CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Clostridium difficile à um bacilo Gram positivo, anaerÃbio estrito, formador de esporos e produtor de toxinas. Atualmente, representa a principal causa de diarreia hospitalar associada ao uso de antibiÃticos. Pacientes oncolÃgicos sÃo um dos principais grupos de risco para infecÃÃo por C. difficile (CDI), visto que o uso de agentes quimioterÃpicos pode alterar a mucosa intestinal. AlÃm disso, estes pacientes normalmente sÃo imunodeprimidos e frequentemente utilizam antibiÃticos de largo espectro. Tendo em vista a patogenicidade do C. difficile e a importÃncia da doenÃa induzida por essa bactÃria em ambiente hospitalar este estudo visou determinar a incidÃncia e caracterizaÃÃo fenotÃpica e genotÃpica de cepas de C. difficile isoladas de pacientes oncolÃgicos internados do Hospital Haroldo JuaÃaba, Fortaleza, CearÃ. Durante o perÃodo de 12 meses (maio/2013 a maio/2014) foram coletadas 41 amostras de fezes diarreicas. Toxinas A e/ou B foram detectadas a partir das fezes por meio de um kit de detecÃÃo comercial ELISA. Em seguida, as amostras foram cultivadas em Agar Cicloserina, Cefoxitina, Frutose (CCFA) e incubadas em anaerobiose. As cepas isoladas foram processadas e realizadas identificaÃÃo fenotÃpica e anÃlise de detecÃÃo dos genes das toxinas e do fragmento do gene tpi (identificaÃÃo definitiva) por PCR convencional. A sensibilidade das cepas isoladas a 12 antimicrobianos foi determinada por meio de E-test. TambÃm foi realizado a genotipagem das cepas por meio da anÃlise molecular PFGE. 46,3% (19/41) das amostras foram positivas para presenÃa das toxinas A/B por ELISA e/ou cultura do C. difficile. Dessas amostras, foram isolados C. difficile de trÃs amostras (15,8% - 3/19). Em todos os isolados foram detectados os genes tpi, tcdA e tcdB. O domÃnio de ligaÃÃo da toxina binÃria (cdtB) nÃo foi detectado assim como tambÃm nÃo foram observadas deleÃÃes no gene tcdC nos isolados. Todas as cepas apresentaram o mesmo genÃtipo, NAP4. Com relaÃÃo à sensibilidade das cepas aos antimicrobianos foi verificado resistÃncia a dois ou mais antimicrobianos (azitromicina, tetraciclina, ciprofloxacina, levofloxacina, ceftriaxona e cefotaxima). 57,9% (11/19) faziam uso de antibiÃticos e quimioterÃpicos. Este trabalho descreveu a incidÃncia de CDI em pacientes oncolÃgicos, e evidenciou pela primeira vez a presenÃa de C.difficile em casos associados a comunidade (CA-CDI) nesses pacientes no Brasil, ressaltando a importÃncia do estudo dessa bactÃria para a compreensÃo da situaÃÃo epidemiolÃgica dessa infecÃÃo e de sua dispersÃo entre unidades hospitalares brasileiras. / Clostridium difficile is a strictly anaerobic, spore-forming, toxin-producing Gram positive bacillus. Currently, it is the main cause of nosocomial diarrhea associated with antibiotic use. Cancer patients are a major risk group for C. difficile infection (CDI), since the use of chemotherapeutic agents can alter the intestinal mucosa. Furthermore, these patients are often immunosuppressed and often use broad spectrum antibiotics. Considering the pathogenicity of C. difficile and the importance of this infection in hospitalized patients, this study aimed to determine the incidence and the phenotypical and genotypical characterization of strains of C. difficile isolated from cancer patients at Haroldo JuaÃaba Hospital, Fortaleza, CearÃ. During the 12 month period (May/2013 to May/2014) 41 diarrheic fecal samples were collected. Toxins A/B were detected from feces through a commercial ELISA detection kit. Then, the samples were cultivated on cefoxitine-cycloserine-frutose agar (CCFA) and incubated anaerobically. Isolates were submitted to several analyses, including phenotypical identification, detection of toxin genes and of a fragment of the tpi gene (definitive identification) by conventional PCR. The susceptibility of the strains to 12 antimicrobial agents was determined by E-test. Genotyping of the strains was also performed through molecular PFGE analysis. Out of 41 samples, 46.3% (19/41) were positive for either one or both of the performed tests: detection of toxin A/B and/or culture of C. difficile. C. difficile was recovered from three samples (15.8% - 3/19). The tpi, tcdA and tcdB genes were detected in all of the isolates. The binding domain of the binary toxin (cdtB) was not detected as well as no deletions were observed in the tcdC gene of the analysed isolates. All strains belonged to the same genotype, NAP4. Regarding the antimicrobial susceptibility of the strains, resistance to two or more antibiotics (azithromycin, tetracycline, ciprofloxacin, levofloxacin, ceftriaxone and cefotaxime) was observed. Out of the 19 positive patients, 57.9% (11/19) were using antibiotics and under chemotherapy. This paper describes the incidence of CDI in patients with cancer, and shows for the first time the detection of community-associated Clostridium difficile infection (CA-CDI) in those patients in Brazil, highlighting the importance of studying this bacterium for understanding the epidemiological situation of this infection and its spread among Brazilian hospitals.

