Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-24T22:52:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A massiva utilização de combustíveis fósseis contribui para o aumento da emissão de CO2 e consequente aumento do efeito estufa. Assim, o emprego de combustíveis renováveis, como o bioetanol, mostra-se como uma alternativa para a redução da emissão de gases aceleradores deste efeito. A hidrólise de substratos celulósicos pode ser realizada enzimaticamente, com o emprego das celulases (endoglicanases,
xoglicanases e ß # glicosidases), um grupo de enzimas que atuam de
modo sinérgico. O presente trabalho objetivou a avaliação de estratégias para construção de uma biblioteca genômica de Clostridium sp. e a avaliação da degradação de substratos celulósicos através da utilização de celulases recombinantes. Diferentes microrganismos celulolíticos foram avaliados quanto a capacidade de degradação de substrato específico para a enzima em questão. Tentou-se realizar a clonagem por meio de uma biblioteca genômica da bactéria Clostridium sp., onde foram testadas diferentes técnicas de fragmentação do DNA genômico deste microrganismo. Como não foi possível a clonagem, os ensaios enzimáticos utilizaram apenas endoglicanases (EglA, CelB e CelE) e ß # glicosidases (BglA). Os ensaios foram realizados sobre o substrato a # celulose, avaliando-se, durante 24 horas, diferentes combinações das temperaturas 60ºC e 85ºC. Os resultados da degradação foram visualizados por meio da técnica de Somogyi e Nelson, que quantifica os açúcares redutores gerados na hidrólise. Ainda foi realizado um acompanhamento da atividade enzimática por meio da degradação do substrato CMC-RBB. Nesse ensaio, foi possível observar que a maior parte dos açúcares redutores gerados vem em decorrência da atividade das endoglicanases, sendo a ß # glicosidase mais útil apenas depois de 18 horas de tratamento. / The massive use of fossil fuels contributes to the increases of the emission of CO2 and consequent increases in greenhouse effect. Thus, the use of fuels sources, such as ethanol, is shown as an alternative the emission of gases that accelerate this effect. The hydrolysis of cellulosic substrates can be performed enzymatically with the use of cellulases (endoglucanase, exoglicanases and ß - glucosidases), a group of enzymes that act in a synergistic way. This study aimed the evaluation of strategies for the construction of a genomic library of Clostridium sp. and the evaluation of the degradation of cellulosic substrates by the use of recombinants cellulases. Different cellulolytic microorganisms were evaluated for ability of degradation of specific substrate for the enzyme in question. The cloning was tried by the use of a genomic DNA library of the bacterium Clostridium sp. Different techniques were tested for the fragmentation of the microorganism#s genomic DNA. As the cloning was not successful, enzyme assays used only endoglucanases and ß # glicosidases. The tests were performed on the substrate a # cellulose, in assays of 24 hours, under different combinations of temperatures 60ºC and 85ºC. The results of degradation were visualized by the technique of Somogyi and Nelson, which quantifies the reducing sugars generated in hydrolysis. The enzyme activity was monitored by the degradation of the substrate CMC-RBB. In this assay, we observed that most of the sugars is generated due to the activity of endoglucanases, and the ß - glucosidase is more useful only after 18 hours of treatment.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/93476 |
| Date | 24 October 2012 |
| Creators | Paulo, Filipe Araujo Teixeira |
| Contributors | Universidade Federal de Santa Catarina, Porto, Luismar Marques, Lima, André Oliveira de Souza |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 78 p.| il., grafs., tabs. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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