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Previous issue date: 2009-12-17 / The rabies virus has two major antigens: the nucleoprotein, a conserved
internal protein antigenically and genetically and glycoprotein, a protein
responsible for the external adsorption of virus two the host cell and induction of
neutralizing antibodies. The development of recombinant DNA technology has
opened a new perspective on the control of rabies, since recombinant vaccines
have residual pathogenicity and are produced with the antigenic proteins of the
virus, without their presence. Furthermore, recombinant proteins can be
expressed in order to be used in diagnosis. The objective of this study was to
review the literature about rabies, cloning and express the nucleoprotein and
glycoprotein of rabies virus using the system Pichia pastoris and evaluate the
antigenicity and the immunogenicity of these proteins by Dot blotting, SDS
page, Western blotting and ELISA. Glycoprotein synthetic antigen proved to be
recognized by anti-rabies from animals experimentally infected with rabies virus
strain CVS. And recombinant nucleoprotein expression was confirmed by the
techniques of Dot blotting and Western blotting to be recognized by monoclonal
anti-histidine. Thus, we conclude that the cloning and expression of synthetic
glycoprotein and cloinig and expression nucleoprotein rabies virus by the yeast
P. pastoris has been effective, which makes these products an alternative for
the production of immunobiological. / O vírus da raiva apresenta dois antígenos principais: a nucleoproteína, uma
proteína interna conservada antigênica e geneticamente e a glicoproteína, uma
proteína externa responsável pela adsorção do vírus à célula hospedeira e pela
indução da produção de anticorpos neutralizantes. O desenvolvimento da
tecnologia do DNA recombinante iniciou uma nova perspectiva no controle da
Raiva, já que vacinas recombinantes não têm patogenicidade residual e são
produzidas com as proteínas antigênicas do vírus, sem sua presença. Além
disso, as proteínas recombinantes podem ser expressas com a finalidade de
serem usadas em diagnóstico. O objetivo deste trabalho foi clonar e expressar
a glicoproteína e a nucleoproteína do vírus da raiva utilizando o sistema Pichia
pastoris e avaliar a antigenicidade e imunogenicidade destas proteínas através
do Dot blotting, SDS page, Western blotting, inibição da imunofluorescência e
ELISA. A glicoproteína demonstrou ser antigênica ao ser reconhecida por
anticorpos anti-rábicos provenientes de animais experimentalmente infectados
com o vírus rábico cepa CVS. A nucleoproteína recombinante teve sua
expressão confirmada pelas técnicas de Dot blotting e Western blotting ao ser
reconhecida por anticorpos monoclonais anti-histidina. Podemos concluir que a
levedura P. pastoris é um sistema eficiente para clonagem e expressão da
nucleoproteína e glicoproteína do vírus rábico.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/1281 |
| Date | 17 December 2009 |
| Creators | Souza, Lorena Leonardo |
| Contributors | CPF:27798690034, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783259J8, Turnes, Carlos Gil |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFPel, BR, Biotecnologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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