Coccidioidomicose consiste em enfermidade causada pelos fungos dimÃrficos do gÃnero Coccidioides â C. immitis e C. posadasii â que acomete o homem e diversos animais como bovinos, ovinos, roedores e cÃes. Restrita ao continente americano, casos da doenÃa vem ocorrendo no Estado do Cearà desde 1995. A infecÃÃo ocorre geralmente por contato inalatÃrio com as estruturas infectantes do fungo presentes no ambiente, os artroconÃdeos. Em sua fase parasitÃria, os microrganismos se apresentam sob a forma de esfÃrulas responsÃveis pelas manifestaÃÃes clÃnicas da doenÃa. A maioria dos casos cursa de forma assintomÃtica, sendo os quadros respiratÃrios os mais comuns em pacientes clinicamente enfermos. O diagnÃstico da doenÃa se baseia em tÃcnicas microbiolÃgicas como pesquisa direta e cultura, porÃm estes procedimentos demandam estrutura especializada â nÃvel de biosseguranÃa III -por tratar-se de microrganismo de classe biolÃgica 3. Abordagem imunolÃgica mostra-se promissora por prescindir da manipulaÃÃo fÃngica e ser exeqÃÃvel em diversos laboratÃrios de rotina micolÃgica. Neste trabalho, objetivou-se traÃar perfil clÃnicolaboratorial dos casos de coccidioidomicose ocorridos no Estado do Cearà entre os anos de 1995 e 2007, alÃm de obter fraÃÃes antigÃnicas a partir do fracionamento de AntÃgeno total de C. posadasii empregÃveis como imunodiagnÃstico da doenÃa. Foram catalogados 19 casos da doenÃa no perÃodo em estudo. Todos os pacientes eram homens jovens com manifestaÃÃes respiratÃrias, com exceÃÃo de um caso. O hÃbito recreativo de caÃar tatus foi relatado por 18 pacientes. A abordagem laboratorial destes casos consistiu em estudo microbiolÃgico, associado a tÃcnicas moleculares, imunolÃgicas, histopatolÃgicas ou de experimentaÃÃo animal. O fracionamento protÃico do AntÃgeno total de C. posadasii originou trÃs fraÃÃes antigÃnicas com teor protÃico distinto, perfil eletroforÃtico diferenciado e imunorreatividade pela tÃcnica de Western blotting. A fraÃÃo 60-90% revelou banda imunorreagente de aproximadamente 30 a 40 KDa reconhecida por soros de coccidioidomicose, porÃm apresentando reatividade cruzada com alguns soros de paciente com histoplasmose. Esta banda protÃica, em estudos posteriores, poderà ser caracterizada e purificada com potencial utilizaÃÃo como ferramenta para o imunodiagnÃstico da doenÃa. / Coccidiodomycosis is a disease caused by dimorphic fungi of the Coccidioides genus â C. immitis and C. posadasii â which afflicts people and various animals, such as cattle, goats, rodents and dogs. It is restricted to the Americas and cases have been reported in the state of Cearà only since 1995. The infection generally results from inhaling the infectious structures arthroconidia -of the fungus. In its parasitic phase, the microorganisms responsible for the clinical signs of the disease have a spherical shape. Most cases are asymptomatic, and respiratory problems are the most common symptoms in patients that are clinically affected. The diseaseâs diagnosis is based on microbiological techniques such as direct examination of clinical specimens and culturing, but these procedures require specialized biosecurity level 3 facilities because the microorganism falls in biological class 3. The immunological approach appears promising because it does not require manipulation of the fungi and can be performed in various laboratories equipped for routine mycological tests. The aim of this work is to outline the clinical and laboratory profile of the cases of coccidiodomycosis that occurred in the state of Cearà between 1995 and 2007 and to report experiments to obtain antigenic fractions from fractioning AntÃgeno total of C. posadasii, as a possible means for immunodiagnosis of the disease. A total of 19 cases of the disease were cataloged in the study period. All the patients were young men with respiratory symptoms, except for one case. All but one of the patients reported they engaged in recreational hunting of armadillos. The laboratory approach in these cases consisted of microbiological examination combined with molecular, immunological, histopathological techniques or animal experiments. The protein fractioning of AntÃgeno total of C. posadasii produced three antigenic fractions with different protein content, electrophoretic profile and immunoreactivity according to the Western blotting technique. The 60-90% fraction showed an immunoreactive band of approximately 30 to 40 KDa, recognizable by sera from patients with coccidiodomycosis, but showed crossreactivity with some sera from patient with histoplasmosis. This protein band, in subsequent studies, can be characterized and purified for potential use as a tool for immunodiagnosis of the disease.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Apesar do empenho do MinistÃrio da SaÃde para a eliminaÃÃo da hansenÃase, o Brasil à o segundo paÃs em nÃmero de casos no mundo, precedido pela Ãndia, e responsÃvel por 80% dos casos no continente americano, sendo o Nordeste do paÃs e, em especial, o Estado do Cearà considerado uma regiÃo de alta endemicidade. De acordo com a classificaÃÃo de Ridley e Jopling, as formas clÃnicas dividem-se em virchowiana, dimorfa-virchowiana, dimorfa-dimorfa, dimorfa-tuberculÃide e tuberculÃide. O trabalho foi realizado com 87 pacientes com hansenÃase, sendo 51,72% do sexo feminino e 48,3% do sexo masculino; destes 87 pacientes, 77,01% vacinados em algum perÃodo da vida entre a infÃncia a adolescÃncia. Os pacientes incluÃdos no estudo encontravam-se nÃo tratados (n=23) ou em tratamento (n=64), apresentando a maioria dos pacientes a hansenÃase pela primeira vez e alguns apresentavam recidiva (n=11). A sorologia de IgG sÃrica anti-PGL1 foi realizada em 83 pacientes, tendo sido as concentraÃÃes de maiores diferenÃas ocorridas entre os grupos com a forma tuberculÃide e dimorfa-tuberculÃide e o grupo com a forma dimorfa-virchowiana. As 87 amostras analisadas foram amplificadas quanto à seqÃÃncia de 171 pb de uma regiÃo altamente conservada dos aminoÃcidos 671-692 do C-terminal no domÃnio intracelular do receptor Toll-like 2 e foi aplicada a tÃcnica de AnÃlise do Polimorfismo Conformacional de Fita Ãnica (SSCP). O perfil eletroforÃtico das amostras testadas encontradas foram de duas e trÃs bandas, mostrando-se necessÃrio o sequenciamento,este apresentou heterozigose marcado pela presenÃa das bases C e T na posiÃÃo C2029T, e alÃm de dois outros perfis de heterozigose nas posiÃÃes C2006T (encontrado em todas as amostras sequenciadas) e T2008G (amostra 82). O trabalho sugere que houve heterozigose na regiÃo do Ãxon 3 do gene do receptor toll-like tipo 2, diferentemente do encontrado por Kang e Chae (2001) o que pode significar que o perfil de suscetibilidade em nossa populaÃÃo à distinta daqueles encontrados na Ãndia e na CorÃia. / Although