FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / A ordem Chiroptera mostra-se como reservatÃrio para vÃrios agentes infecciosos, incluindo protozoÃrios, bactÃrias, vÃrus e fungos. A fim de investigar a a eco-epidemiologia de Histoplasma capsulatum no Nordeste do Brasil, foram capturados 83 morcegos em Ãreas urbanas e rurais no estado do CearÃ, em coletas diurnas e noturnas, durante o perÃodo de agosto de 2010 a marÃo de 2011. ApÃs eutanÃsia, fragmentos de baÃo, fÃgado e pulmÃo foram removidos, macerados e alÃquotas de 100μL foram semeadas em placas contendo Ãgar BHI modificado, as quais foram incubadas por atà seis semanas nas temperaturas de 28ÂC e 35ÂC. AlÃquotas remanescentes de cada material macerado foram estocadas a -20ÂC. Embora o fungo nÃo tenha sido isolado em nenhuma amostra, apÃs 21 dias de incubaÃÃo à 35ÂC foi observado o crescimento de uma colÃnia fÃngica sugestiva de Coccidioides spp. em amostra de pulmÃo da espÃcie Carollia perspicillata. Fragmentos de pulmÃo do morcego retirados do estoque a -20ÂC e analisados ao microscÃpio Ãptico revelaram estruturas esfÃricas semelhantes a forma parasitÃria do fungo. A colÃnia foi investigada por meio do teste de reversÃo in vivo em modelo murino, com observaÃÃo dos animais inoculados por atà quatro semanas. A identificaÃÃo molecular das culturas foi realizada por reaÃÃo de PCR especÃfica para C. posadasii, empregando os oligonucleotÃdeos Coi9-R e Coi9-F. Por fim, amostras de macerados dos pulmÃes, baÃo e fÃgado foram investigadas quanto à presenÃa de anticorpos ou antÃgenos especÃficos para C. posadasii, bem como quanto à presenÃa de anticorpos anti-Histoplasma, por meio da tÃcnica de imunodifusÃo. EsfÃrulas caracterÃsticas de Coccidioides spp. foram visualizadas em amostras de pulmÃo dos camundongos infectados experimentalmente. AnÃlise molecular das culturas isoladas de pulmÃo de C. perspicillata, bem como dos ÃrgÃos dos camundongos, mostraram banda de aproximadamente 630 pb, caracterÃstica de C. posadasii. Por meio de reaÃÃo de imunodifusÃo, foram detectados dois animais reagentes para antÃgenos de Coccidioides. Os animais pertenciam Ãs espÃcies Glossophaga soricina e Desmodus rotundus e um animal da espÃcie G. soricina anticorpo-positivo para Coccidioides. NÃo foi observada presenÃa de anticorpos anti-Histoplasma em nenhuma das amostras. O presente estudo mostra o primeiro isolamento de C. posadasii em quirÃpteros. Adicionalmente, de forma inÃdita, detectou-se de antÃgenos e anticorpos especÃficos para C. posadasii nestes animais. Faz-se necessÃrio o estudo dos quirÃpteros na ecoepidemiologia do patÃgeno. / The order Chiroptera is shown as a reservoir for various infectious agents, including protozoan, bacteria, virus and fungi. To investigate the eco-epidemiological aspects of Histoplasma capsulatum in Northeast Brazil, 83 bats were captured in urban and rural areas in CearÃ, collected in day and night, during the period August 2010 to March 2011. After euthanasia, fragments of sleen, liver and lung were removed, macerated and 100 μL aliquots were plated on agar containing modified BHI, which were incubated for up to six weeks at temperatures of 28 ÂC and 35 ÂC. Aliquots of each remaing macerated material stored at -20 ÂC. Although the fungus was not isolated in any samples, after 21 days at 35 ÂC was observed the growth of a fungal colony suggestive of Coccidioides spp. in lung samples of the species Carollia perspicillata. Fragments of the bet lung removed from storage at -20 ÂC and analyzed by optical microscopy revealed spherical structures similar to the shape of the parasitic fungus. The colonies were investigated by means of the reversion in vivo in a murine model, with observation of the animals incoculated up to four weeks. The molecular identification of cultures was performed by PCR specific for C. posadasii, using the oligonucleotides Coi9-R and Coi9-F. Finally, samples of macerated lung, spleen and liver were investigated for the presence of antibodies or antigens specific for C. posadasii, as well as the presence of anti-Histoplasma, by immunodiffusion. Spherules of Coccidioides spp. features were visualized in lung samples of mice experimentally infected. Molecular analysis of cultures isolated from lungs of C. perpicillata, as well as organs of mice, showed approximately 630 pb band, characteristic of C. posadasii. By immunodiffusion reaction, two animals were detected reagents for Coccidioides antigens. The animals belonged to the species Glossophaga soricina and Desmodus rotundus and an animal of the species G. soricina antibody-positive for Coccidioides. There was no presence of anti-Histoplasma is any sample. The present study shows the first isolation of C. posadasii in bats. Additionally, in an unprecedented manner, we detected antigens and antibodies specific to C. posadasii these animals. Its is necessary to the study of bats in ecoepidemiology the pathogen.

