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Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Inibidores de protease são moléculas que têm a capacidade de controlar proteases por
bloqueio da atividade catalítica. As proteases participam de importantes eventos
fisiológicos tais como a digestão dos alimentos, coagulação sangüínea, e apoptose. A ação
dos inibidores é essencial para garantir a homeostase. Artrópodes como insetos e
aracnídeos são ricas fontes desses inibidores. O objetivo desse trabalho foi isolar inibidores
de proteases presentes na hemolinfa da aranha Lasiodora sp. Hemolinfa foi coletada através
de punção cardíaca na presença de anticoagulante. Após centrifugação (800g) o plasma foi
separado e utilizado para a detecção de inibidor de tripsina, trombina, fator Xa e XIIa.
Cromatografia de afinidade em tripsina-Sepharose resultou no inibidor purificado, porém
sem atividade inibitória. Isolamento do inibidor de tripsina foi realizado por cromatografia
em coluna de Sephadex G-100 e a preparação contendo atividade inibitória de tripsina foi
denominada: inibidor de tripsina bruto. Cromatografia em Mono Q isolou a partir do
inibidor de tripsina bruto, o inibidor de tripsina LPTI (do inglês Lasiodora plasma trypsin
inhibitor) e uma proteína anticoagulante LPA (do inglês Lasiodora plasma anti-coagulant).
Eletroforese em gel de poliacrilamida em presença de sulfato sódico de dodecila revelou
massa molecular de 72 kDa para LPTI e LPA. Avaliação de atividade inibitória sobre
proteases e do efeito na coagulação através de determinação do tempo de recalcificação,
tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) revelou que
LPTI não interfere na coagulação e LPA, sem atividade inibitória de tripsina, interfere no
TTPA. De acordo com nosso conhecimento LPTI e LPA correspondem ao primeiro
inibidor de tripsina e a primeira proteína anticoagulante isolados da hemolinfa de aranha.
LPTI e LPA podem participar no mecanismo de coagulação da hemolinfa através do
controle da produção da protease fenoloxidase, que dispara a cascata, e do controle da
atividade de proteases da cascata de coagulação
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/1482 |
| Date | 31 January 2009 |
| Creators | FERREIRA, Felipe Roberto Borba |
| Contributors | ZINGALI, Russolina Benedeta |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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