Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-06-19T21:03:15Z
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Previous issue date: 2017-08-18 / O objetivo geral desse trabalho foi desenvolver um protocolo de criopreservação para ápices caulinares de Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen, ginseng-brasileiro, visando assegurar a conservação em longo prazo do seu germoplasma. Inicialmente foram estabelecidas as condições para a introdução e multiplicação clonal in vitro de Pfaffia glomerata, a partir de gemas laterais de segmentos nodais de plantas em crescimento em campo, para obter o lote de plantas doadoras de ápices caulinares para os experimentos de criopreservação. Após 30 dias de cultivo in vitro 92% das gemas laterais retomaram o crescimento dando origem a plântulas inteiras, com sistema radicular e parte aérea bem desenvolvidos. Para a definição do protocolo de criopreservação foram testadas duas técnicas, a vitrificação e a gota-vitrificação. A técnica de vitrificação consistiu dos seguintes procedimentos: isolamento dos ápices caulinares (±2,0 mm) de plântulas em crescimento in vitro, pré-cultivo em meio de cultura MS básico, solidificado com ágar e suplementado com 0,3M de sacarose por aproximadamente 18 hrs, tratamento com meio de saturação (MS básico líquido suplementado com 2,0M de glicerol e 0,4M de sacarose, vitrificação com três soluções crioprotetoras (PVS2, PVS3 e PVS4), três tempos de exposição (20 min, 40 min e 60 min), e duas temperaturas para cada solução (25°C e 0°C), congelamento em nitrogênio líquido (-196°C), descongelamento, diluição (MS suplementado com 1,2 M de sacarose) e cultivo in vitro. Para a metodologia de vitrificação o melhor percentual de regeneração foi 64%, obtido para ápices caulinares tratados com a solução PVS4, por 60 minutos, a 25°C . Para o método de gota-vitrificação, as etapas utilizadas foram semelhantes, consistindo de isolamento dos explantes, pré-cultivo (MS sólido suplementado com 0,3M de sacarose), saturação (MS líquido suplementado com 2,0 M de glicerol e 0,4M de sacarose), vitrificação com três soluções (PVS2, PVS3 e PVS4), três tempos de exposição (20 min, 40 min e 60 min), e duas temperaturas (25°C e 0°C), congelamento dos ápices caulinares dispostos em tiras de alumínio e submersos diretamente em nitrogênio líquido, descongelamento, diluição (MS suplementado com 1,2M de sacarose) e cultivo in vitro. As melhores condições para o congelamento pelo método de gota-vitrificação foi o tratamento com a solução PVS3, por 40 minutos, a 0°C, o que resultou em 82% de regeneração. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que a criopreservação em nitrogênio líquido pode ser usada para a conservação do germoplasma de ginseng brasileiro. O método mais eficiente, com maior percentual de regeneração dos ápices caulinares (82%) foi o método de gota-vitrificação, adotando-se o tempo de 40 minutos de exposição dos explantes à solução crioprotetora PVS3, na temperatura de 0°C. / The main objective of this work was to develop a cryopreservation protocol for Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen shoot tips, in order to ensure the long-term conservation of its germplasm. The conditions for introduction in vitro and clonal multiplication of Pfaffia glomerata from lateral buds of nodal segments of plants growing in the field were established to obtain the batch of stock donor plants for the cryopreservation experiments. After 30 days of culture in vitro 92% of the lateral buds resumed growth giving rise to whole plantlets, with well developed root system and shoots. For the definition of the cryopreservation protocol, two techniques were tested, vitrification and dropvitrification,. The vitrification technique consisted of the following procedures: isolation of shoot apices (± 2.0 mm) from in vitro growing plantlets, pre-culture ( MS culture medium, solidified with agar and supplemented with 0.3M sucrose), loading with MS medium supplemented with 2.0M glycerol and 0.4M sucrose), vitrification with three cryoprotectant solutions (PVS2, PVS3 and PVS4), three exposure times (20 min, 40 min and 60 min), two temperatures for each solution (25°C and 0°C), freezing in liquid nitrogen (-196°C), thawing, dilution (MS medium supplemented with 1.2 M sucrose) and culture in vitro. For the drop-vitrification method, the steps used were similar, consisting of excision of the shoot tips, pre-culture of explants (solid MS supplemented with 0.3M sucrose), loading (liquid MS supplemented with 2.0M glycerol and 0.4M sucrose), vitrification (PVS2, PVS3 and PVS4), three exposure times (20 min, 40 min and 60 min), and two temperatures (25°C and 0°C), freezing of the shoot apices arranged in aluminum strips and submerged directly into liquid nitrogen, thawing, dilution (MS supplemented with 1.2M sucrose) and in vitro culture. The best conditions for cryopreservation using the droplet-vitrification method were treatment with PVS3 solution for 40 minutes at 0°C, which resulted in 82% regeneration. The results obtained with this work indicate that cryopreservation in liquid nitrogen can be used for conservation of germplasm of brazilian ginseng. The most efficient method, with the highest percentage of shoot tip regeneration (82%), was the droplet-vitrification method, with 40 minutes of exposure of the explants to the cryoprotectant solution PVS3 at 0°C.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/24182 |
| Date | 24 February 2017 |
| Creators | Oliveira, Daniela Vasconcelos de |
| Contributors | Santos, Izulmé Rita Imaculada, Martins, Ildeu Soares |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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