Estudos demonstram que os hospitais sÃo locais propÃcios para a instalaÃÃo e proliferaÃÃo de determinados insetos. Essa situaÃÃo à particularmente preocupante, pois alguns insetos, como as formigas, apresentam o potencial de carrear microrganismos em sua superfÃcie. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade das espÃcies de formigas presentes em dois hospitais terciÃrios do MunicÃpio de Fortaleza, Cearà de carrear espÃcies fÃngicas, buscando uma correlaÃÃo com a microbiota fÃngica do ar. No perÃodo entre marÃo de 2007 a fevereiro de 2008, 2.899 formigas foram capturadas nos dois hospitais. A fauna de formigas foi amostrada mensalmente, em dois turnos, por meio da disposiÃÃo de iscas atrativas nÃo tÃxicas. Concomitantemente à coleta das formigas, por meio da sedimentaÃÃo passiva em placas de Petri, contendo Ãgar Sabouraud 2% de dextrose, foi possÃvel isolar e identificar fungos presentes no ar dos ambientes hospitalares. Para a identificaÃÃo entomolÃgica, uma amostra das formigas capturadas em cada isca foi enviada ao LaboratÃrio de Entomologia da Universidade Estadual do CearÃ, sendo classificadas por critÃrios morfolÃgicos. Simultaneamente, outra amostra das formigas capturadas de cada isca foi encaminhada ao Centro Especializado em Micologia MÃdica. A identificaÃÃo micolÃgica foi realizada mediante cultivo em meios de cultura, que eram semeados e incubados a 26 â 28ÂC por atà 15 dias, sendo identificados por anÃlise macro e micromorfologica, perfil bioquÃmico e utilizaÃÃo de meio cromogÃnico. Foram identificados cinco gÃneros e 13 espÃcies de formigas, presentes em Ãreas crÃticas (8% das formigas coletadas) e semicrÃticas (92%) e nos perÃodos diurno (48% das formigas coletadas) e noturno (52%). Na anÃlise micolÃgica, observou-se que 75% das formigas carreavam fungos, sendo a espÃcie Tapinoma melanocephalum e as espÃcies do gÃnero Pheidole as com maior potencial carreador de fungos anemÃfilos (75% e 18%, respectivamente) e de leveduras (6% e 1%, respectivamente). Dentre os fungos anemÃfilos, os gÃneros Aspergillus (46%), Penicillium (18,5%) e Cladosporium (7%) foram os mais comuns na superfÃcie externa das formigas. Com relaÃÃo ao grupo de leveduras, destacou-se o gÃnero Candida (70% dos isolados). Ao comparar os dados referentes Ãs cepas fÃngicas encontradas no ar com as cepas fÃngicas encontradas na superfÃcie externa das formigas, nÃo se estabeleceu qualquer tipo de correlaÃÃo estatÃstica, embora os gÃneros fÃngicos encontrados na microbiota fÃngica do ar e na microbiota fÃngica das formigas sejam semelhantes. Em suma, as formigas atuam como carreadoras de fungos anemÃfilos e leveduras, incluindo algumas espÃcies patogÃnicas, sendo a vigilÃncia entomolÃgica e o monitoramento sistematizado do ar, de grande importÃncia para a saÃde hospitalar. / Estudos demonstram que os hospitais sÃo locais propÃcios para a instalaÃÃo e proliferaÃÃo de determinados insetos. Essa situaÃÃo à particularmente preocupante, pois alguns insetos, como as formigas, apresentam o potencial de carrear microrganismos em sua superfÃcie. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade das espÃcies de formigas presentes em dois hospitais terciÃrios do MunicÃpio de Fortaleza, Cearà de carrear espÃcies fÃngicas, buscando uma correlaÃÃo com a microbiota fÃngica do ar. No perÃodo entre marÃo de 2007 a fevereiro de 2008, 2.899 formigas foram capturadas nos dois hospitais. A fauna de formigas foi amostrada mensalmente, em dois turnos, por meio da disposiÃÃo de iscas atrativas nÃo tÃxicas. Concomitantemente à coleta das formigas, por meio da sedimentaÃÃo passiva em placas de Petri, contendo Ãgar Sabouraud 2% de dextrose, foi possÃvel isolar e identificar fungos presentes no ar dos ambientes hospitalares. Para a identificaÃÃo entomolÃgica, uma amostra das formigas capturadas em cada isca foi enviada ao LaboratÃrio de Entomologia da Universidade Estadual do CearÃ, sendo classificadas por critÃrios morfolÃgicos. Simultaneamente, outra amostra das formigas capturadas de cada isca foi encaminhada ao Centro Especializado em Micologia MÃdica. A identificaÃÃo micolÃgica foi realizada mediante cultivo em meios de cultura, que eram semeados e incubados a 26 â 28ÂC por atà 15 dias, sendo identificados por anÃlise macro e micromorfologica, perfil bioquÃmico e utilizaÃÃo de meio cromogÃnico. Foram identificados cinco gÃneros e 13 espÃcies de formigas, presentes em Ãreas crÃticas (8% das formigas coletadas) e semicrÃticas (92%) e nos perÃodos diurno (48% das formigas coletadas) e noturno (52%). Na anÃlise micolÃgica, observou-se que 75% das formigas carreavam fungos, sendo a espÃcie Tapinoma melanocephalum e as espÃcies do gÃnero Pheidole as com maior potencial carreador de fungos anemÃfilos (75% e 18%, respectivamente) e de leveduras (6% e 1%, respectivamente). Dentre os fungos anemÃfilos, os gÃneros Aspergillus (46%), Penicillium (18,5%) e Cladosporium (7%) foram os mais comuns na superfÃcie externa das formigas. Com relaÃÃo ao grupo de leveduras, destacou-se o gÃnero Candida (70% dos isolados). Ao comparar os dados referentes Ãs cepas fÃngicas encontradas no ar com as cepas fÃngicas encontradas na superfÃcie externa das formigas, nÃo se estabeleceu qualquer tipo de correlaÃÃo estatÃstica, embora os gÃneros fÃngicos encontrados na microbiota fÃngica do ar e na microbiota fÃngica das formigas sejam semelhantes. Em suma, as formigas atuam como carreadoras de fungos anemÃfilos e leveduras, incluindo algumas espÃcies patogÃnicas, sendo a vigilÃncia entomolÃgica e o monitoramento sistematizado do ar, de grande importÃncia para a saÃde hospitalar. / Studies show that hospitals are propitious sites for the establishment and proliferation of certain insects. This situation is of particular concern because some insects, such as ants, can carry microorganisms on their body surfaces. The aim of this study was evaluate capacity to the ant species present in two tertiary public hospitals in the city of Fortaleza, CearÃ, to carry fungi and to establish a correlation with the airborne fungal microbiota. From March 2007 to February 2008, 2,899 ants were evaluated at two hospitals. The ant communities were sampled monthly, during two periods (day and night), by setting out nontoxic baited traps. Along with collection of the ants, the fungi present in the air of the hospital environments were isolated and identified through the passive sedimentation method in Petri dishes containing Sabouraud dextrose agar. To identify the ant species, a sample from each trap was sent to the Entomology Laboratory of State University of CearÃ, where the ants captured were classified by morphological criteria. Another sample of the captured ants from each trap was sent to the Specialized Medical Mycology Center of the same university. The mycological identification was done by growth in culture media, seeded and incubated at 26-28ÂC for up to 15 days, with identification through macro and micromorphological analysis, biochemical profiling and growth in chromogenic medium. From this study, five genera and thirteen species of ants were identified, from the hospitalsâ critical areas (8% of the collected ants) and semi-critical areas (92%), during the daytime (48%) and nighttime (52%) periods. In the mycological