Myrtaceae possui mais de 3000 espécies sendo Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, os gêneros mais representativos pela importância ambiental, econômica, farmacêutica, entre outras. O presente estudo teve como objetivo contribuir no aprimoramento das técnicas de propagação de Psidium cattleianum Sab e Eugenia brasiliensis Lam por estaquia e semeadura em condições in vivo e in vitro. Para P. cattleianum, na propagação in vivo foram testados: Doses de AIB na presença ou ausência de BAP no enraizamento de estacas herbáceas, e indução ao enraizamento de estacas de folha; na propagação in vitro foi testado, para organogênese: Efeito do acido giberélico, do tempo de imersão em NaOCl (2 %) e água 55°C por 10 min na germinação das sementes; Efeito da composição do meio de cultura e da relação entre concentrações de BAP:ANA no desenvolvimento de miniestacas. Para calogênese, para desinfestação de explantes na fase de introdução, foram testados: Pré-tratamento com solução de tiofanato-metílico (49 mg L-1 i.a) misturado com ampicilina (250 mg L-1); efeito do tempo de imersão e do pH da solução de NaOCl. Para desdiferenciação foi testado: Doses de cinetina na indução de calogênese em lâmina foliar e doses de 2,4-D em porções de hipocótilo. Para E. brasiliensis , in vivo, foram testados o efeito da concentração de AIB na indução de enraizamento de estacas e in vitro foi testado o efeito da concentração de AG3 no estabelecimento de miniestacas. Os principais resultados permitem inferir que as duas espécies são passíveis de se propagar por estaquia, sendo que para E. brasiliensis a técnica deve ser aprimorada para aumentar o percentual de enraizamento. Na propagação in vitro de P. cattleianum o meio WPM foi mais adequado para o estabelecimento de miniestacas. A eficiência do NaOCl na desinfestação de sementes e explantes para calogênese é afetada pela concentração da solução, tempo de contato e pH da solução. A desdiferenciação celular e a indução de calo em araçazeiro diferem em função do tipo de explante e concentração de cinetina. Análise histológica evidenciou a participação da região do periciclo vascular e borda dos explantes na calogênese e a diferença na população fenotípica nos explantes foliares. / Myrtaceae has over 3000 species being Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, the most representative genus for environmental, economic, pharmaceutical importance, among others. The present study aimed to contribute to the enhancement of propagation techniques of Psidium cattleianum Sab. and Eugenia brasiliensis Lam. by cuttings and sowing conditions in vivo and in vitro. For P. cattleianum, propagation in vivo were tested: IBA doses in the presence or absence of BAP on rooting herbaceous and inducing rooting of leaf; in vitro propagation was tested for organogenesis: Effect of gibberellic acid, immersion time in NaOCl (2%) and water (55 ° C for 10 min) on seed germination; Effect of culture medium composition and culture concentration ratio BAP: ANA on developing shoots. For callus induction, explants disinfection stage of introduction were tested: Pre-treatment with a solution of thiophanate-methyl (49 mg L-1 a.i) mixed with ampicilin (250 mg L-1); effect of immersion time and pH of NaOCl solution. For dedifferentiation were tested: doses of kinetin to induce callus formation in leaf blade and doses of 2,4-D in portions hypocotyl. In vivo for E. brasiliensis we tested the effect of IBA concentration in inducing rooting; in vitro was tested and the effect of GA3 concentration in establishing cuttings. The main results infer that the two species are likely to propagate by cuttings, and to E. brasiliensis technique should be enhanced to increase the percentage of rooting. For in vitro propagation of P. cattleianum the WPM was more suitable for the establishment of cutings. The efficacy of NaOCl in seed disinfection and explants for callus formation is affected by the solution concentration, dwell time and solution pH. The cellular dedifferentiation and callus induction in strawberry guava differ depending on the explant type and concentration of kinetin. Histological analysis showed the pericycle and vascular edge participation of explants on callus formation and phenotypic difference in population in leaf explants.

Myrtaceae possui mais de 3000 espécies sendo Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, os gêneros mais representativos pela importância ambiental, econômica, farmacêutica, entre outras. O presente estudo teve como objetivo contribuir no aprimoramento das técnicas de propagação de Psidium cattleianum Sab e Eugenia brasiliensis Lam por estaquia e semeadura em condições in vivo e in vitro. Para P. cattleianum, na propagação in vivo foram testados: Doses de AIB na presença ou ausência de BAP no enraizamento de estacas herbáceas, e indução ao enraizamento de estacas de folha; na propagação in vitro foi testado, para organogênese: Efeito do acido giberélico, do tempo de imersão em NaOCl (2 %) e água 55°C por 10 min na germinação das sementes; Efeito da composição do meio de cultura e da relação entre concentrações de BAP:ANA no desenvolvimento de miniestacas. Para calogênese, para desinfestação de explantes na fase de introdução, foram testados: Pré-tratamento com solução de tiofanato-metílico (49 mg L-1 i.a) misturado com ampicilina (250 mg L-1); efeito do tempo de imersão e do pH da solução de NaOCl. Para desdiferenciação foi testado: Doses de cinetina na indução de calogênese em lâmina foliar e doses de 2,4-D em porções de hipocótilo. Para E. brasiliensis , in vivo, foram testados o efeito da concentração de AIB na indução de enraizamento de estacas e in vitro foi testado o efeito da concentração de AG3 no estabelecimento de miniestacas. Os principais resultados permitem inferir que as duas espécies são passíveis de se propagar por estaquia, sendo que para E. brasiliensis a técnica deve ser aprimorada para aumentar o percentual de enraizamento. Na propagação in vitro de P. cattleianum o meio WPM foi mais adequado para o estabelecimento de miniestacas. A eficiência do NaOCl na desinfestação de sementes e explantes para calogênese é afetada pela concentração da solução, tempo de contato e pH da solução. A desdiferenciação celular e a indução de calo em araçazeiro diferem em função do tipo de explante e concentração de cinetina. Análise histológica evidenciou a participação da região do periciclo vascular e borda dos