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Previous issue date: 2013-02-14 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Dental pulp stem cells have been widely investigated because of their ability to
differentiate into both dental and non-dental cells, with potential use in therapies
involving tissue engineering. The technique of cell cryopreservation represents
a viable alternative for the conservation of these cells, since it stops reversibly,
in a controlled manner, all of cell biological functions in an ultra low
temperature. The present study aimed to evaluate, using in vitro experiments,
the influence of a cryopreservation protocol on the biologic acti vity of stem cells
from human exfoliated deciduous teeth (SHED). Cells obtained from the pulp of
three deciduous teeth on end-stage exfoliation or with indicated extraction were
expanded in α-MEM culture medium supplemented with antibiotics and 15%
fetal bovine serum. At second subculture (P2), a group of cells were submitted
to cryopreservation for 30 days in 10% DMSO diluted in fetal bovine serum, at -80? C, while the remind cells continued under normal conditions of cell culture.
Cell proliferation was evaluated in both groups (not cryopreserved or
cryopreserved) by Trypan blue stain essay at intervals of 24, 48 and 72h after
plating. Cell cycle analysis of SHEDs submitted or not to the cryopreservation
protocol was performed in the same intervals. Events related to cell death were
studied by Annexyn V and PI expression under flow cytometry at the intervals of
24 and 72h. The presence of nuclear morphological changes was evaluated by
DAPI staining at 72h interval. It was observed that both groups exhibited an
upward cell proliferation curve, without considerable changes in cell viability
throughout the experiment. The distribution of cell in the cell cycle phasis was
consistent with cell proliferation in both groups. There were no nuclear
morphological damages in the end range of the experiment. therefore, it is
concluded that the proposed cryopreservation protocol is efficient for storing
the studied cell type, allowing its use in future experimental studies / C?lulas-tronco da polpa dental humana t?m sido amplamente investigadas em
raz?o da sua capacidade de diferenciar-se tanto em c?lulas dentais quanto n?o
dentais, com potencial de utiliza??o em terapias envolvendo a engenharia de
tecidos. A t?cnica de criopreserva??o celular representa uma alternativa vi?vel
para a conserva??o dessas c?lulas, j? que cessa reversivelmente, de forma
controlada, todas as suas fun??es biol?gicas em uma temperatura ultra-baixa.
O presente estudo teve como objetivo avaliar, atrav?s de experimentos in vitro,
a influ?ncia de um protocolo de criopreserva??o na atividade biol?gica de
c?lulas-tronco da polpa de dentes humanos d ec?duos esfoliados (SHED).
C?lulas obtidas da polpa de tr?s dentes dec?duos em est?gio final de esfolia??o
ou com exodontia indicada foram expandidas em meio de cultivo α-MEM
suplementado com antibi?ticos e 15% de soro fetal bovino. No segundo
subcultivo (P2), um grupo de c?lulas foi submetido a criopreserva??o por 30
dias em DMSO dilu?do a 10% em soro fetal bovino, a 80?C negativos, enquanto
o restante seguiu em condi??es normais de cultivo. A prolifera??o celular em
ambos os grupos (criopreservado e n?o criopreservado) foi avaliada atrav?s do
m?todo de colora??o por azul de Tripan nos intervalos de 24, 48 e 72 horas
ap?s o plaqueamento. Nestes mesmos intervalos foi realizada a an?lise do
ciclo celular das SHEDs submetidas ou n?o ao protocolo de criopreserva??o.
Os eventos relacionados ? morte celular foram analisados atrav?s da
express?o de Anexina V e PI em citometria de fluxo, nos intervalos de 24 e 72
horas. A presen?a de altera??es morfol?gicas nucleares foi avaliada atrav?s da
marca??o por DAPI no intervalo de 72 horas. Observou-se que ambos os
grupos exibiram uma curva de prolifera??o celular ascendente, sem altera??es
consider?veis na viabilidade celular ao longo do experimento. A distribui??o
das c?lulas nas fases do ciclo celular foi coerente com c?lulas em prolifera??o
nos dois grupos. N?o foram observados danos morfol?gicos nucleares no
intervalo final do experimento . Deste modo, conclui-se que o protocolo de
criopreserva??o proposto ? eficiente para o armazenamento do tipo celular
estudado, permitindo a sua utiliza??o em futuros estudos experimentais
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufrn.br:123456789/17840 |
| Date | 14 February 2013 |
| Creators | Antunes, Fernanda Ginani |
| Contributors | CPF:67269621420, http://lattes.cnpq.br/5004397230198722, Santos, Jean Nunes dos, CPF:62627673487, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728907T1, Souza, L?lia Batista de, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787927Z7&dataRevisao=null, Barbosa, Carlos Augusto Galv?o |
| Publisher | Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Programa de P?s-Gradua??o em Sa?de Coletiva, UFRN, BR, Sa?de P?blica |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFRN, instname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte, instacron:UFRN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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