analysis, 75% of the ants were fungi carriers, with Tapinoma melanocephalum and species from the genus Pheidole having the most potential as carriers of airborne fungi (75% and 18%, respectively) and yeasts (6% and 1%, respectively). Among the airborne fungi identified, those belonging to the Aspergillus (46%), Penicillium (18.5%) and Cladosporium (7%) genera were most common on the antsâ body surfaces. The predominant yeasts belonged to the Candida genus (70% of those isolated). Comparison of the fungal strains found in the air with those found on the ants did not establish any statistic correlation between the two fungal microbiotas. In summary, ants act as potential vectors of airborne fungi and yeasts, including some pathogenic species. Therefore, vigilance against insects and systematic air monitoring are important measures to ensure the healthfulness of hospital environments. / Studies show that hospitals are propitious sites for the establishment and proliferation of certain insects. This situation is of particular concern because some insects, such as ants, can carry microorganisms on their body surfaces. The aim of this study was evaluate capacity to the ant species present in two tertiary public hospitals in the city of Fortaleza, CearÃ, to carry fungi and to establish a correlation with the airborne fungal microbiota. From March 2007 to February 2008, 2,899 ants were evaluated at two hospitals. The ant communities were sampled monthly, during two periods (day and night), by setting out nontoxic baited traps. Along with collection of the ants, the fungi present in the air of the hospital environments were isolated and identified through the passive sedimentation method in Petri dishes containing Sabouraud dextrose agar. To identify the ant species, a sample from each trap was sent to the Entomology Laboratory of State University of CearÃ, where the ants captured were classified by morphological criteria. Another sample of the captured ants from each trap was sent to the Specialized Medical Mycology Center of the same university. The mycological identification was done by growth in culture media, seeded and incubated at 26-28ÂC for up to 15 days, with identification through macro and micromorphological analysis, biochemical profiling and growth in chromogenic medium. From this study, five genera and thirteen species of ants were identified, from the hospitalsâ critical areas (8% of the collected ants) and semi-critical areas (92%), during the daytime (48%) and nighttime (52%) periods. In the mycological analysis, 75% of the ants were fungi carriers, with Tapinoma melanocephalum and species from the genus Pheidole having the most potential as carriers of airborne fungi (75% and 18%, respectively) and yeasts (6% and 1%, respectively). Among the airborne fungi identified, those belonging to the Aspergillus (46%), Penicillium (18.5%) and Cladosporium (7%) genera were most common on the antsâ body surfaces. The predominant yeasts belonged to the Candida genus (70% of those isolated). Comparison of the fungal strains found in the air with those found on the ants did not establish any statistic correlation between the two fungal microbiotas. In summary, ants act as potential vectors of airborne fungi and yeasts, including some pathogenic species. Therefore, vigilance against insects and systematic air monitoring are important measures to ensure the healthfulness of hospital environments.

As proteínas ligadoras de ácidos graxos (Fatty Acid Binding Proteins, FABPs) de parasitos têm um papel importante no processo de infecção por estes organismos. Por este motivo, estas proteínas são antígenos candidatos para vacina contra a infecção por Schistosoma mansoni e Fasciola hepatica. No presente trabalho foram caracterizadas FABPs de F. hepatica e comparadas com a proteína Sm14 de S. mansoni, a FABP de parasito melhor caracterizada, mediante análise de sequências e estruturas modeladas. Também foram clonadas, expressas e purificadas as FABPs tipo 1 e tipo 3 de F. hepatica. Os resultados do presente estudo indicam que a FABP tipo 3 de F. hepatica é relacionada estrutural, imunológica e funcionalmente com a Sm14, um candidato vacinal amplamente estudado. Devido à importância da Sm14 como alvo para o desenvolvimento de vacina para a esquistossomose, as características apresentadas pela FhFABP3 de F. hepatica apontam esta proteína como um candidato importante também para o desenvolvimento de uma vacina contra a fasciolose / Parasites fatty acid binding proteins (FABPs) have an important role in infection process by these organisms. For this reason, these proteins are candidates as vaccine antigens against Schistosoma mansoni and Fasciola hepatica infection. In the present study, FABPs from F. hepatica were characterized and compared with Sm14 protein from S. mansoni, the best characterized parasite FABP, by sequence analysis and modeled structure. Type 1 and type 3 FABPs from F. hepatica were also cloned, expressed and purified. The results of this study indicated that type 3 FABP from F. hepatica is structural, immunological and functionally related with Sm14, a vaccine candidate widely studied. Due to the importance of Sm14 as a target for vaccine development for schistosomiasis, the characteristics presented by the FhFABP3 from F. hepatica suggest this protein as a candidate also important for the development of a vaccine against fasciolosis

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Streptococcus pneumoniae é um importante agente etiológico de infecções invasivas e não invasivas, incluindo meningite, pneumonia e otite média. A cápsula polissacarídica é o principal fator de virulência desse microrganismo, sendo também considerada um importante marcador em estudos epidemiológicos. Dentre os mais de 90 tipos capsulares conhecidos, o sorotipo 14 se destaca pela prevalência elevada em várias regiões, inclusive no Brasil. A avaliação da diversidade genética desse microrganismo também inclui a aplicação de métodos moleculares, como PFGE e MLST. Entretanto, essas metodologias são relativamente onerosas, consomem muito tempo e os resultados obtidos com a técnica de PFGE são de difícil comparação entre diferentes laboratórios. A técnica de análise do polimorfismo numérico de segmentos repetitivos em múltiplos loci [MLVA, do inglês Multiple Loci VTNR (Variable-Number Tandem Repeat) Analysis] se apresenta como uma alternativa, embora ainda necessite de padronização e avaliação mais ampla para a espécie em questão. No presente estudo, 60 amostras de Streptococcus pneumoniae pertencentes ao sorotipo 14, isoladas de diversas fontes clínicas, em diferentes locais e períodos de tempo, foram caracterizadas pelas técnicas de MLVA (baseada na análise de 18 loci distintos), MLST, PFGE e tipagem do gene pspA. O gene pspA2 predominou entre as amostras analisadas, seguido pelo gene pspA1. Os tipos de MLVA, perfis de PFGE, e STs encontrados apresentaram resultados, em geral, concordantes, indicando o elevado poder discriminatório da versão da técnica de MLVA empregada. Cinco complexos clonais (CC) de MLVA e cinco singletons puderam ser definidos. O CC de MLVA denominado de L7 foi o predominante, compreendendo 36,7% da amostragem estudada. O CC L7 mostrou-se relacionado