explantes na calogênese e a diferença na população fenotípica nos explantes foliares. / Myrtaceae has over 3000 species being Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, the most representative genus for environmental, economic, pharmaceutical importance, among others. The present study aimed to contribute to the enhancement of propagation techniques of Psidium cattleianum Sab. and Eugenia brasiliensis Lam. by cuttings and sowing conditions in vivo and in vitro. For P. cattleianum, propagation in vivo were tested: IBA doses in the presence or absence of BAP on rooting herbaceous and inducing rooting of leaf; in vitro propagation was tested for organogenesis: Effect of gibberellic acid, immersion time in NaOCl (2%) and water (55 ° C for 10 min) on seed germination; Effect of culture medium composition and culture concentration ratio BAP: ANA on developing shoots. For callus induction, explants disinfection stage of introduction were tested: Pre-treatment with a solution of thiophanate-methyl (49 mg L-1 a.i) mixed with ampicilin (250 mg L-1); effect of immersion time and pH of NaOCl solution. For dedifferentiation were tested: doses of kinetin to induce callus formation in leaf blade and doses of 2,4-D in portions hypocotyl. In vivo for E. brasiliensis we tested the effect of IBA concentration in inducing rooting; in vitro was tested and the effect of GA3 concentration in establishing cuttings. The main results infer that the two species are likely to propagate by cuttings, and to E. brasiliensis technique should be enhanced to increase the percentage of rooting. For in vitro propagation of P. cattleianum the WPM was more suitable for the establishment of cutings. The efficacy of NaOCl in seed disinfection and explants for callus formation is affected by the solution concentration, dwell time and solution pH. The cellular dedifferentiation and callus induction in strawberry guava differ depending on the explant type and concentration of kinetin. Histological analysis showed the pericycle and vascular edge participation of explants on callus formation and phenotypic difference in population in leaf explants.

Myrtaceae possui mais de 3000 espécies sendo Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, os gêneros mais representativos pela importância ambiental, econômica, farmacêutica, entre outras. O presente estudo teve como objetivo contribuir no aprimoramento das técnicas de propagação de Psidium cattleianum Sab e Eugenia brasiliensis Lam por estaquia e semeadura em condições in vivo e in vitro. Para P. cattleianum, na propagação in vivo foram testados: Doses de AIB na presença ou ausência de BAP no enraizamento de estacas herbáceas, e indução ao enraizamento de estacas de folha; na propagação in vitro foi testado, para organogênese: Efeito do acido giberélico, do tempo de imersão em NaOCl (2 %) e água 55°C por 10 min na germinação das sementes; Efeito da composição do meio de cultura e da relação entre concentrações de BAP:ANA no desenvolvimento de miniestacas. Para calogênese, para desinfestação de explantes na fase de introdução, foram testados: Pré-tratamento com solução de tiofanato-metílico (49 mg L-1 i.a) misturado com ampicilina (250 mg L-1); efeito do tempo de imersão e do pH da solução de NaOCl. Para desdiferenciação foi testado: Doses de cinetina na indução de calogênese em lâmina foliar e doses de 2,4-D em porções de hipocótilo. Para E. brasiliensis , in vivo, foram testados o efeito da concentração de AIB na indução de enraizamento de estacas e in vitro foi testado o efeito da concentração de AG3 no estabelecimento de miniestacas. Os principais resultados permitem inferir que as duas espécies são passíveis de se propagar por estaquia, sendo que para E. brasiliensis a técnica deve ser aprimorada para aumentar o percentual de enraizamento. Na propagação in vitro de P. cattleianum o meio WPM foi mais adequado para o estabelecimento de miniestacas. A eficiência do NaOCl na desinfestação de sementes e explantes para calogênese é afetada pela concentração da solução, tempo de contato e pH da solução. A desdiferenciação celular e a indução de calo em araçazeiro diferem em função do tipo de explante e concentração de cinetina. Análise histológica evidenciou a participação da região do periciclo vascular e borda dos explantes na calogênese e a diferença na população fenotípica nos explantes foliares. / Myrtaceae has over 3000 species being Acca sp, Eucalyptus sp, Myrcianthes sp, Myrcia sp, Psidium sp, the most representative genus for environmental, economic, pharmaceutical importance, among others. The present study aimed to contribute to the enhancement of propagation techniques of Psidium cattleianum Sab. and Eugenia brasiliensis Lam. by cuttings and sowing conditions in vivo and in vitro. For P. cattleianum, propagation in vivo were tested: IBA doses in the presence or absence of BAP on rooting herbaceous and inducing rooting of leaf; in vitro propagation was tested for organogenesis: Effect of gibberellic acid, immersion time in NaOCl (2%) and water (55 ° C for 10 min) on seed germination; Effect of culture medium composition and culture concentration ratio BAP: ANA on developing shoots. For callus induction, explants disinfection stage of introduction were tested: Pre-treatment with a solution of thiophanate-methyl (49 mg L-1 a.i) mixed with ampicilin (250 mg L-1); effect of immersion time and pH of NaOCl solution. For dedifferentiation were tested: doses of kinetin to induce callus formation in leaf blade and doses of 2,4-D in portions hypocotyl. In vivo for E. brasiliensis we tested the effect of IBA concentration in inducing rooting; in vitro was tested and the effect of GA3 concentration in establishing cuttings. The main results infer that the two species are likely to propagate by cuttings, and to E. brasiliensis technique should be enhanced to increase the percentage of rooting. For in vitro propagation of P. cattleianum the WPM was more suitable for the establishment of cutings. The efficacy of NaOCl in seed disinfection and explants for callus formation is affected by the solution concentration, dwell time and solution pH. The cellular dedifferentiation and callus induction in strawberry guava differ depending on the explant type and concentration of kinetin. Histological analysis showed the pericycle and vascular edge participation of explants on callus formation and phenotypic difference in population in leaf explants.

