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Previous issue date: 2017-02-22 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O carcinoma mucoepidermoide (CME) é a neoplasia maligna de glândula salivar mais prevalente, demonstrando índices relevantes de recorrência e metástases à distância, em virtude da elevada capacidade invasiva de suas células, provavelmente favorecida pela atuação da metalotioneína (MT), uma proteína armazenadora de zinco, responsável em fornecer esse elemento para a atuação de proteases e para a ocorrência da síntese de proteínas e ácidos nucléicos. Dessa forma, objetivou-se caracterizar uma linhagem celular derivada dessa neoplasia, assim como correlacionar a expressão de MT com o Fator de Crescimento Transformador-α (TGF-α), com o Fator de Necrose Tumoral-α (TNF-α) e com as Metaloproteinases da Matriz (MMPs). O ensaio de imunofluorescência indireta foi realizado para detectar a expressão de marcadores epiteliais e mesenquimais na linhagem. Adicionalmente, uma análise citogenética foi feita para verificar as alterações cromossômicas celulares. A diminuição na expressão do gene metalotioneína-2A foi alcançada por RNA de interferência, e posteriormente, realizou-se Western Blot para correlacionar o silenciamento da metalotioneína com a expressão dos fatores de crescimento e MMPs. A linhagem derivada de CME expressou as citoqueratinas 19 e AE1/AE3, fibronectina, vimentina e α-actina-músculo liso. Avaliação citogenética evidenciou diversas alterações estruturais e numéricas, dentre as quais a translocação t(11;19) (q21;p13), característica do CME. Após RNA de interferência, visualizou-se uma expressão diminuída de TGF-α e MMP-9, enquanto que o TNF-α tornou-se mais expresso e a MMP-2 manteve sua expressão inalterada. Com os resultados, sugerimos que a MT apresenta papel relevante na invasão tumoral do CME, visto que interfere na expressão de proteínas envolvidas nesse mecanismo. / The Mucoepidermoid Carcinoma (MEC) is the most common tumor of salivary glands, presenting considerable rates of recurrence and distant metastasis due to high invasive capacity of tumor cells, probably favored by metallothionein (MT) actuation, an zinc storage protein that supply this element to protease activity and synthesis of proteins and nucleic acids. So, the aim of this paper was to characterize a cell line from MEC and to correlate expression of MT with the Transforming Growth Factor-α (TGF-α), Tumor Necrosis Factor-α (TNF-α) and Matrix Metalloproteinases (MMPs). Indirect Immunofluorescence assay was realized to detect expression to epithelial and mesenchymal markers. Besides, it was realized cytogenetic analysis to verify cellular chromosomal alterations. The metallothionein2A (MT2A) gene silencing was obtained by small-interference RNA (siRNA) assay, and then, western blot technique was performed to correlate the expression of growth factors and MMPs studied with MT-2A silencing. Indirect immunofluorescence revealed expression to cytokeratines 19 and AE1/AE3, fibronectin, vimentin andα-smooth muscle actin. Cytogenetic evaluation demonstrated several structural and numerical alterations, among which the translocation t(11;19) (q21;p13), characteristic of MEC. After siRNA assay, a decreased expression of TGF-α and MMP-9 was visualized, while TNF-α became more expressed and MMP-2 kept its expression unaltered. Our findings suggest that MT presents important role in tumor invasion mechanism in MEC, because it interferes with expression of proteins directly involved in this process.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpa.br:2011/9444 |
| Date | 22 February 2017 |
| Creators | AQUIME, João Rafael Habib Souza |
| Contributors | PINHEIRO, João de Jesus Viana |
| Publisher | Universidade Federal do Pará, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, UFPA, Brasil, Instituto de Ciências da Saúde |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | 1 CD-ROM, reponame:Repositório Institucional da UFPA, instname:Universidade Federal do Pará, instacron:UFPA |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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