com genes pspA da família 2, com o CC1 de MLST, com o CC Pen14-H de PFGE, e com a não susceptibilidade à penicilina, Entre os complexos clonais de MLST, o CC1 foi o prevalente e incluiu predominantemente o ST156, pertencente ao clone internacional Spain9V-3. O CC L3 e o singleton L17 de MLVA apresentaram-se associados ao CC de PFGE Eri14-A, a família 1 de PspA e ao CC2 de MLST, que por sua vez também estava relacionado com o clone internacional England14-9. O CC L15 de MLVA esteve associado ao CC de PFGE Pen14-A, ao gene pspA2, aos CC3 e CC4 de MLST e ao clone internacional do PMEN Tennessee14-18. A técnica de MLVA revelou-se significativamente mais discriminatória que as técnicas de PFGE e MLST, conforme exemplificado pela detecção de 21 perfis de MLVA, 13 perfis de PFGE e cinco STs, entre as 22 amostras pertencentes ao CC de MLVA L7. Uma versão de MLVA, compreendendo um painel com os oito loci de maior poder discriminatório, pôde ser proposta a partir da análise dos resultados obtidos. Estes aspectos, aliados ao menor tempo e custo de execução, indicam que a técnica de MLVA constitui uma alternativa importante e satisfatória para uso em estudos sobre a diversidade genética de S. pneumoniae. / Streptococcus pneumoniae is a major pathogen causing invasive and non-invasive diseases in humans, including meningitis, pneumonia and otitis media. The polysaccharide capsule of this microorganism is considered a major virulence factor and an important marker for epidemiological studies. More than 90 pneumococcal capsular serotypes are recognized, and serotype 14 is highly prevalent in many regions, including Brazil. Genotyping methods, such as PFGE and MLST, are essential to evaluate genetic diversity of this bacterium. However, these methods are expensive, time-consuming and results from different laboratories are difficult to compare. Multiple Loci VTNR (Variable-Number Tandem Repeat) Analysis (MLVA) appears as an alternative, despite the fact that standardization and wide evaluation for application to this species is still required. In the present study, a total of 60 S. pneumoniae isolates belonging to serotype 14, isolated from different sources, regions and periods of time, were analyzed by MLVA (based on the analysis of 18 distinct loci), MLST, PFGE and pspA typing methods. Gene pspA2 was the predominant, followed by pspA1. Overall, the results of PFGE, MLST and MLVA typing were congruent, and indicated the discriminatory power of the MLVA method used. Five clonal complexes (CC) and five singletons were identified by MLVA. CC L7 was the predominant MLVA CC, comprising 36.7% of all the isolates. L7 was associated with pspA2 gene and non-susceptibility to penicillin, and it was related to MLST CC1, and to PFGE Pen14-H. CC1 was the prevalent MLST CC and included mostly ST156 that belongs to international clone (IC) Spain9V-3. Another MLVA CC, named L3, and the singleton L17 were related to PFGE CC Eri14-A, MLST CC2, and IC England14-9. MLVA CC L15 was related to PFGE Pen14-A, MLST CC3 and CC4, and IC Tennessee14-18. MLVA was found to be more discriminatory than PFGE and MLST, as exemplified by detection of 21 MLVA types, 13 PFGE profiles and 5 STs among the 22 strains belonging to L7, the predominant MLVA CC. A modified version of the MLVA method, based on the analysis of 8 loci only, is proposed. This aspect, in conjunction with reducing time and costs, indicate that MLVA represents an important and satisfactory alternative method to evaluate the genetic diversity of S. pneumoniae.

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Methods: the in vitro susceptibility of the yeast to the compound punicalagin was verified using the broth microdilution method. The possible mechanism of action was verified by different methods such as: ergosterol assay of the fungal cell membrane, by morphological and ultrastructural analyzes of the yeasts, by flow cytometry (cell cycle, cytoplasmic membrane injury, reactive oxygen species production and loss of the mitochondrial membrane potential). The in vitro cytotoxicity of punicalagin was verified using Balb/c 3T3 cells, A549 lung carcinoma cells and sheep erythrocytes. Results: the punicalagin was able to inhibit yeast growth at concentrations ≤4 μg/mL with minimum fungicidal concentration (CFM) of >256 μg/mL. The punicalagin reduced the ergosterol synthesis of the fungal cell membrane and promoted alterations in the morphology and the cellular arrangement of the yeasts. The action mechanism analyzed by flow cytometry showed alteration of the cell cycle with increase of the G0/G1 phases and reduction of the G2/M phases, interfering in the cellular division of the DNA of the fungal cells. The compound showed low toxicity on the Balb/c cells 3T3, A549 and sheep erythrocytes. Conclusion: the results presented by punicalagin showed that this compound presents low cytotoxicity to the animal cells, with important antifungal activity against the yeasts of the Cryptococcus neoformans species complex and Candida species. / Introdução: a elevada incidência e taxa de mortalidade por infecções fúngicas despertam o interesse pela busca por fármacos mais eficazes e menos tóxicos para o tratamento dessas infecções. Plantas medicinais representam uma promissora fonte de descoberta de agentes antifúngicos. Dentre as plantas medicinais, a Lafoensia pacari A. St.-Hil (Lythraceae), planta do cerrado, destaca-se por apresentar propriedades medicinais conhecidas popularmente no Brasil. A punicalagina, um metabólito secundário extraído da folha da L. pacari, apresenta comprovadas atividades biológicas. Objetivo: neste trabalho foi avaliada a atividade biológica de punicalagina sobre leveduras pertencentes ao complexo Cryptococcus neoformans e espécies de Candida. Métodos: a suscetibilidade in vitro das leveduras ao composto punicalagina, foi verificada usando-se o método de microdiluição em caldo. O possível mecanismo de ação foi verificado por diferentes métodos como: doseamento de ergosterol da membrana da célula fúngica, por análises morfológicas e ultraestruturais das leveduras, por citometria de fluxo (ciclo celular, lesão da membrana citoplasmática, produção de espécies reativas de oxigênio e perda do potencial da membrana mitocondrial). A citotoxicidade in vitro de punicalagina foi verificada utilizando-se células Balb/c 3T3, células de carcinoma pulmonar A549 e eritrócitos de carneiro. Resultados: a punicalagina foi capaz de inibir o crescimento das leveduras em concentrações ≤ 4 µg/mL com concentração fungicida mínima (CFM) de > 256 µg/mL. A punicalagina reduziu a síntese de ergosterol da membrana celular fúngica e promoveu alterações na morfologia e no arranjo celular das leveduras. O mecanismo de ação analisado por citometria de fluxo mostrou alteração do ciclo celular com aumento das fases G0/G1 e redução das fases G2/M, interferindo na divisão celular do DNA das células fúngicas. O composto mostrou baixa toxicidade sobre as células Balb/c 3T3, A549 e eritrócitos de carneiro. Conclusão: os resultados apresentados pela ação da punicalagina mostraram que este composto apresenta baixa citotoxicidade para as células animais, com importante atividade antifúngica para as leveduras do complexo Cryptococcus neoformans e Candida.