Orientador: Ana Maria Aparecida Guaraldo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T21:54:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Britto_MariaHelenaSeabraSoaresde_D.pdf: 1915996 bytes, checksum: 263b368c6fc66874e6b4cc046dda0817 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O gênero Cryptosporidium compreende atualmente 16 espécies, que já foram encontradas parasitando mais de 150 espécies animais, incluindo o homem, no qual já foram referidas infecções causadas por sete delas. O Cryptosporidium parvum é o mais estudado porque é responsabilizado pelo caráter zoonótico da infecção. A espécie responsável pelo caráter antroponótico da criptosporidiose é o Cryptosporidium hominis. Embora já tenha sido descoberto há cem anos e mesmo com o avanço da genômica e biologia molecular, ainda existem muitas dúvidas sobre sua taxonomia, biologia e relação com seus variados hospedeiros. Dados na literatura apontam para a necessidade urgente da definição de modelos experimentais para cultivo de linhagens do parasito ¿in vivo¿ e ¿in vitro¿. As pesquisas ¿in vivo¿ esbarram na dificuldade da utilização de grande número de animais certificados do ponto de vista genético e sanitário e mantidos em ambientes controlados. Por outro lado, os métodos de cultivo ¿in vitro¿ têm-se mostrado de difícil reprodutibilidade, pois a grande variabilidade de linhagens celulares, com diferentes origens, cultivadas em diferentes meios, em condições ambientais diversas, tornam bastante controversos os resultados obtidos nessa área. Neste trabalho apresentamos o cultivo de uma cepa de origem humana de Cryptosporidium sp, de um único paciente portador de HIV/aids, com criptosporidiose, denominada de MMC/Uni, mantida pela infecção por tubagem intra-gástrica de 105 oocistos em camundongos neonatos livres de patógenos específicos (SPF) de linhagens, heterogênicas e isogênicas imunocompetentes e imunodeficientes , mantidos durante todo o experimento em isolador de PVC flexível. Oocistos da cepa MMC/Uni de Cryptosporidium sp foram purificados mediante gradiente de sacarose. Após excistação, foram cultivados em monocamadas da linhagem celular MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney). A presença de merontes foi constatada após 90 horas de cultivo. A cepa MMC/Uni de Cryptosporidium sp, de origem humana, permaneceu infectante após 16 meses, sob refrigeração a 4°C, em solução de Dicromato de Potássio a 2,5% e manteve a infectividade de camundongos após 10 meses de congelamento em DMSO a - 70ºC / Abstract: Cryptosporidium covers actually 16 species, that have been found infecting more then 150 animal species, including humans, in wich have already been reported infections caused by seven of them. Cryptosporidium parvum is the most studied, due to be responsible by the zoonotic character of the infection. The specie responsible by the anthroponotic character of the criptosporidiosis is Cryptosporidium hominis. Although it has been discovered a hundred years ago, and even with the advances in genomics and molecular biology, still persists many doubts about its taxonomy, biology and the relations with its many different hosts. Data in literature point toward the urgent need in the definition of experimental models to cultivate strains of the parasite ¿in vivo¿ and ¿in vitro¿. The research ¿in vivo¿ faces the difficulty in the use of a great number of certificated animals, in the point of genetic and sanitary view, kept in controlled environment. In the other hand, ¿in vitro¿ culture methods have shown to be of difficult reproductibility, for the great variability of the cellular strains, with different origins, kept in different breeding media, in diverse environmental conditions, turn out of great controversy the results found in this area. Here we present a strain of Cryptosporidium sp, from human origin, taken from an unique HIV/aids patient with criptosporidiosis, named as MMC/Uni, kept by a intragastric tubage infection of 105 oocysts in Specific Pathogen-Free (SPF) neonates from outbred and inbred immunocompetent or immunodeficient mice strains, kept during the entire experiment in an isolator of flexible PVC. Oocists of MMC/Uni strain of Cryptosporidium sp were purified by sucrose gradient. After excistation, they were cultivated in MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney) cells monolayers. The presence of meronts was observed after 90 hours of cultivation. The strain MMC/Uni of Cryptosporidium sp, from human origin, remained infectant after 16 months, under refrigeration at 4°C, in a 2.5% solution of Potassium Dichromate, and maintened infectiveness in mouse, after 10 months of freezing in DMSO at -70ºC / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-12T17:30:12Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3868424 bytes, checksum: 30daced885012273e80d7d570fd52b59 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-12T17:30:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3868424 bytes, checksum: 30daced885012273e80d7d570fd52b59 (MD5) Previous issue date: 2014-02-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A crescente demanda por plantas medicinais, como Ruta graveolens L. (Rutaceae), para o isolamento e síntese de compostos de interesse farmacológico levou à superexploração de determinadas culturas, podendo levá-las à extinção e exigindo novas metodologias, como a cultura in vitro, para conservar seu germoplasma e induzir simultaneamente a produção de metabólitos secundários de interesse farmacológico e agroindustrial. No presente estudo avaliou-se o efeito na produção de biomassa e na síntese de metabólitos secundários, como alcaloides e cumarinas em tecidos in vitro de Ruta graveolens, de fitorreguladores como o 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), ácido naftalenacético (ANA), meta-topolina (m-TP) e cinetina (Kin); e de condições fotoheterotróficas, fotoautotróficas e fotomixotróficas, com ventilação forçada e atmosfera enriquecida com CO2. Estabeleceu-se o efeito de diferentes níveis de trocas gasosas e da irradiância na germinação de sementes, no desenvolvimento, na morfologia e na biossíntese de metabólitos de plântulas de R. graveolens. Diferentes tipos de explantes de R. graveolens induziram alta quantidade de biomassa quando cultivados em meio MS suplementado com ANA, 2,4-D e m-TP. As condições fotoheterotróficas favoreceram a formação de brotos, enquanto que as fotomixotróficas estimularam seu alongamento e a diminuição da hiperidricidade. Tanto a variação dos níveis de trocas gasosas, como da irradiância acarretaram