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Previous issue date: 2008-10-13 / Strangles is a contagious disease of the upper respiratory tract of horses caused by
Streptococcus equi subsp. equi. Asymptomatic carriers responsible for maintaining
the infection in the herd can only be detected by serological or microbiological
methods and vaccines used for the control of the disease induce levels of protection
generally not exceeding 50%. Considering that S. equi SeM protein is considered the
most promising antigen to protect against the disease, this research aimed to
produce and evaluate as antigen for vaccines and for ELISA, a recombinant S. equi
SeM protein (rSeM). rSeM was produced by cloning and expression in Escherichia
coli and purified by affinity chromatography. To test its immunogenicity isogenic
female Balb-c mice 4-6 weeks-old were randomly divided and inoculated with 1 / 20th
of the estimated dose of the vaccine for horses by the SC route, on days 0 and 21 of
the experiment. One group was vaccinated with 250mL (12 mg mL-1) of rSeM without
adjuvant, another with 300mL of vaccine containing 12 mg mL-1 of rSeM plus 20% of
aluminiun hydroxide, two other groups were vaccinated with two commercial
bacterins against Strangles, other two groups were vaccinated with the same
commercial vaccines containing 12 mg mL-1 of rSeM and the remaining group was
inoculated with a bacterin produced with a field strain. The control group was
inoculated the same dose of sterile saline. Blood samples were collected from the
retro-orbital venous plexus on days 0, 21, 42. The antibodies were titrated by ELISA
using rSeM as antigen. rSeM was immunogenic for mice with a protection index of
100%. For the standardization of an ELISA, groups of 20 negative, vaccinated and
positive animals were used. Using as Cut-off the mean plus two SD of the Optical
Densities of the negatives, the test showed 100% sensitivity and specificity. / A Adenite Eqüina é uma enfermidade contagiosa do trato respiratório superior dos
eqüídeos causada por Streptococcus equi subesp. equi. Animais portadores
assintomáticos responsáveis pela permanência da infecção nos rebanhos só podem
ser detectados por métodos microbiológicos ou sorológicos e as vacinas utilizadas
no controle da doença induzem níveis de proteção geralmente não superiores a 50
%. Considerando que a proteína SeM de S. equi é o antígeno mais promissor na
proteção contra a doença, este trabalho objetivou produzir a proteína SeM
recombinante de S. equi, visando sua utilização como antígeno em vacinas e em
ELISA. Proteína SeM recombinante (rSeM) foi produzida mediante a clonagem e
expressão em Escherichia coli e purificada por cromatografia de afinidade. Para
testar sua capacidade imunogênica, vacinas elaboradas com rSeM foram aplicadas
a camundongos. Fêmeas Balb/c isogênicas com 4-6 semanas foram divididas
aleatoriamente e inoculadas por via SC com 1/20 da dose vacinal estimada para
cavalos, nos dias 0 e 21 do experimento. Um grupo foi vacinado com 250 mL (12 mg
mL-1) de proteína recombinante sem adjuvante, outro com 300 mL de vacina
contendo 12 mg mL-1 rSeM adicionada de 20% de hidróxido de alumínio, outros dois
grupos com duas bacterinas comerciais contra Adenite Eqüina; dois grupos com as
vacinas comerciais, acrescidas de 12 mg mL-1 de rSeM e o grupo restante com uma
bacterina contendo cepas de campo. O grupo controle foi inoculado com o mesmo
volume de solução salina estéril. Coletou-se sangue por punção do plexo venoso
retro-ocular nos dias 0, 21 e 42. Os anticorpos foram titulados por ELISA utilizando a
proteína rSeM como antígeno. A rSeM foi imunogênica em camundongos com
índices de proteção de 100%. Para a padronização de um ELISA, utilizaram-se
grupos de 20 soros equinos de animais negativos, vacinados e positivos. Utilizando
um ponto de corte de média das densidades ópticas dos soros negativos acrescidos
de dois desvios padrão, o teste teve 100% de sensibilidade e especificidade.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/1268 |
| Date | 13 October 2008 |
| Creators | Moraes, Carina Martins de |
| Contributors | CPF:27798690034, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783259J8, Nogueira, Carlos Eduardo Wayne, CPF:37145860082, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785783H3, Leite, Fabio Pereira Leivas, Conceição, Fabrício Rochedo, Turnes, Carlos Gil |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFPel, BR, Biotecnologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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