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Purificação e caracterização das lacases de Pycnoporus sanguineus

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-11-21T11:39:00Z
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Previous issue date: 2006 / O fungo Pycnoporus sanguineus foi eficiente na descoloração de alguns corantes
empregados na indústria farmacêutica. Os resultados obtidos indicam que o P.
sanguineus e principalmente as lacases produzidas por este fungo apresentam
grande potencial para aplicações biotecnológicas. Para a produção de lacase (EC
1.10.3.2, p-difenol:dioxigênio oxidoredutase) o fungo foi cultivado em meio contendo
2,5- xilidina e cobre como indutores. Duas isoformas da enzima (Lac 1 e Lac 2) foram
identificadas e separadas através de cromatografia de interação hidrofóbica. As
enzimas Lac 1 e Lac 2 apresentaram uma massa molecular de 79,7 kDa e 68,1 kDa,
respectivamente. As duas isoformas apresentaram características bioquímicas
diferentes. A enzima Lac 1, contendo menor atividade especifica, foi parcialmente
purificada. Usando seringaldazina como substrato a enzima apresentou um pH ótimo
de 4,8, temperatura ótima de 25-30 °C e Km de 10,3 μmol.L-1. A enzima mostrou baixa
estabilidade à temperatura de 50 °C, mantendo apenas 10% da atividade após 5
horas de incubação. A enzima Lac 2, contendo maior atividade especifica, foi
purificada com um rendimento final de 13,9 %. Usando seringaldazina como
substrato a enzima apresentou um pH ótimo de 4,2, temperatura ótima de 50 °C e Km
de 8,3 μmol.L-1. A enzima mostrou alta estabilidade a temperatura de 50 °C,
mantendo 100 % da atividade após 5 horas de incubação. Ambas as enzimas foram
inibidas por azida sódica e fluoreto de sódio. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Fungus Pycnoporus sanguineus was efficient in the discoloration of some dyes used
in the pharmaceutical industry. Ours results indicated that the P. sanguineus and
mainly laccases produced by this fungus presents great potential for biotechnological
applications. For the production of laccase (EC 1.10.3.2, p-diphenol:dioxigen
oxidoreductase) this fungus was cultivated in medium containing 2,5- xylidine and
copper as inducer. Two isoforms of the enzyme (Lac 1 and Lac 2) had been identified
and separated through chromatography on hydrophobic interaction. The enzymes
Lac 1 and Lac 2 had presented a molecular mass of 68.1 kDa and 79.7 kDa,
respectively. The two isoforms presented different biochemical characteristics. The
enzyme Lac 1, with lower specific activity, was partially purified. Using syringaldazine
as substrate the enzyme showed pH optima of 4.8, temperature optima of 25-30 °C
and Km of 10.3 μmol.L-1. The enzyme showed low stability at temperature of 50 °C,
keeping only 10% of the activity, after 5 hours of incubation. The enzyme Lac 2, with
higher specific activity, was purified with a final yield of 13.9 %. Using syringaldazine
as substrate the enzyme presented one pH optima of 4.2, temperature optima of 50
°C and Km of 8.3 μmol.L-1. The enzyme showed high stability at temperature of 50 °C,
keeping 100% of the activity even after 5 hours of incubation. Both enzymes were
inhibited by sodium azide and sodium fluoride.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/2253
Date January 2006
CreatorsGarcia, Telma Alves
ContributorsUlhoa, Cirano José
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguageEnglish
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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