillin, doxycycline and sulfamethoxazole-trimethoprim

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / A infecÃÃo respiratÃria aguda (IRA) à uma sÃndrome clÃnica, em que cerca de 80% das mortes sÃo atribuÃdas à pneumonia, uma doenÃa grave que atinge o trato respiratÃrio inferior. O agente etiolÃgico comumente isolado na pneumonia adquirida na comunidade (PAC) à o Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae). As doenÃas pneumocÃcicas comeÃam com a colonizaÃÃo do S. pneumoniae na nasofaringe, podendo progredir para doenÃa invasiva. Nas Ãltimas dÃcadas, o aumento do nÃmero de cepas de S. pneumoniae resistentes a antibiÃticos &#946;-lactÃmicos e a macrolÃdeos tem dificultado o tratamento das infecÃÃes pneumocÃcicas. Os objetivos desse estudo foram determinar à prevalÃncia de portadores de S. pneumoniae em crianÃas com PAC, o perfil de sensibilidade a antimicrobianos e distribuiÃÃo dos sorotipos, em Fortaleza, Brasil. As cepas de S. pneumoniae foram isoladas de aspirados de nasofaringe de crianÃas com PAC atendidas no Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS). Para a determinaÃÃo das ConcentraÃÃes InibitÃrias MÃnimas (CIM) foi utilizado o mÃtodo de E-test para os seguintes antimicrobianos: penicilina, ceftriaxona, sulfametoxazol/trimetoprim, amoxicilina, clindamicina e eritromicina. A genotipagem das cepas de S. pneumoniae foi realizada pela tÃcnica de multiplex PCR. De 527 amostras de crianÃas com PAC, foram isolados S. pneumoniae em 30,17%. De 126 isolados de portadores foi encontrada uma taxa resistÃncia de 25,8% para penicilina, de 81,2% para sulfametoxazol/trimetoprim, de 21,4% para eritromicina, de 19% para clindamicina e de 0,8% para ceftriaxona e amoxicilina. Das 102 cepas genotipadas, os sorotipos mais comumente encontrados foram 6A/6B, seguido do 14, 19A e 19F. Foram selecionadas 29 cepas resistentes à penicilina para detecÃÃo das alteraÃÃes proteÃnas de ligaÃÃo a penicilina (PBP). Foi encontrada alteraÃÃo na PBP 1a em 69%, jà para as PBP 2b e PBP 2x todas as cepas testadas apresentaram alteraÃÃo. Jà para clindamicina e eritromicina, foram selecionados 24 cepas para detecÃÃo do gene ermB. Das 24 cepas testadas, 79,2% possuÃam o gene ermB. O presente trabalho gerou dados sobre a prevalÃncia de crianÃas portadoras com PAC de S. pneumoniae, revelou dados fenotÃpicos e genotÃpicos acerca da resistÃncia dos isolados frente aos antimicrobianos utilizados na clÃnica e a distribuiÃÃo dos sorotipos do pneumococo de crianÃas com PAC atendidas no HIAS.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A melioidose à uma doenÃa infeciosa emergente, notadamente no nordeste do Brasil, com sÃrias implicaÃÃes internacionais, assim como um problema de saÃde pÃblica. Causada pelo bacilo Burkholderia pseudomallei, esta infecÃÃo se apresenta desde quadros assintomÃticos a quadros graves e frequentemente fatais. As altas taxas de mortalidade da doenÃa (20 a 50%) a tornam uma prioridade para orgÃos globais de saÃde. No Brasil, casos de melioidose foram relatados pela primeira vez em 2003, no municÃpio de TejuÃuoca no CearÃ. Desde entÃo, novos casos de melioidose foram diagnosticados em outros seis municÃpios cearenses. B. pseudomallei à intrinsecamente resistente a muitos antibiÃticos e estudos recentes jà descrevem casos resistÃncia aos antimicrobianos utilizados no tratamento da melioidose. A investigaÃÃo da capacidade de formaÃÃo de biofilme por B. pseudomallei parece ser fundamental, jà que o biofilme permite o desenvolvimento de microcolÃnias dentro de um ambiente protegido, o qual se relaciona com a proteÃÃo ambiental, adesÃo, colonizaÃÃo, evasÃo do sistema imune e ligaÃÃo a cÃlulas ambientais. Portanto, o desenvolvimento de alternativas terapÃuticas antibiofilme, incluindo novas drogas, à necessÃrio. Com efeito, este estudo teve como objetivo caracterizar as cepas de B. pseudomallei da coleÃÃo do LAPERE quanto à capacidade de produÃÃo de biofilme e sensibilidade em crescimento planctÃnico e em biofilme. As drogas selecionadas foram: ceftazidima (CAZ), doxiciclina (DOX), imipenem (IPM), amoxicilina/clavulanato (AMC) e sulfametoxazol/trimetoprim (SXT); e farnesol (FNS). Todas as cepas foram classificadas como produtoras de biofilme, sendo divididas