Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:06:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2015 / Este trabalho propôs estudar a ação do Fator de Crescimento Fibroblástico 18 (FGF18) durante o processo de expansão das células do cúmulus, ma-turação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial. Os experimen-tos desenvolvidos utilizaram ovários provenientes de abatedouro e matu-rados durante 24h em meio de cultura suplementados ou na ausência de diferentes dosagens de FGF18 dependendo do ensaio proposto. O pri-meiro experimento desenvolvido utilizou 24 Complexos do cúmulus oophorus (CCOs) e avaliou diferentes doses de Hormônio folículo esti-mulate (FSH) (0, 1, 10, 50, 100 e 500 ng/ml) a fim de obter concentrações com diferentes efeitos sobre a expansão das células do cúmulus. Neste experimento, foi demonstrado que a suplementação do meio de maturação in vitro com 100 e 500 ng/ml (P< 0,05) resultam na expansão das células do cúmulus, sendo a dose de 500 ng/ml culminar em uma maior taxa de expansão. O segundo experimento visou avaliar a maturação nuclear de CCOs após o período de incubação com 100ng/ml de FGF18 nas concen-trações de FSH do experimento 1. Após o período de incubação da matu-ração in vitro, oócitos foram fixados e corados com HOESCHT-33342 para avaliar a taxa de oócitos que atingiram o estágio de metáfase II da meiose. Os resultados deste experimento demonstram que FGF18 não in-fluenciou a maturação oocitária (P< 0,05). O experimento 3 visou avaliar diferentes concentrações de FGF18 (100, 500 e 1000 ng/ml) sobre a ma-turação oocitária e expansão das células do cúmulus durante o período de incubação de 24h. Foram utilizados 50 CCOs por grupo em quatro repli-cações. Foi demonstrado que FGF18 não afetou a maturação e expansão dos CCOs nos grupos avaliados (P<0,05). O quarto experimento avaliou a suplementação de FGF18 em diferentes etapas da produção in vitro de embriões. Foram elaborados três grupos: controle (ausência de FGF18 em todos as etapas), FGF-MIV (CCOs tratados somente durante a maturação in vitro (MIV) com 100ng/ml de FGF18) e FGF-CIV (zigotos tratados somente durante o cutivo in vitro (CIV) com 100 ng/ml de FGF18). Os resultados apresentam menores taxas quantitativas e qualitativas no grupo FGF-CIV (P<0,05). O experimento 5 teve como objetivo avaliar a expres-são de diferentes genes (GADD54B, 53BP1, RAD52, Interferon-tau, FasL e Cox2) nos grupos do experimento 4. Apenas COX2 se apresentou menos expresso no grupo FGF-MIV. Conclui-se que o FGF18 não influ-encia nos processos de expansão das células do cúmulus e maturação oo-citária. No entanto, foi observado que a suplementação deste fator às eta-pas da PIV reduz a taxa de embriões produzidos, tal como retardo no de-senvolvimento destas células, entretanto, os mecanismos moleculares no controle deste evento ainda não estão elucidados.<br> / Abstract : This work proposed to study the Fibroblast Growth Factor 18 (FGF18) during the cumulus expansion, oocyte maturation and the early embryo development. The experiments used ovaries from slaughterhouses and matured for 24 hours in culture medium in the presence or not of FGF18 depending on the proposed test. The first experiment used 24 cumulus- oocyte complex (COCs) to to evaluate different doses of follicle stimulat-ing hormone (FSH) (0, 1, 10, 50, 100 and 500 ng / ml) to obtain concen-trations with different effects on the expansion of the cumulus cells. This experiment demonstrated that supplementation of the in vitro maturation medium with 100 and 500 ng / ml (P <0.05) result in cumulus expansion. The dose of 500 ng/ml culminate in an increased growth rate. The second experiment aimed avaliate the COC?s nuclear maturation after incubation period with 100 ng/ml FGF18, using the FSH doses of the first experi-ment. After the in vitro maturation, oocytes were fixed and stained with Hoechst 33342 to evaluate the rate of oocytes that reached the metaphase II stage. The results of this experiment demonstrate that FGF18 did not affect oocyte maturation (P <0.05). The third experiment was performed to evaluate different concentrations of FGF18 (100, 500, and 1000 ng / ml) on oocyte maturation and cumulus expansion during the 24 h incuba-tion period. 50 COCs were used per group on four replicates. It was shown that FGF18 did not affect the maturation and expansion of COCs in the study groups (P <0.05). The fourth experiment evaluate the supplementa-tion of FGF18 in different stages of in vitro production. Three groups were established: control (absence of FGF18 in all stages), FGF-IVM (COCs treated only during in vitro maturation (IVM) with 100 ng / ml FGF18) and FGF-IVC (zygotes treated only during the in vitro cultive (IVC) 100 ng / ml FGF18). The results show lower rates qualitative and quantitative FGF-IVC group (P <0.05). The experiment 5 aimed to eval-uate the expression of different genes (GADD54B, 53BP1, RAD52, in-terferon-tau, FasL and COX 2) in the embryos derived of the fourth assay. Only COX2 was downregulated in the FGF-IVM group. We conclude that the FGF18 does not influence the processes of the cumulus expansion cells and oocyte maturation. It was observed that FGF18 supplementation to the IVP steps reduces the rate of embryo production, such as delay in the development of these cells, however, the molecular mechanisms in-volved in this event are not deciphered.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/135389 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Silva, Yago Pinto da |
| Contributors | Universidade Federal de Santa Catarina, Portela Junior, Valério Valdetar Marques, Barreta, Marcos Henrique |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 80 p.| grafs., tabs. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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