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Herança de sequências de minicírulos de kDNA integradas no genoma de células germinativas com persistência de nDNA de Ttypanosoma cruzi

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-11-19T12:07:48Z
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2012_CarlosFernandoRochaPimentel.pdf: 4136753 bytes, checksum: 3e1660d2869e3ec5c9235fa6a84074b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-11-21T14:25:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2012_CarlosFernandoRochaPimentel.pdf: 4136753 bytes, checksum: 3e1660d2869e3ec5c9235fa6a84074b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-21T14:25:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2012_CarlosFernandoRochaPimentel.pdf: 4136753 bytes, checksum: 3e1660d2869e3ec5c9235fa6a84074b5 (MD5) / Este estudo é parte de linha de pesquisa do Laboratório Multidisciplinar de Pesquisa em Doença de Chagas, na Faculdade de Medicina da Universidade de
Brasília, que visa ao mapeamento das integrações de sequências de minicírculos
de DNA mitocondrial (kDNA) de Trypanosoma cruzi em famílias de residentes em
diferentes ecossistemas brasileiros. Nesta dissertação foram analisados sêmens
de 53 adultos de dois municípios do Estado do Pará. O trabalho foi conduzido
para identificar e caracterizar os sítios de integração das mutações de kDNA em
células do sêmem e determinar a de presença do DNA nuclear (nDNA) do T. cruzi
em adultos na idade reprodutiva. Foram analisadas amostras de DNA do sêmen
de 53 homens. Os testes PCR mostraram que em 44 amostras (83%) havia
nDNA. Em mais quatro amostras (48/53) os testes PCR revelaram amplicons de
kDNA parasita. Estes quatro últimos sugerem que as sequências de minicírculos
poderiam estar integradas ao genoma de pessoas sem a infecção ativa pelo T.
cruzi. Então, a técnica tpTAIL-PCR foi usada para caracterizar as mutações de
kDNA nos cromossomos das células analisadas. Foram encontradas 142
mutações no genoma de 38 indivíduos (72%) do estudo. Essas mutações foram
localizadas (56,6%) em LINE-1 dispersos nos genomas. Ademais, verificou-se
que 32,5% dessas mutações achavam-se no locus AL7313741.4 de LINE-1, no
cromossomo X. Apenas nove eventos de integração de kDNA ocorreram em
regiões codificadoras do genoma. Entre essas, encontram-se mutações em genes
de quinases, receptor olfatório e em outros sítios não determinados. Em 24 casos
(16,8%) o kDNA ligado ao LINE-1 estava acompanhado de fragmento de
sequência de DNA retroviral, sugerindo recombinação e “hitchhiking’’. De grande
interesse, os resultados sugerem a possibilidade de transmissão da infecção por 83% dos homens que tem o nDNA do T. cruzi no sêmen e, assim, a reprodução
sexuada pode contribuir para transferência e herança das mutações de kDNA nas
progênies das famílias do estudo. / This study stems for a research line that has been carried on the Chagas
Disease Multidisciplinary Research Laboratory at the Faculty of Medicine,
University of Brasilia, which aims at the mapping of the integrations of the
mithocondrial minicircle sequences (kDNA) from Trypanosoma cruzi in
members of familes living in different Brazilian ecosystems. Herein, we
analysed samples of semen from 53 men from two counties at the State of
Pará, Brazil. The research was conducted aiming at the identification and characterization of kDNA mutation hotspots in semen cells, so as to determine the rate of presence of the parasite nuclear DNA (nDNA) in adults at reproductive age. A total of 53 semen samples DNA were analysed. The PCR
exams showed nDNA in 44 samples (83%), and further four samples (48/53)
yielded kDNA amplicons. These results suggest that sequences of kDNA
minicircles can integrate into the human genome in the absence of an active T.
cruzi infection. Then, we used the tpTAIL-PCR technique to characterize the
kDNA mutations on chromosomes of analyzed cells. A minimum of 142
mutations were disclosed in the genome of 38 family members (72%). These
mutations were localized in LINE-1 (56.6%) disperse all through the genome.
However, it was observed that 32.5% of such mutations were present in the
locus AL7313741.4 of LINE-1, a chromosome X. Nine mutation events were
found in coding regions of the genome. Among these, there were mutations in
protein-kinase, and in the olfactory genes, and, also in undetermined sites.
Further 24 mutations (16.8%) showed the kDNA covalently linked to LINE-1,
and these chimeras were attached to fragments of retroviral DNA sequences,
thus suggesting recombination and hitchhiking. Of great interest, the results suggest the possibility of transmission of the infections from 83% of men showing the DNA from T. cruzi in the semen, and, therefore, sexual reproduction may contribute to lateral transfer and inheritance of kDNA mutations in the progeny of the study families.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/11657
Date27 July 2012
CreatorsPimentel, Carlos Fernando da Rocha
ContributorsAraujo, Nadjar Nitz Lociks de, Teixeira, Antônio Raimundo Lima Cruz
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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