em: forte (5 cepas), moderada (3 cepas), e fraca (1 cepa). Valores mÃdios de concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (MIC), concentraÃÃo inibitÃria mÃnima em biofilme (MBIC) e concentraÃÃo de erradicaÃÃo mÃnima em biofilme (MBEC) para estas cepas foram determinados para AMC (MIC 10,2/5,1 mg/L, MBIC 21,3/10,6 mg/L e MBEC 27,6/13,8 mg/L), para CAZ (MIC 5,6 mg/L, MBIC 120,4 mg/L e MBEC 419,6 mg/L), para DOX (MIC 0,28 mg/L, MBIC 1,3 mg/L e MBEC 3,8 mg/L), para IPM (MIC 0,597 mg/L, MBIC &#8805; 256 mg/L e MBEC > 256 mg/L), para SXT (MIC 1,25/23,75 mg/L, MBIC &#8804; 0,5/9,5 mg/L e MBEC < 0,72/13,72 mg/L), e para FNS (MIC e MBIC iguais a 150 ÂM/L). Os dados obtidos apontam especialmente para o potencial inibitÃrio de trÃs dos antibiÃticos estudados - AMC, DOX e SXT, e farnesol contra cepas de B. pseudomallei associadas a biofilme. Todavia, sÃo necessÃrios novos estudos para investigar os mecanismos de aÃÃo dessas drogas sobre o biofilme, bem como o delineamento de experimentos in vivo para confirmar a significÃncia desses achados clinicamente. Ademais, o crescimento dessas cepas em condiÃÃes de formaÃÃo de melanina e biofilme evidenciou que esta associaÃÃo torna as cepas mais resistentes à aÃÃo de imipenem e farnesol.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Nosocomial infections (NI) are a serious public health problem. Knowledge about the etiology of NI is important for the development of control measures, prevention and treatment. Viruses are important etiologic agent of NI has been studied in populations considered at risk as premature, heart disease, lung disease, and immunosuppressed. Respiratory hospital infection (RHI) generate discomfort to patients, postponing medical interventions, postoperative complications, use more drugs and, in some cases, intensive care, may progress to cure or to death. Viruses are responsible for outbreaks of RHI in wards and intensive care units, with the virus as detected respiratory syncytial virus. In our country there are few data on the impact of RHI caused by respiratory viruses in children. Aims of the study were: identify and describe RHI cases in children and submit nasopharyngeal aspirates collected from January to December 2013 to search for molecular diagnosis 13 respiratory viruses [respiratory syncytial virus (RSV), adenovirus, influenza A and B, parainfluenza virus -1 ,-2 , -3 and -4 , metapneumovirus and human coronavirus OC43 , NL63 , 229E and HKU - 1]. During the study period, 120 samples were included in the study and 65 % were positive for at least one virus. A total of 114 viruses were detected (33 RSV, 32 adenovirus, 14 Parainfluenza -3, 14 influenza A , 12 Parainfluenza -4 , 5 parainfluenza -1 , 3 metapneumovirus and 1 coronavirus OC43). Co-detections occurred in 26 cases: 16 with two viruses and 10 with three viruses. No clinical differences between positive and negative RHI for viruses investigated were observed. Respiratory virus were detected in four of five deaths (5/120 4.16%) associated RHI. The knowledge about the occurrence of viral RHI in association with the period of viruses circulation in the community, as described in the study, allows to develop specific actions steps to prevent and control hospital outbreaks caused by viruses. / As infecÃÃes relacionadas à assistÃncia à saÃde (IRAS) sÃo um sÃrio problema de saÃde pÃblica. O conhecimento sobre a etiologia das IRAS à importante para o desenvolvimento de medidas de controle, prevenÃÃo e tratamento. A importÃncia dos vÃrus na etiologia das IRAS tem sido estudada em populaÃÃes consideradas de risco, como prematuros, cardiopatas, pneumopatas e imunodeprimidos. As infecÃÃes respiratÃrias hospitalares (IRH) geram aos pacientes desconforto, adiamento de intervenÃÃes mÃdicas, complicaÃÃes pÃs-cirÃrgicas, uso adicional de medicamentos e, em alguns casos, cuidados intensivos, podendo cursar para a cura ou para o Ãbito. Os vÃrus sÃo responsÃveis por surtos de IRH em enfermarias e unidades de terapia intensiva, sendo o vÃrus sincicial respiratÃrio o mais detectado. Em nosso paÃs sÃo escassos os dados sobre o impacto das IRH causadas por vÃrus respiratÃrios em pediatria. Os objetivos deste estudo foram: identificar e descrever os