diferenças no desenvolvimento das plântulas, no conteúdo de pigmentos fotossintéticos e mudanças morfológicas nas plantas, principalmente na distribuição das células do mesofilo e na epiderme das folhas. Em todos os tecidos cultivados in vitro foram detectados alcaloides, cumarinas, compostos antracênicos, terpenóides, saponinas e flavonoides. Neste trabalho são reportados pela primeira vez para R. graveolens: o efeito da m-TP na indução de calos e brotos; o crescimento de brotos sob condições fotomixotróficas e fotoautotróficas com ventilação forçada e atmosfera enriquecida com CO2; a influencia dos níveis de trocas gasosas e de luminosidade na morfofisiología de plântulas in vitro de R. graveolens. Contribuindo ao conhecimento sobre o efeito destas variáveis na micropropagação e na produção in vitro de metabólitos secundários de interesse em esta planta medicinal. / The increasing demand for medicinal plants such as Ruta graveolens L. (Rutaceae), for the isolation and synthesis of compounds of pharmacological interest led to overexploitation of certain crops, which can lead them to extinction, requiring new methodologies, such as in vitro culture to conserve their germplasm and simultaneously induce the production of secondary metabolites of pharmacological and agribusiness interest. In the present study was evaluated the effect on biomass production and the synthesis of secondary metabolites, such as alkaloids and coumarins, in in vitro culture of Ruta graveolens, of growth regulators such as 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4- D), naphthalene acetic acid (ANA), meta-topolina (m-TP) and kinetin (Kin); and photoheterotrophic, photomixotrophic and photoautotrophic conditions with forced ventilation and CO2-enriched atmosphere. Established the effect of different levels of gas exchange and irradiance on seed germination, development, morphology and biosynthesis of metabolites of seedlings of R. graveolens. Different types of explants of R. graveolens induced high amounts of biomass when grown on MS medium supplemented with NAA, 2,4-D and m- TP. The photoheterotrophic conditions favored the formation of buds, while photomixotrophic stimulated elongation and decreased vitrification. Variations in the levels of gas exchange, as the irradiance led to differences in seedling development in photosynthetic pigments contents and morphological changes in plants, especially in the distribution of cells in the epidermis and mesophyll of leaves. In all R. graveolens tissues cultured, alkaloids, coumarins, antracenic compounds, terpenoids, saponins and flavonoids were detected. This paper first reported for R. graveolens: effect of m-TP on callus induction and shoots; growth of shoots under photomixotrophic and photoautotrophic conditions with forced ventilation and CO2-enriched atmosphere; influences the levels of gas exchange and light in morphophysiology seedling in vitro of R. graveolens. Contributing to knowledge about the effect of these variables in micropropagation and in vitro production of secondary metabolites of interest in this medicinal plant.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-06-19T21:03:15Z No. of bitstreams: 1 2017_DanielaVasconcelosdeOliveira.pdf: 3772125 bytes, checksum: 7ce470b996f01205102b9c87984b13a3 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-08-18T18:47:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_DanielaVasconcelosdeOliveira.pdf: 3772125 bytes, checksum: 7ce470b996f01205102b9c87984b13a3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-18T18:47:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_DanielaVasconcelosdeOliveira.pdf: 3772125 bytes, checksum: 7ce470b996f01205102b9c87984b13a3 (MD5) Previous issue date: 2017-08-18 / O objetivo geral desse trabalho foi desenvolver um protocolo de criopreservação para ápices caulinares de Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen, ginseng-brasileiro, visando assegurar a conservação em longo prazo do seu germoplasma. Inicialmente foram estabelecidas as condições para a introdução e multiplicação clonal in vitro de Pfaffia glomerata, a partir de gemas laterais de segmentos nodais de plantas em crescimento em campo, para obter o lote de plantas doadoras de ápices caulinares para os experimentos de criopreservação. Após 30 dias de cultivo in vitro 92% das gemas laterais retomaram o crescimento dando origem a plântulas inteiras, com sistema radicular e parte aérea bem desenvolvidos. Para a definição do protocolo de criopreservação foram testadas duas técnicas, a vitrificação e a gota-vitrificação. A técnica de vitrificação consistiu dos seguintes procedimentos: isolamento dos ápices caulinares (±2,0 mm) de plântulas em crescimento in vitro, pré-cultivo em meio de cultura MS básico, solidificado com ágar e suplementado com 0,3M de sacarose por aproximadamente 18 hrs, tratamento com meio de saturação (MS básico líquido suplementado com 2,0M de glicerol e 0,4M de sacarose, vitrificação com três soluções crioprotetoras (PVS2, PVS3 e PVS4), três tempos de exposição (20 min, 40 min e 60 min), e duas temperaturas para cada solução (25°C e 0°C), congelamento em nitrogênio líquido (-196°C), descongelamento, diluição (MS suplementado com 1,2 M de sacarose) e cultivo in vitro. Para a metodologia de vitrificação o melhor percentual de regeneração foi 64%, obtido para ápices caulinares tratados com a solução PVS4, por 60 minutos, a 25°C . Para o método de gota-vitrificação, as etapas utilizadas foram semelhantes, consistindo de isolamento dos explantes, pré-cultivo (MS sólido suplementado com 0,3M de sacarose), saturação (MS líquido suplementado com 2,0 M de glicerol e 0,4M de sacarose), vitrificação com três soluções (PVS2, PVS3 e PVS4), três tempos de exposição (20 min, 40 min e 60 min), e duas temperaturas (25°C e 0°C), congelamento dos ápices caulinares dispostos em tiras de alumínio e submersos diretamente em nitrogênio líquido, descongelamento, diluição (MS suplementado com 1,2M de sacarose) e cultivo in vitro. As melhores condições para o congelamento pelo método de gota-vitrificação foi o tratamento com a solução PVS3, por 40 minutos, a 0°C, o que resultou em 82% de regeneração. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que a criopreservação em nitrogênio líquido pode ser usada para a conservação do germoplasma de ginseng brasileiro. O método mais eficiente, com maior percentual de regeneração dos ápices caulinares (82%) foi o método de gota-vitrificação, adotando-se o tempo de 40 minutos de exposição dos explantes à solução crioprotetora PVS3, na temperatura de 0°C. / The main objective of this work was to develop a cryopreservation protocol for Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen shoot tips, in order to ensure the long-term conservation of its germplasm. The conditions for introduction in vitro and clonal multiplication of Pfaffia glomerata from lateral buds of nodal segments of plants growing in the field were established to obtain the batch of stock donor plants for the cryopreservation experiments. After 30 days of culture in vitro 92% of the lateral buds resumed growth giving rise to whole plantlets, with well developed root system and shoots. For the definition of the cryopreservation protocol, two techniques were tested, vitrification and dropvitrification,. The vitrification technique consisted of the following procedures: isolation of shoot apices (± 2.0 mm) from in vitro growing plantlets, pre-culture ( MS culture medium, solidified with agar and supplemented with 0.3M sucrose), loading with MS medium supplemented with 2.0M glycerol and 0.4M sucrose), vitrification with three cryoprotectant solutions (PVS2, PVS3 and PVS4), three exposure times (20 min, 40 min and 60 min), two temperatures for each solution (25°C and 0°C), freezing in liquid nitrogen (-196°C), thawing, dilution (MS medium supplemented with 1.2 M sucrose) and culture in vitro. For the drop-vitrification method, the steps used were similar, consisting of excision of the shoot tips, pre-culture of explants (solid MS supplemented with 0.3M sucrose), loading (liquid MS supplemented with 2.0M glycerol and 0.4M sucrose), vitrification (PVS2, PVS3 and PVS4), three exposure times (20 min, 40 min and 60 min), and two temperatures (25°C and 0°C), freezing of the shoot apices arranged in aluminum strips and submerged directly into liquid nitrogen, thawing, dilution (MS supplemented with 1.2M sucrose) and in vitro culture. The best conditions for cryopreservation using the droplet-vitrification method were treatment with PVS3 solution for 40 minutes at 0°C, which resulted in 82% regeneration. The results obtained with this work indicate that cryopreservation in liquid nitrogen can be used for conservation of germplasm of brazilian ginseng. The most efficient method, with the highest percentage of shoot tip regeneration (82%), was the droplet-vitrification method, with 40 minutes of exposure of the explants to the cryoprotectant solution PVS3 at 0°C.

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-10T16:36:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 606109 bytes, checksum: f6154b7b08097fa959b7a0bda71de9f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-10T16:36:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 606109 bytes, checksum: f6154b7b08097fa959b7a0bda71de9f6 (MD5) Previous issue date: 2014-10-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da Somatotropina Recombinante Bovina (rbST) sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento de Folículos Ovarianos Pré-antrais (FOPA) de bovinos cultivados in vitro. O experimento foi desenvolvido no Laboratório de Reprodução Animal da Universidade Federal de Viçosa. Os ovários foram obtidos de fêmeas bovinas abatidas em frigorífico e transportados ao laboratório em aproximadamente uma hora após a coleta. No laboratório, a região parenquimatosa foi fragmentada, sendo um dos fragmentos de cada ovário imediatamente fixado para Histologia Clássica (HC) e Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET), constituindo o controle não cultivado. Em seguida, os demais fragmentos/folículos foram cultivados in situ por um e sete dias, em estufa a 38,5oC e 5% de CO 2 , em Meio Essencial Mínimo suplementado (controle cultivado), na ausência ou presença de diferentes concentrações de rbST (10, 50, 100 e 1000ng/mL). A troca de meio foi realizada a cada dois dias. Após um e sete dias, os fragmentos ovarianos foram fixados e corados para posterior análise histológica. Nesta análise, os folículos foram classificados como normais ou degenerados, bem como primordiais ou ativados. O diâmetro folicular foi mensurado com auxílio de uma ocular micrométrica. Na avaliação ultraestrutural foi observada a integridade da membrana basal, das organelas citoplasmáticas e o grau de vacuolização citoplasmática. Após um e sete dias de cultivo in vitro, o percentual de folículos normais em fragmentos não cultivados foi superior (P<0,05) quando comparado aos folículos cultivados com o meio base e na presença das diferentes concentrações de rbST. Nenhuma das concentrações de rbST manteve as taxas de sobrevivência folicular após sete dias de cultivo. Quanto ao estádio de desenvolvimento, a ativação folicular ocorreu independente da presença da rbST no meio de cultivo. Apenas os folículos cultivados na presença de 1000ng/mL apresentaram o diâmetro dos ovócitos semelhante (P>0,05) ao do controle não cultivado, após um dia de cultivo. Após um e sete dias de cultivo, o diâmetro dos folículos cultivados na presença de 1000ng/mL de rbST foi superior (P<0,05) aos folículos cultivados apenas com o MEM + e com 10ng/mL de rbST. As características ultraestruturais demonstraram que após sete dias de cultivo em meio contendo 1000ng/mL de rbST, houve xidanos à membrana nuclear e basal, alteração nas células da granulosa, bem como aumento da vacuolização e baixa densidade de organelas no citoplasma. Conclui-se que as concentrações de 10, 50 e 100ng/mL de rbST não tem efeitos benéficos sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento de folículos pré-antrais de bovinos. A concentração de 1000ng/mL de rbST aumenta o diâmetro folicular, entretanto não tem efeitos benéficos sobre a sobrevivência e a ativação de folículos pré-antrais de bovinos cultivados in vitro durante um e sete dias. / The aim of this study was to evaluate the effect of Recombinant Bovine Somatotropin (rbST) on survival, activation and growth of Preantral Ovarian Follicles of cattle grown in vitro. The experiment was conducted at the Laboratory of Animal Reproduction, Federal University of Viçosa. Ovaries were obtained from cows slaughtered in a slaughterhouse and transported to the laboratory in approximately one hour after collection. In the laboratory, the parenchymal region was fragmented, being one of the fragments of each ovary immediately fixed for Histology Classic and Transmission Electron Microscopy, constituting the control. Then, the remaining fragments / follicles were cultured in situ for one and seven days in an incubator at 38.5°C and 5% CO 2 in Minimal Essential Medium supplemented (cultured control) in the absence or presence