several efforts from Ministry of Health have been made in order to eliminate leprosy, Brazil is still the second country with the highest number of cases in world after India and is responsible for 80% of the cases in the American continent, the Ceara state situated in the Norheastern region is considered to have high incidence rates of leprosy cases. According to Ridley and Jopling classification, the clinical forms of leprosy can be divided in lepromatous leprosy, borderline lepromatous leprosy, borderline borderline leprosy, borderline tuberculoid leprosy, and tuberculoid leprosy. This work was done with 87 patients with leprosy, being 51.72 % of the female gender and 48.3% of the male gender; from the total of patients, 77.0% had been vaccinated with BCG once in life. All the patients enrolled in the study were not treated (n=23) or in treatment (n=64). Most of the patients had suffered from leprosy for the first time and some (n=11) had suffered from leprosy recidive. The anti-PGL1 serum IgG serology has been performed in 83 patients, and the most significant differences were found comparing the tuberculoid leprosy and borderline tuberculoid leprosy groups with the borderline lepromatous leprosy group. All DNA samples (n=87) were amplified in respect to the 171 bp highly conserved sequence of the aminoacids 671-692 from the C-terminal intra-cellular domain of Toll-like 2 receptor, and they were submitted to a Single Strain Conformation Polymorphism Technique (SSCP). The eletrophoretic profile found of the samples showed two and three bands, it is essential to the sequencing, this showed heterozygosis at position C2029T, and in addition two other sections of heterozygosity at positions C2006T (found in all four sequenced samples) and 2008 (sample 82). The work showed that the heterozygosity found in the gene exon 3 of the tool-like receptor type 2, unlike the one found by Kang and Chae (2001) which may mean that the susceptibility profile from our population is distinct from those found in India and Korea.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A dengue à a arbovirose mais importante no mundo, causando mais de 100 milhÃes de casos de dengue clÃssico (DC) e mais de 250 mil casos de febre hemorrÃgica da dengue (FHD), anualmente. A infecÃÃo com o vÃrus dengue (DENV), famÃlia Flaviviridae, causa um amplo espectro de manifestaÃÃes clÃnicas que variam desde formas assintomÃticas a quadros graves, potencialmente fatais, como os casos hemorrÃgicos e/ou de choque hipovolÃmico. Na maioria das vezes, a doenÃa se apresenta com sintomas inespecÃficos. Dessa forma, torna-se difÃcil diferenciar a dengue de outros casos febris de natureza infecciosa como leptospirose, febre amarela e outras arboviroses, apenas com base nas manifestaÃÃes clÃnicas iniciais. Diante disso, o objetivo deste estudo foi identificar a etiologia de 82 pacientes com quadro clÃnico semelhante ao de dengue e com resultado negativo no isolamento viral (IV) para o DENV. O IV foi realizado pelo LaboratÃrio Central de SaÃde PÃblica do Cearà (LACEN-CE), em 2008. Neste estudo, as amostras desses pacientes foram avaliadas para dengue por meio da detecÃÃo de anticorpos especÃficos contra o vÃrus pela tÃcnica de IgM-ELISA (PanBio DiagnosticsÂ) e pela reaÃÃo em cadeia da polimerase apÃs transcriÃÃo reversa (RT-PCR). As amostras negativas para dengue foram testadas para a detecÃÃo de anticorpos IgM especÃficos contra bactÃrias do gÃnero Leptospira por ELISA (PanBio DiagnosticsÂ). Foram testadas tambÃm amostras de 73 pacientes quanto a infecÃÃo por hantavirus, atravÃs da detecÃÃo de anticorpos especÃficos (IgM e IgG) contra antÃgenos de hantavÃrus e RT-PCR. Trinta e cinco pacientes (35/82; 42,68%) foram positivos para dengue, sendo que destes, todos foram positivos no IgM-ELISA e 4 foram positivos tambÃm no RT-PCR. Das 47 amostras dengue-negativas, apenas 43 foram testadas para infecÃÃo por Leptospira devido ao volume insuficiente das amostras. Seis pacientes (6/82; 7,32%) foram positivos IgM-ELISA para leptospirose. TrÃs pacientes foram positivos para hantavÃrus, entretanto apenas 1 (1/82; 1,22%) foi positivo no IgM-ELISA e 2, no IgG-ELISA. A infecÃÃo dos 35 (42,68%) pacientes negativos em todos os testes de detecÃÃo de infecÃÃo aguda foi classficada como sÃndrome febril indiferenciada (SFI). Esta à a primeira evidÃncia de infecÃÃo por hantavÃrus no Estado do CearÃ. Essas doenÃas podem causar infecÃÃo clinicamente indistinguÃvel da dengue e, portanto, deveriam ser incluÃdas no diagnÃstico diferencial no contexto dessas sÃndromes febris. / Dengue is the most important arborvirosis in the world, causing approximately 100 millions cases of classical dengue fever (DF) and more than 250.000 of dengue hemorrhagic fever (DHF), annually. The dengue virus (DENV) belongs to the Flaviviridae family and its infection causes a wide clinical spectrum ranging from assymptomatic forms to severe manifestations, potentially fatal, as in hemorrhagic forms or dengue shock syndrome (DSS). Most of times the disease presents inespecific symptoms. Thus, DF is difficult to distinguish from other acute febrile illnesses, including arboviral ones and leptospirosis, based only on clinical criteria. Given this, the aim of this study was to identify the etiology of 82 patients with clinical picture of dengue-like illness, negative in DENV isolation. The virus isolation was done in Laboratorio Central de SaÃde PÃblica do Cearà (LACEN-CE), Brazil, in 2008. In the present study, the serum samples from these patients were evaluated for dengue infection by IgM-ELISA (PanBio DiagnosticsÂ) and RT-PCR, following Lanciotti et alli protocol (1992). Negative samples to dengue infection were tested to leptospirosis by IgM-ELISA (PanBio DiagnosticsÂ). Seventy-three patients were also tested for hantavirus infection by IgM and IgG by ELISA and RT-PCR. Dengue infection was diagnosed in 35 patients (35/82; 42.68%) of which all were positive in IgM-ELISA, and 4 were also positive in RT-PCR. Of 47 (47/82; 57.32%) DENV-negative samples, only 43 were tested to evaluate lesptospiral infection because of insufficient sample volume. Six patients (6/82; 7,32%) were positive to leptospirosis in the IgM-ELISA. Three patients were positives to hantavirus infection, but only 1 (1/82; 1,22%) was positive in the IgM-ELISA and the two others, in the IgG-ELISA. Thirty and five patients (35/82; 42,68%) remained negative em all tests. They were classified as having other febril illness (OFI). To the best of our knowledge, this is the first evidence of hantavirus infection in humans in the state of CearÃ, Brazil. These diseases, including leptospirosis, may cause infection clinically indistinguishable from DF and therefore should be included in the differential diagnosis of febrile illnesses in this setting.