casos de IRH em crianÃas e submeter aspirados de nasofaringe coletados no perÃodo de janeiro a dezembro de 2013 ao diagnÃstico molecular para pesquisa de 13 vÃrus respiratÃrios [vÃrus sincicial respiratÃrio (VSR), adenovÃrus, influenza A e B, parainfluenza 1, 2, 3 e 4, metapneumovÃrus e coronavÃrus humanos OC43, NL63, 229E e HKU-1]. Para tanto, as amostras foram extraÃdas para obtenÃÃo do material genÃtico viral e, posteriormente, para os vÃrus de RNA, parte deste produto foi transformada em DNA complementar e depois a amplificado. Para detecÃÃo do adenovÃrus, foram realizados PCR e Nested PCR. No perÃodo de estudo, 120 amostras foram incluÃdas e 65% delas foram positivas para pelo menos um vÃrus. Um total de 114 vÃrus foram detectados (33 VSR; 32 adenovÃrus; 14 parainfluenza-3; 14 influenza A; 12 parainfluenza-4; 5 parainfluenza-1; 3 metapneumovÃrus e 1 coronavÃrus OC43). Co-detecÃÃes ocorreram em 26 casos: 16 com dois vÃrus e 10 com trÃs vÃrus. NÃo foram observadas diferenÃas clÃnicas entre as IRH positivas e negativas para os vÃrus pesquisados. VÃrus respiratÃrios foram identificados em quatro dos cinco casos de Ãbito (4,16%; 5/120) associados à IRH. O conhecimento sobre a ocorrÃncia da IRH virais em associaÃÃo com o perÃodo de circulaÃÃo dos vÃrus na comunidade, como descrito no estudo, permite desenvolver aÃÃes especÃficas de medidas para prevenir e controlar surtos hospitalares causados pelos vÃrus.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O trabalho descreve o primeiro estudo sobre a atividade antimicrobiana e mecanismos de aÃÃo de concentraÃÃes sub-inibitÃrias e inibitÃrias do Ãleo essencial das folhas de Plectranthus amboinicus contra uma cepa padrÃo de Klebsiella pneumoniae e cepas obtidas de isolados clÃnicos multirresistentes. A concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (CIM), concentraÃÃo bactericida mÃnima (CBM), a taxa de morte e o efeito do pH na aÃÃo do Ãleo essencial foram analisadas atravÃs de testes de microdiluiÃÃo em microplacas. ConcentraÃÃes sub-inibitÃrias e inibitÃrias do Ãleo essencial foram testadas para verificar sua aÃÃo sobre permeabilidade da membrana, expressÃo de cÃpsula, atividade da urease e morfologia celular de K. pneumoniae. A CIM e CBM do Ãleo essencial foram de 0,09 Â 0,01% e resultou notavelmente na inibiÃÃo completa do crescimento bacteriano apÃs 2 horas, quando as bactÃrias foram expostas a duas vezes a CIM do Ãleo essencial. A melhor CIM foi encontrada quando o pH neutro ou alcalino foi usado. CaptaÃÃo de Cristal violeta foi considerada significativa quando o dobro da CIM do Ãleo essencial foi usado (p <0,05). InibiÃÃo da atividade da urease foi observada em todas concentraÃÃes sub-inibitÃrias testadas, quando comparada ao grupo nÃo tratado (p<0,001). Verificou-se ainda alteraÃÃo na expressÃo da cÃpsula e alteraÃÃes na membrana, verificadas pelas tÃcnicas de Anthony e por microscopia de forÃa atÃmica, respectivamente. / This work describes the first study about the antimicrobial activity and mechanisms of action of the subinihibitory and inhibitory concentrations essential oil from leaves of Plectranthus amboinicus against standard strain of Klebsiella pneumoniae and multresistant clinical isolates of the bacterium. The minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC), the rate of killing and the pH sensitivity of the essential oil were determined through microplate-microdilution tests. Subinihibitory and inhibitory concentrations of Plectranthus amboinicus essential oil were tested in order to check their action on K. pneumoniae membrane permeability, capsule expression, urease activity and cell morphology. The MIC and MBC of the essential oil were 0.09Â 0.01% and resulted remarkably in complete inhibition of the bacterial growth after 2 hours, when the bacteria were exposed to twice the MIC of the essential oil. A better MIC was found when neutral or alkaline pH broth was used. Cristal violet uptake which represented altered permeability was considered to be significant when twice the MIC of the essential oil was used compared to the untreated group (p<0.05); Reduction of the urease activity could be found when all the subinihibitory concentrations were tested compared to the untreated group (p< 0.001). Is the result was an indicative that there was alteration on the capsule expression and membrane leakage, which could be demonstrated by the AnthonyÂs method and atomic force microscopy, respectively.