of different concentrations of rbST (10, 50, 100 and 1000ng/ml). The medium change was performed every two days. After one and seven days, ovarian fragments were fixed and stained for subsequent histological analysis. In this analysis, the follicles were classified as normal or degenerated, as well as primary or activated. Follicular diameter was measured with the aid of an ocular micrometer. In the ultrastructural evaluation, were analysed the integrity of the basement membrane, the cytoplasmic organelles and the degree of vacuolation. After one and seven days of in vitro culture, the percentage of normal follicles in not cultivated fragments was higher (P<0.05) when compared to follicles cultured with basal medium and in the presence of different concentrations of rbST. Neither concentration of rbST kept rates follicle viability after seven days. In relation the development, follicular activation occurred independent of the presence of rbST in the culture medium. Only follicles cultured in the presence of 1000ng/ml showed the diameter of oocytes similar (P>0.05) to the not cultived control, after one day. After one and seven days of cultivation, the diameter of follicles cultured in the presence of 1000ng/ml rbST was higher (P<0.05) to the found in only follicles cultured with MEM and 10ng/ml of rbST, respectively. Results showed that after seven days of culture in medium containing 1000 ng/ml rbST, there was damage to nuclear and basement membrane changes in granulosa cells as well as increased vacuolation and low density of organelles in the cytoplasm. It was concluded that concentrations of 10, 50 and 100 xiiing/ml rbST has no beneficial effect on survival, growth and activation of preantral follicles in cattle. The concentration of 1000ng/mL rbST increases follicular diameter, but has no beneficial effects on the survival and activation of preantral follicles in cultured bovine in vitro for one and seven days.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_juliana_bandeira.pdf: 2631156 bytes, checksum: ca9c7bffe1ab510a5dbabad6a80c602f (MD5) Previous issue date: 2007-03-26 / Medicinal plants are widely used, therefore they are important sources of natural chemical products. However, they can present problems in their use with regard to quality and to genetic identity of the vegetal material. Molecular techniques contribute in the identification of species through the construction of fingerprints, whereas the tissue culture has important hole for providing massive production of plants, free of pathogenic agents and genetically uniforms. Plectranthus includes species that are commonly know as boldo for having anti-dyspeptics and analgesic properties, and stimulant of digestion. The aim of this work was to evaluate the genetic diversity among four species of Plectranthus genus, through RAPD technique and quantitative analysis of their essential oils and to verify the in vitro micropropagation. The DNA extraction and amplification of four Plectranthus species (P. grandis, P. barbatus, P. neochilus e P. amboinicus) was carried out by RAPD. The essential oil of these species was extracted by hidrodestilation. For the establishment of axillaries buds and meristems of P. grandis, P. barbatus and P. neochilus, MS and MS medium supplemented with 0.1 mg L-1 of BAP, 0.01 mg L-1 of ANA and 0.1 mg L-1 of GA3, were used respectively. As alternative medium for the establishment of axillaries buds of P. grandis and P. barbatus, the MS and WPM medium were used complete and with ¾ of the concentration of their salts, combined with 30 and 50 g L-1 of sucrose. Higher genetic similarity was observed between species P. neochilus and P. amboinicus (80%), followed by P. grandis and P. barbatus (77%). Regarding the essential oil concentration, the P. neochilus presented higher value (0.43% b.s.), compared with the P. grandis with lower values (0.09% b.s.). After 40 days of culture, the P. neochilus was the species with better multiplication in MS medium, while for P. grandis and P. barbatus the alternative medium WPM¾ with 30 g L-1 of sucrose presented better condition for the development of both species. The variability detected by RAPD and the diversity of answers obtained during in vitro multiplication, allowed a clear separation among the four analyzed species. / Plantas medicinais são amplamente utilizadas pela população, pois são importantes fontes de produtos químicos naturais. Entretanto, podem apresentar problemas na sua utilização com relação à qualidade e à identidade genética do material vegetal. Técnicas moleculares auxiliam na identificação de espécies através da construção das impressões digitais, enquanto que a cultura de tecidos tem importante papel por proporcionar produção massiva de plantas, livres de agentes patogênicos e geneticamente uniformes. O gênero Plectranthus abrange espécies que são referidas como boldo por possuírem propriedades anti-dispépticas, analgésicas e estimulantes da digestão. O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade genética entre quatro espécies do gênero Plectranthus, através da técnica de RAPD, analisar quantitativamente seus óleos essenciais e a micropropagação in vitro. A extração de DNA e amplificação foi realizada pela técnica de RAPD, de quatro espécies de Plectranthus (P. grandis, P. barbatus, P. neochilus e P. amboinicus). O óleo essencial destas espécies foi extraído através da hidrodestilação. Para o estabelecimento de gemas e meristemas de P. grandis, P. barbatus e P. neochilus foram utilizados os meios MS e MS suplementado com 0,1 mg L-1 de BAP, 0,01 mg L-1 de ANA e 0,1 mg L-1 de AG3, respectivamente. Como meios alternativos para o estabelecimento de gemas do P. grandis e P. barbatus, foram utilizados os meios MS e WPM íntegros e com ¾ da força de seus sais, combinados com 30 e 50 g L-1 de sacarose. Maior similaridade genética foi observada entre as espécies P. neochilus e P. amboinicus (80%), seguido de P. grandis e P. barbatus (77%). Quanto à concentração de óleo essencial, P. neochilus foi o que apresentou maior valor (0,43% b.s.), comparado a P. grandis com valores bem menores (0,09% b.s.). Após 40 dias de cultivo, P. neochilus foi a espécie com melhor multiplicação no meio MS, enquanto para P. grandis e P. barbatus o meio alternativo, WPM ¾ com 30 g L-1 de sacarose apresentou melhor condição para o desenvolvimento de ambas as espécies. A variabilidade detectada através da análise de RAPD e a diversidade de respostas obtidas durante a multiplicação in vitro permitiram uma clara separação entre as quatro espécies analisadas.