O uso de produtos naturais, principalmente de origem vegetal, na terapêutica medicinal representa a forma mais antiga e difundida de medicação. Ficus pumila, planta amplamente utilizada na ornamentação de muros e paredes, conhecida como hera-miúda ou unha-de-gato, apresenta inúmeras atividades biológicas. Pela população é utilizada como antitumoral, antiinflamatório, tônico e no tratamento de doenças como diabetes e hipertensão. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo estudar a composição química e as atividades antimicrobiana e antioxidante, além da citotoxicidade de extratos hidroetanólicos de caule, raiz, folhas e frutos secos e frescos de Ficus pumila. Em relação à composição química, os resultados encontrados revelaram a presença de taninos e flavonoides em todos os extratos. O maior teor de compostos fenólicos foi exibido pela raiz seca (724,39 mg AG/g) e o menor pelo caule fresco (84,8 mg AG/g). O maior teor de flavonoides foi apresentado pela folha seca (15,30 mg quercetina/g) e o menor pelo caule seco (1,29 mg de quercetina/g). Os testes microbiológicos indicaram a atividade dos extratos contra Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus e Proteus mirabilis. Os melhores resultados foram exibidos pelos extratos de caule e raiz. Os extratos não apresentaram atividade contra Mycobacterium tuberculosis H37 e Mycobacterium bovis (BCG). A maior atividade antioxidante foi demonstrada pelo extrato de caule fresco (12,81 μg/mL) e a menor pelo extrato de folha fresca (58,56 μg/mL). A avaliação da citotoxicidade frente à cultura celular revelou a ausência de citotoxicidade dos extratos de caule, raiz e fruto nas concentrações testadas. Concluiu-se que Ficus pumila pode ser, no futuro, uma fonte de compostos antioxidantes e antimicrobianos para o desenvolvimento de novos fármacos. / The use of natural products, mainly of vegetable origin in medical therapy is the oldest form of medication and widespread. Ficus pumila plant widely used in the decoration of walls and partitions, known as Ivy - girl or cat's claw, has numerous biological activities. By population is used as antitumor, anti-inflammatory, tonic and also for the treatment for some diseases such as diabetes and hypertension. In this context, the present work aimed to study the chemical composition and antimicrobial and antioxidant activities, beyond the cytotoxicity of hydroethanolic extracts of root, stalk, leaves and dried and fresh fruits of Ficus pumila. Regarding the chemical composition, the results revealed the presence of tannins and flavonoids in all extracts. The higher content of phenolic compounds was screened by dried root (724.39 mg AG / g) and the lowest by the fresh stem (84.8 mg AG/ g). The highest content of flavonoids was presented by drought (15.30 mg quercetin/ g) and the lowest by dry leaf stem (1.29 mg quercetin/ g). Microbiological tests indicated the activity of the extracts against Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus and Proteus mirabilis. The best results were shown by the extracts of stem and root. The extracts showed no activity against Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis H37 (BCG). The highest antioxidant activity was shown by extracts of fresh stem (12.81 mg/ mL) and lowest for fresh leaf extract (58.56 mg/ mL). The cytotoxicity against the cell culture revealed the absence of cytotoxicity of extracts of root, stalk and fruit concentrations tested. It was concluded that Ficus pumila may be in the future a source of antioxidants and antimicrobial compounds for drug development.

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One of the genes responsible for the assembly of these SD in M. tuberculosis is the mbtb. A MM strain, which belongs to the outbreak that happened in Goiânia (MM GO06) had its genome sequenced and the analysis revealed that the species has a putative gene with high similarity to M. tuberculosismbtb, which could be an indication that MM also synthesizes a siderophore molecule and that this can be helping this mycobacteria to install the infection in the host. It is known that in the absence of mbtb gene M. tuberculosis do not synthesize their SD. To estimate whether a gene similar to mbtb and with the same function is present in MM (smbtb) will assist in the understanding of the infection mechanisms of MM and discover new drug targets for treating infections with this microorganism. Total RNA was obtained from cultures grown at different concentrations of Fe. Real time PCR was performed targeting the smbtb to evaluate the expression of this gene during bacterial growth in each condition. The expression of smbtb was higher with the increase of the availability of iron. In vivo studies with mice supplemented with or chelated fromiron showed expression profile of smbtb different from those obtained in in vitro studies. In mice, M. massiliense smbtb expressed at higher levels when the animal were treated for iron depletion. Thus, we have evidence that smbtb is involved in iron uptake both for subsequent storage, when this ion is available, and for prompt use in the metabolism of the bacteria when it is not in an environment where there is availability of this ion. / Mycobacterium massiliense (MM) tem sido associado como agente causador de vários surtos nosocomiais relacionados à laparoscopia, artroscopia e infecções de feridas. Inúmeros surtos têm sido reportados no Brasil. As cidades de Goiânia, Rio