vÃrus sincicial respiratÃrio humano (VSRh) à o agente viral mais freqÃentemente relacionado a infecÃÃes do trato respiratÃrio inferior em crianÃas menores de dois anos de idade. O VSRh à caracterizado antigenicamente em dois grupos: A e B, e cada grupo apresenta vÃrios subgrupos. A glicoproteÃna G à a principal responsÃvel pela a variaÃÃo antigÃnica inter e intragrupos desse vÃrus. Os objetivos desse estudo foram caracterizar os perÃodos epidÃmicos e a diversidade antigÃnica e genÃmica dos VSRh circulantes em Fortaleza, Cearà â Brasil, durante cinco perÃodos epidÃmicos consecutivos (2004-2008). A imunofluorescÃncia indireta (IFI) foi utilizada para a triagem de VSRh e de todos os vÃrus analisados e para a caracterizaÃÃo antigÃnica dos VSRh. A RT-nested-PCR seguida do seqÃenciamento parcial do gene G foi utilizada para a caracterizaÃÃo gÃnomica dos VSRh. O VSRh foi detectado em 456 das 2885 (15.8%) amostras. O pico dos perÃodos epidÃmicos de VSRh ocorreu nos meses de marÃo a maio relacionado à ocorrÃncia de chuvas. Um total de 282 VSRh (62,8%) foram caracterizados antigenicamente por IFI, sendo 170 VSRhA (60,3%) e 112 VSRhB (39,7%). Ambos os grupos circularam durante todo o perÃodo analisado sendo observado o predomÃnio de A em todos os anos. Um total de 250 VSRh (54,8%) foi submetido à RT-nested-PCR com amplificaÃÃo de 133 e seqÃenciamento de 86. A caracterizaÃÃo genÃmica dos VSRh identificou os subgrupos GA2 e GA5 para o VSRhA e os subgrupos GB3 e BA para o VSRhB. Esses quatro subgrupos co-circularam durante o ano de 2006. Nos anos de 2004, 2005 e 2007 verificou-se a presenÃa dos dois subgrupos de VSRhA. Em 2008 somente o GA2 circulou. Em 2004, 2007 e 2008 somente o subgrupo BA esteve presente. Em 2005 somente o GB3 circulou. Os VSRhA apresentaram uma maior variabilidade nas seqÃÃncias nucleotÃdicas, indicando uma possÃvel pressÃo seletiva positiva. Houve variaÃÃes no Ãnicio, fim e duraÃÃo de cada perÃodo epidÃmico de VSRh, assim como na circulaÃÃo de grupos e subgrupos. / The human respiratory syncytial virus (HRSV) is the major agent of lower respiratory tract in children under two years old. HRSV is characterized antigenically into two groups: A and B, and each group has several subgroups. Glycoprotein G is primarily responsible for the antigenic variation between and within groups of viruses. The aims of this study were to characterize the epidemic periods and the antigenic and genomic diversity of circulating HRSV in Fortaleza, Cearà - Brazil, for five consecutive epidemic periods (2004-2008). The screening of positive samples to HRSV and other viruses analyzed, as the antigenic characterization of HRSV was carried out by indirect immunofluorescence. RT-nested-PCR followed by partial sequencing of the gene G was used for genomic characterization of HRSV. The HRSV was detected in 456 of 2885 samples (15.8%). The peak of the epidemic periods of HRSV occurred from March to May related to rainfall. A total of 282 HRSV (62.8%) were characterized antigenically, with 170 HRSVA (60.3%) and 112 HRSVB (39.7%). Both groups circulated throughout the period analyzed with a predominance of HRSVA in all years of study. A total of 250 HRSV (54.8%) were submitted to RT-nested-PCR with amplification of 133 and sequencing of 86. The genomic characterization of HRSV identified subgroups GA2 and GA5 for HRSVA and subgroups GB3 and BA for HRSVB. In the years 2004, 2005 and 2007 both subgroups of HRSVA circulated. In 2008 only GA2 circulated. In 2004, 2007 and 2008 only the subgroup BA was present. In 2005 only the GB3 circulated. The HRSV A showed a higher variability in nucleotide sequences, indicating a possible positive selective pressure. There were variations in the beginning, end and duration of each epidemic period of HRSV, as well as in the occurrence of groups and subgroups.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os adenovÃrus (Ad) sÃo agentes importantes de infecÃÃes respiratÃrias agudas (IRAs) em crianÃas, especialmente entre seis meses e cinco anos de idade. Este foi um estudo retrospectivo que teve como objetivos: estabelecer o perfil epidemiolÃgico e clÃnico das infecÃÃes respiratÃrias agudas causadas por Ad em crianÃas atendidas no Hospital Infantil Albert Sabin, na cidade de Fortaleza, no perÃodo de janeiro de 2001 a dezembro de 2006; observar a freqÃÃncia de detecÃÃo de Ad em casos de IRAs em crianÃas atendidas nesse hospital; descrever as principais caracterÃsticas clÃnicas das infecÃÃes respiratÃrias causadas por Ad; pesquisar a existÃncia de padrÃo de sazonalidade do Ad na cidade de Fortaleza; determinar a taxa de isolamento do Ad em cultura de cÃlulas HEp-2 inoculadas com amostras de secreÃÃes de nasofaringe (SNF) consideradas positivas para Ad por imunofluorescÃncia indireta (IFI); e criar um banco de cepas de Ad para futuros estudos sobre diversidade antigÃnica e genÃmica desses agentes. Foram coletadas nesse perÃodo, amostras de SNF de 3070 crianÃas com atà sete dias de sintomas de IRA. Todas as amostras foram submetidas a IFI e, dessas, 54 se mostraram positivas para Ad. Quarenta e uma dessas amostras positivas foram inoculadas em monocamadas de cÃlulas HEp-2, obtendo-se isolamento viral em 32 delas. Outras 103 amostras negativas por IFI, escolhidas aleatoriamente, foram inoculadas, resultando em trÃs isolamentos adicionais, totalizando 57 casos confirmados de infecÃÃo por Ad. A freqÃÃncia de detecÃÃo de Ad foi de 1,86% em relaÃÃo ao total de casos de IRAs e 6,1% das IRAs virais. NÃo foi observado um padrÃo de sazonalidade nem correlaÃÃo com perÃodo chuvoso ou seco. A maior parte das IRAs por Ad ocorreu em crianÃas na faixa etÃria entre sete e 24 meses com 63,15% dos casos. As IRAs por Ad foram observadas principalmente em crianÃas atendidas em ambulatÃrios (50,88%), e o diagnÃstico predominante foi a infecÃÃo de vias aÃreas superiores (70,18%). Os principais sintomas e sinais apresentados pelos pacientes com IRA por Ad foram febre, tosse, coriza, anorexia, vÃmitos e/ou diarrÃia, obstruÃÃo nasal e dispnÃia. A principal conduta terapÃutica aplicada em casos de IRAs por Ad foi o uso de aerossol / salbutamol (42,11%) / Adenoviruses (Ad) are important etiological agents of acute respiratory infections (ARI) in children, particularly between six months and five years old. This was a retrospective study, whose objectives were: to perform clinical and epidemiologic profile of adenoviral respiratory infections in children attended in Hospital Infantil Albert Sabin, in the city of Fortaleza, from January 2001 to December 2006; to observe the detection frequency of Ad in cases of ARI