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-09-04T15:24:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_tatiane_casarin.pdf: 904257 bytes, checksum: eecbe82cb3a2bcde286380eeed6592c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-09-13T17:47:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_tatiane_casarin.pdf: 904257 bytes, checksum: eecbe82cb3a2bcde286380eeed6592c8 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-09-13T17:47:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_tatiane_casarin.pdf: 904257 bytes, checksum: eecbe82cb3a2bcde286380eeed6592c8 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-13T17:54:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao_tatiane_casarin.pdf: 904257 bytes, checksum: eecbe82cb3a2bcde286380eeed6592c8 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Com o crescente interesse a cerca do cultivo de pinhão-manso (Jatropha curcas L.), uma oleaginosa da família Euforbiaceae com potencialidade para a produção de biocombustíveis, faz-se necessária a aplicação de ferramentas biotecnológicas que tornem possível o desenvolvimento e seleção de genótipos com as características de interesse e melhores condições sanitárias. Nesse sentido, o estabelecimento de condições de cultivo e protocolos de regeneração eficientes para os genótipos de interesse local é de grande importância. O objetivo deste trabalho foi, portanto testar as condições para a propagação in vitro de pinhão-manso. Inicialmente investigou-se a otimização do processo de germinação in vitro de sementes, como fonte inicial de explantes, onde foi observado que o acréscimo de 0,94 μM de GA3 resultou em melhores médias de germinação. No protocolo de regeneração, após a modificação da composição dos meios de cultura e condições de cultivo, não foi observada diferença significativa entre os diferentes tratamentos de indução de calos, entretanto foi possível observar uma redução no desenvolvimento dos explantes que foram mantidos em condições de maior luminosidade. Para o alongamento das brotações adventícias obtidas, o tratamento mais eficiente foi T1: 9,69 μM AIA + 2,22 μM BAP. Para o enraizamento dos explantes foi utilizado meio MS com metade da concentração de sais, acrescido de 2,07 μM AIB. Foram obtidas 12 plantas regeneradas e enraizadas, entretanto estas não sobreviveram ao processo de aclimatação. Além dos ensaios de regeneração foram realizados ensaios de cultivo in vitro de ápices caulinares de plântulas germinadas in vitro, no qual se observou que a utilização de 22,2 μM de BAP + 2,07 μM de AIB + 1 g.L-1 de carvão ativado pode ser uma alternativa para a propagação da espécie. / Due to growing interest about Jatropha curcas L. cultivation, an oil crop from the Euforbiaceae family with potential for biofuel production, it is necessary to apply biotechnology tools that make possible the development and selection of genotypes with the features of interest and better health. Accordingly, the establishment of efficient culture conditions and regeneration protocols for local interest genotype is of great importance. Therefore the aim of this study was try to establish the best conditions for the in vitro propagation for genotypes from the Embrapa Clima Temperado breeding program. Initially we investigated the optimization of the process of in vitro germination of seeds, as an initial source of explants, where it was observed that the addition of 0.94 μM GA3 resulted in better average germination. About the regeneration protocol, after changing the composition of the culture media and cultivation conditions, there was no significant difference between the different callus induction treatments, though we observed a reduction in the development of explants that were maintained in more intense light. For elongation of adventitious shoots, the most effective treatment was T1: 9,69 μM AIA + 2,22 μM BAP. For the shoot rooting was used MS medium with half salt concentration plus 2.07 μM IBA. 12 regenerated and rooted plants were obtained, though these did not survive the acclimatization process Apical in vitro culture assays were performed in which it was observed that the treatment T2: 22.2 μM BAP + 2.07 μM IBA + 1 gL-1 of activated carbon can be an alternative for the propagation of the species.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-10T18:43:58Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 633084 bytes, checksum: 34559cb62647d5ac88d96ea9b42b06a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T18:43:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 633084 bytes, checksum: 34559cb62647d5ac88d96ea9b42b06a4 (MD5) Previous issue date: 2004-09-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente trabalho teve por objetivos: (a) analisar a capacidade fotossintética de dois grupos de material vegetal sob condições de campo: plantas adultas com frutos verdes pilosos e plantas com frutos avermelhados pilosos; (b) avaliar o desenvolvimento de explantes cultivados in vitro submetidos a diferentes densidades de fluxo de luz; e (c) estudo anatômico de folhas de plantas adultas e in vitro. As hipóteses testadas foram: (a) existem diferenças na capacidade fotossintética entre os dois grupos de planta analisados; (b) alguns dos parâmetros das curvas de resposta da fotossíntese líquida à luz e ao CO² devem estar correlacionados com os teores dos pigmentos cloroplastídicos; (c) os carotenóides totais presentes nas folhas de Urucum podem desempenhar papel foto-protetor ao estresse foto-oxidativo, possibilitando que explantes cultivados in vitro possam se desenvolver a altas densidades de fluxo de luz. Verificou-se que ambos os grupos de plantas não apresentaram diferenças estatísticas significativas em seus parâmetros das curvas de resposta da fotossíntese