de Janeiro e Belém apresentaram um alto número de casos em 2006 e 2007. O íon ferro é extremamente importante para vários processos bioquímicos em todos os organismos e, no caso dos microrganismos, para o sucesso da infecção. Para auxiliar a captação de Fe durante este processo, os microrganismos sintetizam moléculas chamadas sideróforos, que desempenham esta função. Micobactina e carboximicobactina são os sideróforos que já foram descritos em micobactérias. Um dos genes responsáveis pela síntese dos sideróforos em M. tuberculosis é o mbtb. Um isolado de MM, com origem no surto que aconteceu em Goiânia (MM GO06) teve seu genoma sequenciado e sua análise revelou que esta espécie possui um gene putativo com alta similaridade com o mbtb de M. tuberculosis, o que poderia indicar que MM também sintetiza sideróforos e que está molécula poderia estar auxiliando esta micobactéria a instalar a infecção no hospedeiro. Sabemos que a ausência do gene mbtb em M. uberculosis torna esta micobactéria incapaz de sintetizar sideróforos. Avaliar se um gene similar ao mbtb e com a mesma função está presente em MM (smbtb) irá auxiliar o entendimento dos mecanismos de infecção de MM e a descoberta de novos alvos para drogas para o tratamento de infecções causadas por MM. RNA total foi obtido de culturas onde MM foi crescido em diferentes concentrações de ferro. Realizou-se Real Time PCR para o gene smbtb a fim de avaliar a expressão deste gene durante o crescimento bacteriano em cada condição. A expressão do sbmtb aumentou com o aumento da disponibilidade de ferro. Estudos in vivo com camundongos suplementados ou privados do íon ferro apresentaram um perfil de expressão diferente daquele obtido nos estudos in vitro. Em camundongos, MM expressou smbtb em altos níveis nos animais que foram tratados com quelante para o íon ferro. Evidenciamos então, que smbtb pode estar envolvido na captação de ferro tanto para armazenamento deste íon, quando o mesmo está isponível, quanto para a utilização imediata no metabolismo da bactéria, quando há uma baixa disponibilidade de ferro no ambiente que MM se encontra.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O Streptococcus (S.) pneumoniae à considerado como o principal agente causador de morbidade e mortalidade em crianÃas menores de cinco anos de idade. Todas as doenÃas pneumocÃcicas comeÃam com o estabelecimento da colonizaÃÃo do S. pneumoniae na nasofaringe, podendo progredir para doenÃa invasiva se as barreiras naturais forem cruzadas. Nas Ãltimas dÃcadas, o aumento do nÃmero de cepas de S. pneumoniae resistentes à antibiÃticos β-lactÃmicos e a outras classes de antimicrobianos tem dificultado o tratamento da infecÃÃo pneumocÃcica. Atualmente cerca de 13 sorotipos de S. pneumoniae respondem por mais de 85% dos isolados invasivos. A vacina pneumocÃcica polissacarÃdica conjugada 7-valente tem sido amplamente recomendada para crianÃas menores de cinco anos. Os objetivos desse estudo foram determinar a prevalÃncia de S. pneumoniae em crianÃas portadoras, a frequÃncia de isolados de S. pneumoniae de indivÃduos com infecÃÃo sistÃmica, o perfil de sensibilidade a antimicrobianos e os sorotipos mais comuns, em Fortaleza, Brasil. Os isolados de portadores foram recuperados a partir de swabs de nasofaringe de crianÃas usuÃrias de creches, enquanto que os isolados de infecÃÃo sistÃmica foram cedidos pelo LACEN-CE. Foram realizadas as ConcentraÃÃes InibitÃrias MÃnimas (CIM) para penicilina e ceftriaxona para todos os isolados, e levofloxacina apenas para os isolados de nasofaringe. Os pontos de corte das CIM foram determinados de acordo com o CLSI (2007). As sorotipagens dos isolados sistÃmicos foram realizadas pela reaÃÃo de Quellung, enquanto que a genotipagem capsular dos isolados de portadores foi realizada pela tÃcnica de multiplex PCR. De 215 crianÃas usuÃrias de creches, foram isolados S. pneumoniae em 152 (71%). As CIM de 137 isolados de portadores mostraram uma taxa resistÃncia de 71% para penicilina e de 21% para ceftriaxona. NÃo houve resistÃncia nos testes com levofloxacina. Comparado a um estudo similar, realizado hà 10 anos, em Fortaleza, nossos resultados apresentaram um aumento significativo nas taxas de resistÃncia à penicilina e ceftriaxona. De 26 isolados de nasofaringe que apresentaram resistÃncia plena, apenas, seis isolados (23%) tiveram a genotipagem capsular identificada por multiplex PCR. A incidÃncia de isolados invasivos neste estudo por ano, foi de, aproximadamente, 1 caso/100.000 hab. Dos 52 isolados, 42% apresentaram resistÃncia à penicilina e 13,5% à ceftriaxona. Os sorotipos mais comuns dos isolados sistÃmicos foram 19F (12%), 14, 3, 6A (8% cada), 4, 18C e 9V (6% cada), com cobertura estimada, tanto para vacina pneumocÃcica conjugada 7-valente quanto para a 10-valente, de 31,8%. / Streptococcus (S.) pneumoniae is considered the principal causative agent of morbidity and mortality in children younger than five years of age. All pneumococcal diseases are initiated by establishing a S. pneumoniae colonization in nasopharynx, the disease progressing to systemic disease if natural barrier are crossed. During the last decades, the increasing amount of resistant S. pneumoniae strains to beta-lactams and other classes of antimicrobials has modified the treatment of pneumococcal infection. At present, nearly 13 serotypes respond for more than 85% of invasive isolates. The 7-valent polysaccharide-conjugated pneumococcal vaccine