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Previous issue date: 2015-03-06 / CNPq / A abordagem mais promissora para um diagnóstico eficaz da Leishmaniose Visceral
(LV) utiliza ensaios sorológicos com proteínas recombinantes, pois apresentam
grande sensibilidade e especificidade, associados a baixo custo e fácil execução.
Misturas de alguns antígenos geram resultados mais promissores, contudo, a
produção destas aumenta os custos e dificulta a padronização. É ideal a produção
de uma única proteína quimérica que apresente boa sensibilidade e seja eficiente no
diagnóstico das formas humana e canina da LV. Este estudo objetivou avaliar as
condições para expressão em Escherichia coli de genes sintéticos codificando
proteínas quiméricas compostas por regiões selecionadas de antígenos previamente
identificados de Leishmania infantum. Quatro genes, contendo os mesmos
antígenos em diferentes combinações, foram otimizados para expressão em
procariotos e sintetizados. Sítios internos de restrição foram incluídos nas
sequências de forma a permitir a eliminação seletiva de segmentos específicos e se
avaliar o efeito na expressão bacteriana da presença de diferentes regiões
antigênicas, bem como de um peptídeo estimulador da tradução. A expressão das
proteínas geradas foi então avaliada através de ensaios de Western Blot. Os
resultados obtidos mostraram uma expressão equivalente, porém limitada, das
diferentes proteínas quiméricas, independente da sua composição antigênica.
Proteínas menores tiveram resultados mais promissores na expressão e o peptídeo
estimulador da tradução foi essencial para otimizar essa expressão, porem ainda
faz-se necessário mais estudos avaliando a sensibilidade e especificidade dessas
proteínas para o diagnóstico da LV. / The most promising approach for effective diagnosis of Visceral Leishmaniasis (VL)
uses serological assays with recombinant proteins, since they have high sensitivity
and specificity associated with low cost and easy implementation. Mixtures of some
antigens generate the most promising results, however, these increase production
costs and impairs its standardization. The best option would be the production of a
single chimeric protein showing good sensitivity and being effective for the diagnosis
of the human and canine forms of VL. This study aimed to evaluate the conditions for
expression in Escherichia coli of synthetic genes encoding chimeric proteins
composed of selected regions of previously identified antigens of Leishmania
infantum. Four genes, containing the same antigens in different combinations, were
optimized for expression in prokaryotes and synthesized. Internal restriction sites
were included in the sequences to allow selective removal of specific segments and
to evaluate the effect on the bacterial expression of the presence of different
antigenic regions, as well as a translational enhancer peptide. The expression of
proteins generated was then evaluated by Western blot assays. The results showed
equivalent expression, however limited, of the different chimeric proteins, regardless
of their antigenic composition. Smaller proteins produced more promising results in
the expression and the translation enhancer peptide was important to optimize this
expression, however further studies are still necessary to evaluate the sensitivity and
specificity of these proteins for the diagnosis of VL.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/16758 |
| Date | 06 March 2015 |
| Creators | SANTOS, Wagner José Tenório dos |
| Contributors | MELO NETO, Osvaldo Pompílio de, MAGALHÃES, Franklin Barbalho |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Genetica, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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