líquida à luz e ao CO² . Assim sendo, para estes grupos foram encontrados os valores médios seguintes: 19,17 μmol m-² s-¹ para a estimativa assintótica da taxa fotossintética bruta máxima, 22,6 μmol m-² s-¹ para o ponto de compensação de luz, 1274 μmol m-² s-¹ para o ponto de saturação de luz, 15,38 μmol m -2 s -1 para a estimativa assintótica da taxa fotossintética líquida máxima, 63,0 μmol mol-¹ para o ponto de compensação de CO² e 0,1403 mol m-² s-¹ para a eficiência carboxilativa da Rubisco. Foram observadas as seguintes correlações lineares: entre a eficiência quântica máxima e a irradiância de saturação (r = -0,7794; P = 0,0176), entre a estimativa assintótica da taxa fotossintética bruta máxima e a irradiância de saturação (r = 0,8780; P = 0,0018), entre a estimativa assintótica da taxa fotossintética líquida máxima e o ponto de compensação de CO² (r = -0,6242; P = 0,0408), entre a eficiência carboxilativa e o ponto de compensação de CO² (r = -0,8208; P = 0,0067), entre a limitação estomática à fotossíntese e a concentração intercelular de CO² para uma concentração ambiental de 400 μmol mol-¹ (r = -0,8927; P = 0,0012), entre a eficiência quântica e o teor de clorofila a (r = -0,8887; P = 0,0014), clorofila b (r = -0,8505; P = 0,0037) e clorofilas totais (r = -0,9033; P = 0,0008) e entre a limitação estomática à fotossíntese e o ponto de compensação de luz (r = -0,6751; P = 0,0460). Verificou-se que ambos grupos não diferiram entre si nos teores de pigmentos cloroplastídicos, com uma média de 1629,6 mg kg-¹ de clorofila a, 643,4 mg kg-¹ de clorofila b e 2272,9 mg kg-¹ de carotenóides totais; também não houve diferença estatística entre os teores de bixina nas sementes das plantas de ambos os grupos, com um valor médio de 4,42% que as classificam como boas produtoras do corante. Os teores de bixina não se correlacionaram com nenhuma das variáveis da capacidade fotossintética das plantas. Verificou-se a presença de um grande número de idioblastos ramificados nas folhas das plantas adultas e in vitro com presença de substâncias lipofílicas identificadas como sendo bixina, por meio de reação com Sudan IV e cromatografia em camada fina. Os explantes de Urucum cultivados in vitro apresentaram foto-inibição a partir de uma densidade de fluxo de 150 μmol m-² s-¹ , identificado pela relação F v /F m igual a 0,581 aos 45 dias de exposição. Sob condições de foto-inibição, apenas a atividade da peroxidase apresentou incremento estatisticamente significativo, ao passo que a superóxido dismutase e a catalase não alteraram significativamente suas atividades, concluindo-se que os carotenóides não foram ativos na mitigação desse estresse. / The present work had by objectives: (a) analysis of the photosynthetic capacity of two groups of plant material (plants with hairy green fruits and plants with hairy like- red fruits) under field conditions; (b) evaluate the development of in vitro explants under different light flux density; and (c) histological analysis of adult and in vitro- grown leaves. The experimental hypotheses were: (a) the occurrence of differences in the photosynthetic capacity between the two groups of plants; (b) some response parameters linked to net photosynthesis, light and CO² may be correlated with the amount of chloroplastidic pigments; (c) total carotenoids in Annatto leaves may have a photo-protective role against photo-oxidative stress, though enabling in vitro cultured explants to develop under high light flux density. Both groups of plants did not show statistical differences in the response curve parameters to net photosynthesis, light and CO² . These groups displayed the following mean values: 19.17 μmol m-² s-¹ for maximum gross photosynthesis rate; 22.6 μmol m-² s-¹ for light compensation point; 1274 μmol m-² s-¹ light saturation point; 15.38 μmol m-² s-¹ for maximum net photosynthesis rate; 63.0 μmol mol-¹ for CO² compensation point, and 0.1403 mol m-² s-¹ for carboxylation efficiency of Rubisco. There were linear correlations between maximum quantum efficiency and light saturation point (r = -0.7794; P = 0.0176); maximum gross photosynthesis rate and light saturation point (r = 0.8780; P = 0.0018); maximum net photosynthesis rate and CO² compensation point (r = -0.6242; P = 0.0408); carboxylation efficiency and CO² compensation point (r = -0.8208; P = 0.0067); stomatal limitation of photosynthesis and intercellular CO² concentration for an environmental concentration of 400 μmol mol-¹ (r = -0.8927; P = 0.0012); quantum yield and the amount of chlorophyll a (r = -0.8887; P = 0.0014); chlorophyll b (r = -0.8505; P = 0.0037) and total chlorophylls (r = -0,9033; P = 0,0008); and stomatal limitation of photosynthesis and light compensation point (r = -0.6751; P = 0.0460). No differences were detected in the amount of chloroplastidic pigments whose means were: 1629.6 mg kg-¹ chlorophyll a, 643.4 mg kg-¹ chlorophyll b and 2272.9 mg kg-¹ total carotenoids. Likewise, no differences were detected between the amount of bixin in seeds of both groups, averaging 4.42%. The amount of bixin dit not correlate with any variable of the photosynthetic capacity of the Annatto plants. Leaves of field and in vitro-plants contained a lot of branched idioblasts with lipophylic content, identified as bixin, by means of histochemical assay with Sudan IV and thin layer chromatography. Explants of Annatto showed photo-inhibition from 150 μmol m-² s-¹ light flux density, as indicated by F v /F m (0.581) at 45 days of culture. Under photo-inhibitory conditions, only the peroxidases activity displayed significant increase, whereas superoxide dismutase and catalase did not alter their activities, leading to the conclusion that carotenoids did not play any role in reducing stress. / Tese importada do Alexandria