in children attended in that hospital; to describe the main clinical features of adenoviral respiratory infections; to search for the existence of a seasonal pattern of adenoviral infections in the city of Fortaleza; to determine the isolation rate of Ad in HEp-2 cell lines inoculated with samples of nasopharyngeal secretions (NPS) considered positive to Ad by indirect immunofluorescence (IIF); and to create a collection of Ad strains for future studies on antigenic and genomic diversity of these agents. NPS samples of 3,070 children with ARI up to seven days of the onset of symptoms were collected. IIF was applied to all of the samples, and among them, 54 were positive to Ad. Forty one of those positive samples were inoculated into HEp-2 cells, resulting in 32 viral isolations. Other 103 randomly choosen negative samples were also inoculated, resulting in more three isolations, reaching the number of 57 confirmed cases of Ad infections. The detection frequency of Ad was 1.86% of total number of cases of ARI and 6.1% of cases of viral ARI. It was not observed any seasonal pattern or correlation to rainy or dry season. Most cases of adenoviral ARI occurred in children aged seven to 24 months, representing 63.15% of cases. Ad ARI was observed mainly in children attended in the out-patient facility (50.88%), and the predominant diagnosis was upper respiratory tract infection (70.18%). The main clinical features in Ad patients were fever, cough, rhinorrhea, anorexia, vomiting or diarrhea, nasal obstruction, and dyspnea. The main therapeutic management for Ad patients was use of nebulization (about 42% of patients)

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-25T11:52:50Z No. of bitstreams: 2 Cavalcanti, Veraluce Paolini.pdf: 2676822 bytes, checksum: 6bad315ff907a106f844b70ea19ac46d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-26T11:11:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Cavalcanti, Veraluce Paolini.pdf: 2676822 bytes, checksum: 6bad315ff907a106f844b70ea19ac46d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-26T11:11:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Cavalcanti, Veraluce Paolini.pdf: 2676822 bytes, checksum: 6bad315ff907a106f844b70ea19ac46d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-10-17 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The bacterial pharyngotonsillitis are infections of the upper airways that occurs predominantly in children and adolescents. Due to the composition of the oral microbiota is difficult to clarify the role of each organism in the etiology of the disease. The presence of bacteria that produce beta-lactamase interferes with the effectiveness of beta-lactam antibiotics, the most commonly drug used in treatment of these infections, promoting the recurrence of the disease. S. aureus is one of the most common pathogen in the etiology of tonsillitis and its relevance is due to the ability of antimicrobial resistance and persistence in the tissues of the tonsils. Tonsillectomy is indicated in cases of recurrent tonsillitis after several failures in the antibiotic terapy. The aim of this study was to determine the prevalence of S. aureus in the tonsils of patients undergoing tonsillectomy, in a teaching hospital in Goiânia, the antimicrobial susceptibility profile and the genetic characterization of isolates. Tonsils obtained from 123 patients were processed, the microorganisms identified and submitted to antibiogram by conventional techniques. The isolates that presented cefoxitin resistance were submitted to tests to determine the minimum inhibitory concentration - MIC for oxacillin and to detect the presence of the mecA gene. All isolates were subjected to PCR for detection of Panton-Valentine leukocidin gene and to PFGE to determine the genetic similarity among them. It was identified 60 S. aureus isolates from 49 patients (39.8%). There were no significant difference in prevalence by sex and, the average age of male patients was lower (8.2 years) (p<0.001) than the female patients (15.3 years). Nine out 49 patients(18.4%) presented two or more different S. aureus isolates. The isolates presented resistance of 85.0%, 10.0%, 15.0%, 3.3%, 10.0%, 3.3%, 18.3% and 8.3% to penicillin, amoxicillin + ácido clavulânico, cefoxitin, ceftriaxone, erythromycin, trimethoprim/sulfamethoxazole, ciprofloxacin and tetracycline, respectively. All isolates were sensitive to linezolid and rifampin. Six erythromycin-resistant isolates (10.0%) showed inducible resistance (MLSbi) to clindamycin and quinupristin/dalfopristin. Eight isolates (13.3%) were resistant to three or more classes of antimicrobials. Despite the resistance to cefoxitin be considered a marker of the presence of the mecA gene only in two resistant isolates it has been found, xv suggesting that the cefoxitin resistance should be mediated by other mechanisms, such as the overproduction of beta-lactamases. None of these isolates showed resistance to more than two classes of antimicrobials. Among the sixty S. aureus isolates, only carried the gene encoding the Panton-Valentine leukocidin. This isolate presented resistance to five classes of antimicrobials and phenotype D. PFGE analysis grouped 36 (60,0%) of 60 isolates in 10 clusters (>80% similarity), since no one specific clone was associated with colonization of the tonsils. It was observed different patients carrying S. aureus isolates genetically identical or with a high level of similarity (>80%), suggesting in these cases, a common origin. The high prevalence of S. aureus in tonsils suggests an ability to colonize the surface and/or the persistence in the tissues of the tonsils. The isolation of MDR bacteria can promote cross-resistance to other bacteria commonly associated with recurrent tonsillitis. The results point to change the paradigm of diagnosis and treatment of recurrent tonsillitis in order to enable the correct use of antimicrobials to reduce the recurrence which is the main cause of tonsillectomy. / As faringotonsilites bacterianas são infecções das vias aéreas superiores que ocorrem predominantemente em crianças e adolescentes. Devido à composição da microbiota oral é difícil o esclarecimento da participação de cada microrganismo na etiologia da doença. A presença de bactérias produtoras de β-lactamases interfere na eficácia de antimicrobianos β-lactâmicos, os mais utilizados no tratamento destas infecções, favorecendo a recorrência da doença. S. aureus é um dos patógenos mais frequentes na etiologia das tonsilites e sua relevância se deve à capacidade de resistência aos antimicrobianos e à persistência nos tecidos internos das tonsilas. A tonsilectomia é indicada nos casos de tonsilite recorrente após várias falhas na antibioticoterapia. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de S. aureus em tonsilas de pacientes submetidos à tonsilectomia, em um hospital escola de Goiânia; o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos e a caracterização genética dos isolados. Tonsilas obtidas de 123 pacientes foram processadas, os microrganismos identificados e submetidos ao antibiograma por técnicas convencionais. Nos isolados resistentes à cefoxitina, foi realizada a determinação da concentração inibitória mínima - CIM para oxacilina e a detecção da presença do gene mecA por PCR. Todos os isolados foram submetidos à PCR para detecção da leucocidina Panton-Valentine e ao PFGE para determinação da similaridade genética. Foram identificados 60 isolados de S. aureus de 49 pacientes (39,8%). Não houve diferença significativa da prevalência por sexo e a média de idade dos pacientes do sexo masculino foi menor (8,2 anos) (p<0,001) do que das pacientes (15,3 anos). Em nove (18,4%) dos 49 pacientes houve a identificação de dois ou mais isolados diferentes de S. aureus. Os isolados apresentaram resistência de 85,0%, 10,0%, 15,0%, 3,3%, 10,0%, 3,3%, 18,3% e 8,3% para penicilina, amoxacilina + ácido clavulânico, cefoxitina, ceftriaxona, eritromicina, sulfametoxazol/trimetoprim, ciprofloxacina e tetraciclina respectivamente. Todos os isolados foram sensíveis à linezolida e rifampicina. Seis isolados (10,0%) resistentes à eritromicina apresentaram fenótipo de resistência induzível (MLSbi) à clindamicina e quinupristina/dalfopristina. Oito isolados (13,3%) foram resistentes a três ou mais classes de antimicrobianos. Apesar da resistência à cefoxitina ser considerada o xiii marcador da presença do gene mecA, somente em dois isolados resistentes, o mesmo foi detectado sugerindo que a resistência à cefoxitina pudesse ser mediada por outro mecanismo, como a hiperprodução de β-lactamases. Nenhum desses isolados apresentou resistência a mais de duas classes de antimicrobianos. Dos 60 S. aureus isolados, somente um apresentou o gene que codifica a leucocidina Panton-Valentine. Neste isolado ainda foi observada resistência a cinco classes de antimicrobianos e fenótipo D. A análise por PFGE agrupou 36 (60,0%) dos 60 isolados em 10 clusters (>80% similaridade), não sendo detectado um clone específico associado à colonização das tonsilas. Porém observamos pacientes diferentes portando S. aureus geneticamente idênticos ou com alto grau de similaridade (>80%), sugerindo nestes casos, uma origem comum. A alta prevalência de S. aureus nas tonsilas sugere uma capacidade de colonização da superfície e/ou persistência nos tecidos internos das tonsilas. O isolamento de bactérias MDR pode favorecer resistência cruzada de outras bactérias comumente associadas à tonsilite recorrente. Os resultados apontam para mudança no paradigma de diagnóstico e tratamento de tonsilites recorrentes com vistas a viabilizar o uso correto de antimicrobianos e diminuir a recorrência que é a principal causa de tonsilectomia

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-30T12:45:52Z No. of bitstreams: 2 Philippsen, Hellen Kempfer-2011-dissertação.pdf: 1457910 bytes, checksum: 4ee585b7a28a164d44414a0a2ef76ae5 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-30T15:28:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Philippsen, Hellen Kempfer-2011-dissertação.pdf: 1457910 bytes, checksum: 4ee585b7a28a164d44414a0a2ef76ae5 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-30T15:28:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Philippsen, Hellen Kempfer-2011-dissertação.pdf: 1457910 bytes, checksum: 4ee585b7a28a164d44414a0a2ef76ae5 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-08-30 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Paracoccidioides brasiliensis is a dimorphic fungus, the causative agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis that affects mainly people from Latin America. In order to establish infection, many factors are required for P. brasiliensis, such as cell wall remodeling and the ability to capture nutrients from the host. As iron is an important cofactor of many reactions, the host reduces the availability of free iron ions to the pathogen. Therefore, this study aims to elucidate the proteomic profile of the cell wall in response to iron depletion. The extraction of surface proteins of the cell wall in iron restriction and iron replete conditions was performed and the proteomic profile was obtained by two-dimensional electrophoresis with subsequent analysis of images. Statistical analysis demonstrated proteins with differential level of expression in each condition, which were subjected to tryptic digestion and identification by mass spectrometry. It was identified 26 proteins by peptide mass fingerprint (PMF) and/or ions fragmentation (MS/MS). The majority of these proteins have post - translational modifications and only some have in their sequences signal peptide, suggesting that they are addressed to the surface by non-classical pathways. / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo patogênico termodimórfico, agente causador da Paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica que afeta principalmente indivíduos da América Latina. Muitos fatores são necessários para que P. brasiliensis estabeleça infecção, como o remodelamento da parede celular e a capacidade de captar nutrientes do hospedeiro para seu metabolismo. Como o íon ferro é um cofator de diversas reações, o hospedeiro diminui a disponibilidade de íons ferro na forma livre para o patógeno. Portanto, o presente trabalho visa investigar o perfil de proteínas da parede celular de P. brasiliensis quando em condição de depleção do íon ferro. Para esse fim, realizou-se a extração das proteínas da parede das células de P. brasiliensis em meio com restrição do íon ferro. O perfil proteômico das condições experimental e controle foram obtidos por eletroforese bidimensional com posterior análise de imagens. Análises estatísticas demonstraram as proteínas reguladas nas condições de depleção de ferro, que foram submetidas à digestão tríptica e identificação por espectrometria de massas. Foram identificadas 26 proteínas por perfil de digestão tríptica (PMF) e/ou perfil de fragmentação dos íons (MS/MS). A maioria dessas proteínas apresenta preditas modificações pós - traducionais e apenas algumas apresentam peptídeo sinal em suas sequências, o que sugere que elas são endereçadas à superfície por vias não clássicas.