has been widely recommended for use in children younger than five years. The aims of this study were to determine the S. pneumoniae carrier in children, the frequence of serotypes from systemic infection patients, the susceptibility profile to antimicrobials in Fortaleza, Brazil. Carrier state isolates were recovered from nasopharyngeal swabs from children attending day-care center facilities, while the isolates from systemic infection fournished by LACEN-CE. Minimal Inhibitory Concentrations (MIC) to penicillin and ceftriaxone were assessed for all isolates, and levofloxacin MIC only from nasopharyngeal isolates. MIC cut-offs were determined according to CLSI standards (2007). Serotyping of systemic isolates was performed by Quellung reaction, while capsular genotyping of carrier isolates was performed by multiplex PCR assay. OF 215 children attending day-care centers, 152 S. pneumoniae isolates were identified (71%). Penicillin MIC showed 71% of resistance, and for ceftriaxone, 21% of resistance. No resistance was found for levofloxacin MIC testing. When compared to a 10-year old similar study in Fortaleza, our results have shown a significant increase of penicillin and ceftriaxone resistance rates. Of 26 isolates tested, only six nasopharyngeal isolates (23%) were positively genotyped by multiplex PCR. The incidence of invasive isolates was 1/100,000 inhab. per year. Of 52 systemic isolates serotyped, 42% were penicillin-resistant, and 13.5% were ceftriaxone-resistant. Systemic serotypes identified were 19F, 3, 6A, 4, 18C and 9V, with a estimated coverage by the 7-valent and 10-v pneumococcal polysaccharide conjugated vaccines of 31.8%.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As infecÃÃes respiratÃrias agudas (IRA) sÃo importantes causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo, acometendo principalmente crianÃas menores de cinco anos de idade. Essas infecÃÃes podem ser causadas por diferentes microrganismos, porÃm os vÃrus sÃo os mais frequentes. Esse estudo teve como objetivo descrever aspectos clÃnicos e epidemiolÃgicos de IRA de etiologia viral em crianÃas de zero a 12 anos de idade atendidas em serviÃo de emergÃncia de um hospital terciÃrio da cidade de Fortaleza-CE, no perÃodo de janeiro de 2007 a dezembro de 2008. Para tanto foram coletadas 1318 amostras de secreÃÃo de nasofaringe das crianÃas. As amostras foram submetidas à tÃcnica de imunofluorescÃncia indireta para detecÃÃo dos seguintes vÃrus respiratÃrios: vÃrus sincicial respiratÃrio (VSR), metapneumovÃrus humano (MPVh), adenovÃrus, influenza A e B e parainfluenza 1, 2 e 3. Os resultados desse estudo mostraram que pelo menos um vÃrus respiratÃrio foi detectado em 383 (29,1%) amostras. O vÃrus mais prevalente foi o VSR (44,4%), tendo o mesmo apresentado um padrÃo de sazonalidade definido, com associaÃÃo a estaÃÃo chuvosa. A co-infecÃÃo ocorreu em 12 (3,1%) amostras e o VSR foi o mais frequentemente associado. A mÃdia de idade dos pacientes foi de 23 meses e nÃo houve associaÃÃo entre o gÃnero desses pacientes e a positividade dos exames, apesar da maioria das crianÃas serem do sexo masculino. Entre os diagnÃsticos clÃnicos de etiologia viral, houve predomÃnio de infecÃÃo da via aÃrea superior (IVAS) (51,2%), e em relaÃÃo ao diagnÃstico especÃfico das infecÃÃes da via aÃrea inferior (IVAI), destacou-se a pneumonia. Portanto, os resultados desse estudo ressaltam a importÃncia dos vÃrus como causadores de IRA em crianÃas na cidade de Fortaleza, com as maiores taxas ocorrendo entre os meses de marÃo a junho, diferenciando-se da regiÃo Sul do paÃs, onde as maiores taxas sÃo encontradas nos meses de julho a outubro. / Acute respiratory infections (ARI) are important causes of morbidity and mortality worldwide, affecting mainly children under five years old. These infections can be caused by different organisms, but viruses are the most frequent. This study aimed to describe clinical and epidemiological aspects of viral ARI in children 0-12 years of age treated in the emergency department of a tertiary hospital in the city of Fortaleza, from January 2007 to December 2008. Therefore, we collected 1318 samples of nasopharyngeal secretions of children. The samples were subjected to indirect immunofluorescence for detection of the following respiratory viruses: respiratory syncytial virus (RSV), human metapneumovirus (hMPV), adenovirus, influenza A and B and parainfluenza 1, 2 and 3. The results of this study showed that at least one respiratory virus was detected in 383 (29.1%) samples. The most prevalent virus was RSV (44.4%), and presented the same seasonal pattern of a defined association with the rainy season. Co-infection occurred in 12 (3.1%) samples and RSV was the most frequently associated. The average age of patients was 23 months and there was no association between gender of these patients and positivity of the tests, although most children were male. Among the clinical diagnoses of viral etiology, there was predominance of upper respiratory infection diseases (URID) (51.2%), and in relation to the specific diagnosis of the lower respiratory infections diseases (LRID), stood out pneumonia. Therefore, the results of this study highlight the importance of viruses as causes of ARI in children in Fortaleza, with the highest rates occurring between the months March to June, differing from the southern region, where the highest rates are found in the months from July to October.