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Sporotrichosis is a cosmopolitan subcutaneous mycosis, found mainly in tropical and subtropical areas of Latin America, caused by species of Sporothrix schenckii complex. The aim of this study was to demonstrate the capacity of Sporothrix schenckii complex to produce in vitro biofilms and to determine the profile of these biofilms against to classical antifungal drugs. Four species from Sporothrix schenckii complex were used: S. brasiliensis (n=10), S. schenckii sensu stricto (n=2), S. globosa (n=2) and S. mexicana (n=4). The formation of biofilms was performed by transferring inoculum of 2 x 105 conidia/mL for microdilution plates, which were incubated at 25 ÂC for 5 days. After each day of incubation, XTT and Crystal Violet assays were made to determine the metabolic activity and biomass of biofilm, respectively. For susceptibility tests, three different concentrations (planktonic MIC, 10 x MIC and 50 x MIC) of antifungals amphotericin B (AMB), caspofungin (CAS), ketoconazole (KTC), voriconazole (VRC) and fluconazole (FLC) were transferred to biofilm wells, which were incubated for 72 hours at 25 ÂC. The biofilms profile then antifungal drugs presence was determined by the XTT and crystal violet assays. Biofilms were produced in Thermanoxâ coverslips for viewing by optical microscopy with congo-red staining, scanning electron microscopy and confocal microscopy. It was found that all species from S. schenckii complex are strong biofilm-forming, with no difference formation between them. Absorbance of biofilm after drug exposure showed that biomass and metabolic activity was significantly reduced (p<0.05), mainly in S. brasiliensis. Antifungal drugs tested showed metabolic activity and biomass reduction, especially at concentrations 50 times higher than the planktonic MICs, demonstrating the protective increase in sessile form when compared for planktonic form. / A esporotricose à uma micose subcutÃnea cosmopolita, encontrada, principalmente, em Ãreas tropicais e subtropicais da AmÃrica Latina, sendo causada por espÃcies do complexo Sporothrix schenckii. O objetivo deste estudo foi demonstrar a capacidade de fungos do complexo S. schenckii de produzir biofilmes in vitro e determinar o perfil desses biofilmes frente Ãs drogas antifÃngicas clÃssicas. Foram utilizadas 4 espÃcies do complexo Sporothrix schenckii: S. brasiliensis (n=10), S. schenckii sensu stricto (n=2), S. globosa (n=2) e S. mexicana (n=4). A formaÃÃo dos biofilmes foi feita atravÃs da transferÃncia de inÃculos de 2 x 105 conÃdios/mL para placas de microdiluiÃÃo, que foram incubadas a 25 ÂC por 5 dias. ApÃs cada dia de incubaÃÃo, realizaram-se ensaios de XTT e Cristal violeta, para se determinar a atividade metabÃlica e biomassa dos biofilmes, respectivamente. Para os ensaios de sensibilidade, trÃs concentraÃÃes diferentes (MIC planctÃnico, 10 x MIC e 50 x MIC) dos antifÃngicos anfotericina B (AMB), caspofungina (CAS), cetoconazol (KTC), voriconazol (VRC) e fluconazol (FLC) foram transferidas para os poÃos com biofilmes, que foram incubados por 72 horas a 25 ÂC. O perfil dos biofilmes frente Ãs drogas antifÃngicas foi determinado atravÃs de ensaios de XTT e cristal violeta. Biofilmes foram produzidos em lamÃnulas de Thermanoxâ para visualizaÃÃo atravÃs de microscopia Ãptica com coloraÃÃo de vermelho-congo, microscopia eletrÃnica de varredura e microscopia confocal. Verificou-se que todas as espÃcies do complexo S. schenkii sÃo fortes formadoras de biofilme, nÃo havendo diferenÃa de formaÃÃo entre as espÃcies. A absorbÃncia dos biofilmes apÃs exposiÃÃo Ãs drogas demonstrou que a biomassa e a atividade metabÃlica foram reduzidas de forma significativa (p<0,05), principalmente, em S. brasiliensis. Os antifÃngicos testados mostraram reduÃÃo na atividade metabÃlica e biomassa, principalmente, em concentraÃÃes 50 vezes maiores que os MICs planctÃnicos, demonstrando o incremento protetivo que a forma sÃssil possui frente à forma planctÃnica.