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-20T12:36:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AvaliacaoSuscetibilidadeInVitro.pdf: 1683274 bytes, checksum: 9513eec5b0e41bedde9a08f37813a32c (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-24T11:41:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AvaliacaoSuscetibilidadeInVitro.pdf: 1683274 bytes, checksum: 9513eec5b0e41bedde9a08f37813a32c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T11:41:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AvaliacaoSuscetibilidadeInVitro.pdf: 1683274 bytes, checksum: 9513eec5b0e41bedde9a08f37813a32c (MD5) Previous issue date: 2015-06-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / FADESP - Fundação de Amparo e Desenvolvimento da Pesquisa / Cromoblastomicose (CBM) é uma micose por implantação fúngica na pele, de evolução crônica, causada pela inoculação traumática de fungos dematiáceos. O Estado do Pará é uma das principais áreas endêmicas, sendo F. pedrosoi o principal agente etiológico. A baixa taxa de cura é reflexo da falta de um esquema terapêutico padronizado e da escassez de dados relacionados a suscetibilidade de fungos negros aos fármacos disponíveis para o tratamento. O principal objetivo deste trabalho foi avaliar a suscetibilidade in vitro de isolados clínicos de Fonsecaea spp. frente a nove antifúngicos, correlacionando as Concentrações Inibitórias Mínimas (CIM) do itraconazol (ITZ) com a evolução clínica e os tipos de lesões, além de quantificar os níveis plasmáticos de ITZ e Hidroxi-ITZ (ITZOH) em pacientes atendidos na Unidade de Referência Especializada em Dermatologia Sanitária do Estado do Pará Dr. Marcello Candia. Os 38 isolados clínicos de Fonsecaea foram avaliados em relação ao ITZ, cetoconazol (CTZ), posaconazol (PCZ), voriconazol (VCZ), fluconazol (FCZ), anfotericina B (ANF B), caspofungina (CAS), terbinafina (TBF) e 5-fluorocitosina (5-FLU), de acordo com as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, documento M38-A2). A CIM para cada fármaco utilizado foi obtida após 5 dias de incubação a 30°C, e dentre os fármacos testados, o PCZ foi o mais efetivo (CIM 0.28 μg/ml, CFM 4.35 μg/ml) podendo ser uma alternativa terapêutica em isolados não sensíveis ao ITZ. Os resultados da correlação entre a CIM do ITZ e a evolução clínica demonstraram que os pacientes com piora tiveram um valor médio ± erro padrão da média (0.90 ± 0.10 μg/ml) superior aos sem melhora (0.45 ± 0.05 μg/ml) com melhora (0.59 ± 0.05 μg/ml) e cura (0.45 ± 0.05 μg/ml), com diferença significativa (p < 0.05) entre os grupos. Não houve correlação entre o CIM do ITZ e os tipos de lesões dos pacientes. Observamos uma grande variabilidade interindividual entre os níveis plasmáticos de ITZ e ITZOH, sendo importante destacar que o ITZOH estava até 3 vezes mais elevado no plasma dos pacientes (p < 0.001), o que pode contribuir para atividade antifúngica do tratamento e sugere uma importante contribuição deste metabólito na terapia. Por fim, avaliamos três pacientes que foram submetidos a altas doses de ITZ, 600 mg/dia, com aumento significativo dos níveis plasmáticos de ITZOH (p=0.0148) e uma concentração >1000 ng/ml na somatória ITZ+ITZOH, considerada satisfatória para a maioria das infecções fúngicas, além de apresentarem melhora do quadro clínico. Em resumo, nossos dados 1) confirmam F. pedrosoi como o principal agente etiológico da CBM no Pará; 2) não evidenciam correlação entre as lesões, as espécies e a sensibilidade ao ITZ; 3) demonstram que ITZ, VCZ e PCZ foram os fármacos com menor CIM, sendo que o PCZ apresentou a menor CFM; 4) correlacionam o metabólito ITZOH com a evolução clínica dos pacientes e; 5) indicam que o uso de altas doses de até 600 mg/dia de ITZ podem ser usadas em pacientes que não respondem a doses terapêuticas menores. / Chromoblastomycosis (CBM) is a fungal infection by implantation in the skin, with a chronic evolution, caused by traumatic inoculation of dematiaceous fungi. Pará state is one of the most important endemic areas in Brazil, and F. pedrosoi is the most prevalent agent. The low cure rate is consequence of the lack of a standardized treatment regimen and there are a few works related to susceptibility of black fungi to the drugs available for treatment. The main objective of this study was to evaluate in vitro susceptibility of clinical isolates of Fonsecaea spp. against nine antifungals, correlating itraconazole (ITZ) minimal inhibitory concentrations (MIC) and minimal fungicidal concentrations (MFC) with clinical outcome and the types of lesions. Furthermore, plasma levels of ITZ and ITZOH were measured in patients treated in Dr Marcello Candia Reference Unit in Sanitary Dermatology (UREMC, Pará State). Thirty-eight clinical isolates of Fonsecaea spp. were evaluated against ITZ, ketoconazole (CTZ), posaconazole (PCZ), voriconazole (VCZ), fluconazole (FCZ), amphotericin B (ANF B), caspofungin (CAS), terbinafine (TBF) and 5-fluorocytosine (5-FLU), according to the protocol of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, M38-A2 document). After 5 days of incubation at 30°C, MICs were determined visually evaluating fungal growth in different drug concentrations, in comparison to the drug-free control wells. PCZ was the most effective (MIC 0.28 μg/ml, MFC 4.35 μg/ml) drug. The correlation between the MIC to ITZ and clinical outcome results demonstrate that patients with worsening had a media value ± SEM (0.90 ± 0.10 μg/ml) superior to no improvement (0.45 ± 0.05 μg/ml) or improvement (0.59 ± 0.05 μg/ml) and cure (0.45 ± 0.05 μg/ml), with a significant difference (p < 0.05) among the groups. There was no correlation between ITZ CIM and types of lesions. We observed a large inter-individual variability of ITZ and ITZOH plasma levels. ITZOH was up to 3 times higher in the plasma of patients (p < 0.001), which can contribute to the antifungal treatment and suggests an important participation of this metabolite in therapy. Lastly, we evaluated three patients who underwent high dose 600 mg/day ITZ with a significant increase of ITZOH (p= 0.0148) plasma levels. In summary, our data 1) confirmed F. pedrosoi as the main agent of CBM in Pará; 2) did not show correlation between the lesions, species and ITZ sensitivity; 3) Showed that ITZ, VCZ and PCZ are the drugs with lower CIM, wherein PCZ had the lowest MFC; 4) correlated the metabolite ITZOH with the clinical evolution of patients and; 5) indicated that the use of high doses of up to 600 mg/day ITZ can be used in patients who do not respond to lower therapeutic doses.