nÃo hà / O aumento nos Ãltimos anos de indivÃduos imunocomprometidos, como portadores da SÃndrome da ImunodeficiÃncia Adquirida, de doenÃas malignas, transplantados e outros usuÃrios de terapias imunossupressoras, favorece o surgimento de infecÃÃes oportunistas, principalmente as de teor fÃngico, como a candidÃase e a criptococose. Apesar de a terapia antifÃngica atual ser eficiente na maioria dos casos, algumas vezes fazem-se necessÃrias novas drogas que atuem como alternativa ou como coadjuvantes no tratamento para potencializar o efeito dos antifÃngicos utilizados. As estatinas sÃo fÃrmacos hipolipemiantes mais prescritos mundialmente para doenÃas cardiovasculares. Entretanto, recentemente, tem sido descritos outros efeitos benÃficos destas drogas, como, por exemplo, o controle de infecÃÃes. Este trabalho teve como objetivo determinar a atividade antifÃngica in vitro das estatinas ante 51 cepas de Candida, sendo 16 de C. albicans, 11 de C. krusei, 12 de C. tropicalis e 12 de C. parapsilosis, e 25 cepas de Cryptococcus, sendo 12 de C. gattii e 13 de C. neoformans, por meio de testes de microdiluiÃÃo em caldo, segundo documento M27-A3 padronizado pelo CLSI. O intervalo de concentraÃÃo testado para pravastatina foi de 50 a 0,0977 mg/mL, para sinvastatina, 1 a 0,0020 mg/mL e para atorvastatina, 10 a 0,0200 mg/mL. Pravastatina inibiu 37 leveduras do gÃnero Candida apresentando concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (CIM) na faixa de 1,56 a 6,25 mg /mL e as cepas restantes nÃo foram inibidas mesmo na maior concentraÃÃo testada (50 mg /mL), enquanto que sinvastatina e atorvastatina apresentaram atividade antifÃngica sobre todas as 51 cepas avaliadas, apresentando CIMs de 0,02 a 1 mg / mL e 0,04 a 5,00 mg / mL, respectivamente. Para o gÃnero Cryptococcus, apenas 4 cepas foram inibidas ante a pravastatina (CIM = 25 mg / mL), por outro lado, sinvastatina inibiu todas as 25 cepas (CIM = 0,06 a 1 mg / mL), e atorvastatina apenas 8 cepas (CIM = 0,62 a 2,5 mg / mL), sendo que as 17 restantes nÃo foram inibidas mesmo na maior concentraÃÃo testada ( ≥ 10 mg / mL). Foi determinada concentraÃÃo fungicida mÃnima (CFM) de pravastatina sobre 15 cepas do gÃnero Candida (CFM = 3,12 a 25 mg / mL), de sinvastatina sobre 34 cepas (CFM = 0,03 a 1 mg / mL), e de atorvastatina sobre 16 cepas (CFM = 0,04 a 0,31 mg / mL). Para o gÃnero Cryptococcus, das 25 cepas testadas, pravastatina exibiu CFM sobre apenas 3 cepas (CFM = 50 mg / mL), sinvastatina sobre 21 cepas (CFM = 0,12 a 1 mg / mL), e atorvastatina sobre 1 cepa (CFM = 1 mg / mL). Esta atividade inibitÃria in vitro de estatinas sobre espÃcies de Candida e Cryptococcus, abre uma perspectiva importante para a investigaÃÃo do possÃvel uso destas drogas com finalidade antifÃngica in vivo. / In the past years, fungal opportunistic infections, especially, candidiasis and cryptococcosis, have become more frequent because of the increase in the number of immunocompromised individuals, such as AIDS, transplant and cancer patients and those that are on immunosuppressive therapy. In spite of being effective, sometimes it is necessary to use new drugs as alternatives or as adjuvants in order to potentiate the effect of the classical antifungal therapy. Statins are the most prescribed hypolipemiant drugs worldwide for preventing cardiovascular diseases. However, other benefic effects for these drugs have been described, such as the control of infections. This work aimed at determining the antifungal activity of statins against Candida spp. and Cryptococcus spp. The minimum inhibitory concentrations (MICs) for three different statins (pravastatin, simvastatin and atorvastatin) were determined against 51 strains of Candida spp. (16 C. albicans, 11 C.krusei, 12 C. tropicalis and 12 C. parapsilosis) and 25 strains of Cryptococcus spp. (12 C. gattii and 13 C. neoformans), through broth microdilution assay, according to the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI - Document M27-A3). The concentration tested for pravastatin ranged from 50 to 0.0977 mg/mL, for simvastatin, it ranged from 1 to 0.0020 mg/mL and, for atorvastatin, it varied from 10 to 0.0200 mg/mL. Pravastatin inhibited 37 Candida strains, with MICs varying from 1.56 to 6.25 mg/mL and the remaining strains were not inhibited, even at the highest concentration tested (50 mg/mL). Simvastatin and atorvastatin, on the other hand, inhibited all 51 Candida strains evaluated, presenting MICs ranging from 0.02 to 1 mg/mL and from 0.04 to 5 mg/mL, respectively. Concerning Cryptococcus spp., only four strains were inhibited by pravastatin (MIC=25 mg/mL), while all 25 strains were inhibited by simvastatin (0.06≤MIC≤1 mg/mL) and eight were inhibited by atorvastatin (0.62≤MIC≤2.5 mg/mL) and the remaining 17 were not susceptible to the highest atorvastatin concentration tested (10 mg/mL). The minimum fungicidal concentrations (MFCs) for the tested statins were also determined. The MFC for pravastatin against Candida spp. was determined against 15 strains (3.12≤MIC≤25 mg/mL). The MFC values for simvastatin were determined for 34 strains of Candida spp. (0.03≤MFC≤1 mg/mL), while those for atorvastatin were determined against 16 strains (0.04≤MFC≤0,31 mg/mL). Concerning Cryptococcus spp., the 25 strains tested, MFC values for pravastatin were found against three strains (MFC=50 mg/mL), while those for simvastatin were determined against 21 strains (0.12≤MFC≤1 mg/mL) and those for atorvastatin were determined against one single strain (MFC=1 mg/mL). This in vitro inhibitory activity of statins against Candida spp. and Cryptococcus spp. creates an important perspective for the use of these drugs in vivo in order to control fungal infections.

