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Previous issue date: 2013-10-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Grains and legume seeds are foods that form the basis of the diets of many cultures
around the world, winch contritbute to the daily nutrient requirements of humans.
Vicilins (7S globulin) are storage proteins found in legume seeds, and may have an
additional function constitutive defense of the embryo against pests and pathogens.
In this work the vicilin from Anadenanthera macrocarpa - AmV (red-angico), was
purified and partially characterized, its effect on development and larval survival and
adult emergence of Callosobruchus maculatus was evaluated by determination of
LD50, WD50 and ED50 in system bioassay. Purification of vicilin was initiated by the
chitin affinity chromatography and then gel filtration (Superdex 75 Tricorn 10x300
mm) FPLC system followed by reverse phase chromatography (C8 phenomenex) on
HPLC system. Bioassays WD50 and LD50 for larvae were 0.32% and 0.33% (w:w)
respectively, since the ED50 for adults was 0.096%. The probable mechanism of
action was evaluated by testing digestibility of AmV in vitro, and observed for the
involvement of two fragments vicilins immunoreactive against polyclonal Anti-vicilin
from Erythrina velutina (Anti-EvV) about of 22 and 13 kDa chitin binding. The AmV in
its native form has been recognized by the anti-EvV, indicating that there is a
conserved region in the vicilin and is probably corresponding to the chitin binding
domains. These results point to a new vicilin chitin binding that can subsequently be
used as a possible biopesticide protein source, in order to control insect pest C.
maculatus and confirm literature findings that demonstrate vicilin in the presence of
different kinds of ligands to conserved regions chitin not yet characterized / Sementes de leguminosas s?o alimentos que comp?em a base das dietas de
diversas culturas ao redor do mundo, tendo uma importante contribui??o nas
necessidades di?rias de nutrientes dos seres humanos. As globulinas 7S (vicilinas)
s?o prote?nas de reserva encontradas em sementes de leguminosas, e podem
apresentar uma fun??o adicional de defesa constitutiva do embri?o contra pragas e
pat?genos. Neste trabalho uma vicilina de Anadenanthera macrocarpa - AmV
(Angico-vermelho), foi purificada e parcialmente caracterizada. Seu efeito sobre o
desenvolvimento, sobreviv?ncia larval e emerg?ncia dos adultos de Callosobruchus
maculatus foram avaliados pela determina??o das LD50, WD50 e ED50 em sistema de
bioensaio. A purifica??o da vicilina foi iniciada por cromatografia de afinidade ?
quitina e posteriormente em cromatografia de gel filtra??o Superdex 75 Tricorn
10x300 mm no sistema de FPLC, seguida por cromatografia de fase reversa C8
phenomenex em sistema HPLC. Por SDS-PAGE, AmV dissociou-se em quatro
subunidades principais com aproximadamente 73, 70, 43 e 41 kDa, e quando
submetida ? eletroforese a 12% em condi??es nativas apresentou uma banda ?nica
de caracter?stica eletrofor?tica ?cida. Nos bioensaios, a WD50 e a LD50 para as larvas
foram de 0,32% e 0,33% (p:p) respectivamente, j? para os adultos a ED50 foi de
0,096%. O prov?vel mecanismo de a??o foi avaliado por ensaios de digestibilidade
da AmV in vitro, sendo observado o envolvimento de dois fragmentos de vicilinas
imunorreativos contra anticorpo policlonal Anti-vicilinas de Erythrina velutina (Anti-
EvV), de aproximadamente 22 e 13 kDa ligantes ? quitina. A AmV na sua forma
nativa foi reconhecida pelo anticorpo anti-EvV, indicando que existe uma provavel
regi?o conservada nas vicilinas, que pode corresponder ? dom?nios de liga??o ?
quitina. Estes resultados apontam para uma nova vicilina que pode vir a ser utilizada
como um poss?vel bioinseticida de origem proteica, de maneira a controlar o inseto
praga C. maculatus, bem como corroborar com achados da literatura que
demonstram em vicilinas de diferentes esp?cies a exist?ncia de regi?es conservadas
ligantes ? quitina ainda n?o caracterizados
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufrn.br:123456789/12625 |
| Date | 29 October 2013 |
| Creators | Fran?a, Anderson Felipe J?come de |
| Contributors | CPF:58024867320, http://lattes.cnpq.br/6644671747055211, Lanza, Daniel Carlos Ferreira, CPF:05372896663, http://lattes.cnpq.br/6851351991421755, Migliolo, Ludovico, CPF:04312172463, http://lattes.cnpq.br/0805599101682606, Uchoa, Adriana Ferreira |
| Publisher | Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Programa de P?s-Gradua??o em Bioqu?mica, UFRN, BR, Bioqu?mica; Biologia Molecular |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Unknown |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFRN, instname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte, instacron:UFRN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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