Orientadora : Profa. Dra. Vanete Thomaz Soccol / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia. Defesa: Curitiba, 30/01/2015 / Inclui referências : f.101-137 / Área de concentração: Saúde humana e animal / Resumo: A Doença de Chagas é uma enfermidade causada por Trypanosoma cruzi (CHAGAS, 1909) que afeta milhões de pessoas na América Latina. No diagnóstico da doença, testes sorológicos, detecção direta do parasito ou PCR convencional são usados como testes confirmatórios. Porém, estes métodos apresentam restrições quanto à sensibilidade e especificidade. Além disso, microepidemias associadas a alimentos vem demonstrando a importância crescente na via de transmissão oral, a partir do ciclo silvestre. Assim, padronizar metodologias com melhor sensibilidade e especificidade, para detectar o parasito em humanos e em alimentos é necessária. O objetivo desse trabalho foi padronizar a técnica de Real Time PCR para avaliar pacientes chagásicos crônicos e contatos, assim como detectar T. cruzi em alimentos, favorecendo a implantação dessa metodologia em laboratórios, bancos de sangue e como ferramenta no monitoramento do parasito em sangue e alimentos. Para tal, foram desenhados seis iniciadores (Ep1F/Ep1R, Ep2F/Ep2R, Bp1F/Bp1R, Bp2F/Bp2R, Bp3F/Bp3R e Bp4F/Bp4R) usando as sequências das cepas referência de T. cruzi y152 e Esmeraldo obtidas no genebank. Além destes, primers conhecidos e validados pela literatura foram também incluídos a título de comparação (TCZ1/TCZ2 e S35/S36). Para a otimização da técnica (concentração de primers e de DNA e CT de amplificação), foram usadas cepas de T. cruzi, T. rangeli e de Leishmania sp. Após a padronização a melhor especificidade analítica foi observada para o primer Bp1F/Bp1R (detectou apenas T. cruzi). O primer Ep1F/Ep1R permitiu detectar 0,0001 ng/?L do parasito e para TCZ1/TCZ2 a detecção mínima foi de 0,00001 ng/?L de DNA do parasito pela análise da curva padrão. Para validar a metodologia padronizada foram avaliadas 66 amostras de pacientes com doença de Chagas de regiões endêmicas (Paraná, São Paulo, Rio Grande do Sul), 11 amostras de indivíduos com relação de parentesco com os pacientes (contatos), e 30 indivíduos que não possuíam nenhum histórico ou diagnóstico para presença do parasito. Essas amostras foram submetidas à técnica de Real Time PCR aqui padronizada com os primers TCZ1/TCZ2 e Ep1F/Ep1R. A análise da curva ROC usando os primers TCZ1/TCZ2 mostrou uma sensibilidade de 79,2% e especificidade 69,8% (AUC = 69,2%). Para os primers Ep1F/Ep1R a sensibilidade foi 71,7% e especificidade 76,7% (AUC = 77,4%). O teste de McNemar demonstrou que ambos os iniciadores apresentaram maior discordância de resultados com a reação de imunofluorescência (RIFI) em pacientes chagásicos. Em indivíduos contatos o primer Ep1F/Ep1R apresentou maior discordância com a RIFI e ensaio imunoenzimático (ELISA). TCZ1/TCZ2 não apresentou discordância relevante. Ep1F/Ep1R demonstrou maior positividade (72,72%) para esse grupo. Portanto, o primer Ep1F/Ep1R assumiu melhor desempenho quanto à especificidade na determinação de T. cruzi em amostras de sangue que TCZ1/TCZ2. Em amostras de açaí, quando avaliado o açaí in natura (sem tratamento prévio) foi obtido 33% de sensibilidade para cepa de T. cruzi isolada de humanos (HC27) e 76% para a cepa isolada de Panstrongylus megistus (CUR98). Para amostras de açaí autoclavada verificou-se 71% de resultados positivos para ambas as cepas referidas acima. Além disso, em amostras contaminadas artificialmente com T. cruzi (cepa HC27) o limite de detecção foi de 0,75 parasito (p)/mL e com a cepa CUR98 a detecção mínima foi de 0,000019 p/mL. Dentre os primers desenhados Ep1F/Ep1R apresentou bons resultados na determinação de T. cruzi em sangue e açaí, o que encoraja a utilização da técnica de Real Time PCR para o monitoramento de amostras de açaí. Palavras-chave: Trypanosoma cruzi. Real Time PCR. Sangue. Açaí. Primers. Sensibilidade. Especificidade. / Abstract: Chagas disease is caused by Trypanosoma cruzi CHAGAS, 1909, and affects millions of people in Latin America. Diagnostic tests to confirm the disease include indirect tests (antibody in serum), direct detection of the parasite in blood and conventional PCR (DNA detection). However, these methods have limitations because the serological tests detect antibodies and not the parasite, or have low sensitivity (e.g., the parasite is in the internal organs or the chronic phase). In addition, microepidemics associated with foods have shifted the emphasis to the oral route of transmission during the silvatic cycle. Therefore, standardized methodologies with improved sensitivity and specificity are needed to detect the parasite in blood and foods. The aim of this study was to standardize the real-time PCR technique for assessing chronic Chagas patients and contacted individuals, as well as for detecting T. cruzi in foods. To accomplish these objectives, six primers were improved (Ep1F/Ep1R, Ep2F/Ep2R, Bp1F/Bp1R, Bp2F/Bp2R, Bp3F/Bp3R and Bp4F/Bp4R) using the sequences of references strains (T. cruzi y152 and Emerald) obtained from GenBank. Known primers validated in the literature were also included (TCZ1/TCZ2 and S35/S36). Trypanosoma cruzi, T. rangeli and Leishmania sp. strains were employed for optimization (concentration of primers, DNA and CT amplification). The best analytical specificity was observed for the Bp1F/Bp1R primer. The Ep1F/Ep1R primer had minimum detection of 0.0001 ng/?L, while TCZ1/TCZ2 had minimum detection of 0.00001 ng/?L of DNA from the parasite, based on an analysis of the standard curve. To validate the standardized methodology, 66 samples from chronic patients in endemic regions (Paraná, São Paulo and Rio Grande do Sul) were assessed, along with 11 samples from patients' relatives (contacts) and 30 individuals with no history or diagnosis for the presence of the parasite. The samples were submitted to the standardized real-time PCR technique with the TCZ1/TCZ2 and Ep1F/Ep1R primers. On analysis of the ROC curve, Ep1F/Ep1R had 71.7% sensitivity and 76.7% specificity (AUC = 77.4%), while TCZ1/TCZ2 exhibited 79.2% sensitivity and 69.8% specificity (AUC = 69.2%). McNemar's test showed that both primers had greater discordance in their results with the immunofluorescence reaction (IFR) in Chagas patients. Ep1F/Ep1R performed better than the TCZ1/TCZ2 primer, in terms of specificity for the determination of T. cruzi in blood samples. In açaí samples, an assessment of açai in natura (without previous treatment) revealed 33% sensitivity for the T. cruzi when HC27 strain isolated from humans was used and 76% for the CUR98 strain isolated from Panstrongylus megistus. In autoclaved açai samples, 71% positivity was detected for both strains. In addition, for artificially samples infected with HC27 strain, the limit of detection was 0.75 parasites (p)/mL, whereas the minimum detection for the CUR98 strain was 0.000019 p/mL. Ep1F/Ep1R showed good results in determining T. cruzi in blood and açai, favoring the use of the real-time PCR technique for screening blood and açai samples. Key-words: Trypanosoma cruzi. Real Time PCR. Blood. Açaí. Primers. Sensitivity. Specificity.