Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Priscilla Brito Oliveira (priscilla.b.oliveira@gmail.com) on 2009-10-02T18:04:46Z
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Previous issue date: 2007-11 / Análises proteômicas foram realizadas a fim de se verificar a ocorrência de
modificações na expressão protéica em corações de Gallus gallus (galo
doméstico) submetidos a integração em seu genoma de DNA cinetoplástico
(kDNA) de Trypanosoma cruzi.
Foram utilizados galos, que são aves naturalmente refratárias à infecção
por células de T. cruzi, contendo o kDNA integrado em seu genoma através da
inoculação do parasito nos estágios iniciais do desenvolvimento. O controle
negativo foram aves sem nenhum contato com o protozoário.
Extratos de tecidos de corações nessas duas condições (kDNA positivo e
kDNA negativo) foram comparados por eletroforese bidimensional em busca de
proteínas condição-específicas ou diferencialmente expressas. Foram
selecionadas quatro manchas para identificação, sendo duas exclusivas da
amostra de galo com integração positiva e duas presentes em ambas condições,
como controle positivo da técnica.
Através da impressão digital do mapa peptídico (PMF), foram identificadas
três manchas: proteína C-reativa, cadeia leve 3 de miosina e actina
cardíaca. A primeira desempenha um importante papel no sistema imune
hospedeiro, sendo, inclusive, relacionada com inflamação e cardiomiopatias. A
quarta mancha protéica não rendeu identificação conclusiva.
Não foi possível ainda relacionar diretamente a diferença de expressão
protéica com a integração do kDNA no genoma hospedeiro. A continuidade deste
estudo com ampliação do grupo amostral e utilização de seqüenciamento por
espectrometria de massa, permitirá identificar as demais proteínas
diferencialmente expressas, assim como mapear quaisquer modificações em suas
seqüências relacionadas a proteínas quiméricas. / Proteomic analyses were carried out in order to verify the occurrence of
modifications in the protein expression in hearts of Gallus gallus (domestic
rooster), submitted to genomic integration of kinetoplast DNA (kDNA) of
Trypanosoma cruzi.
The present work utilized roosters, which are refractory to the infection by
T. cruzi cells, containing the kDNA integrated in their genome through the
inoculation of the parasite early in the embryonic developmental process. Negative
control birds were utilized without any contact with the protozoan.
Heart tissue extracts in those two conditions (kDNA positive and kDNA
negative) were compared by two-dimensional electrophoresis for investigation of
the existence of condition-specific or differentially expressed proteins. Two
exclusive spots in the kDNA positive rooster sample were selected for
identification, as well as two spots present in both conditions, which were taken as
positive control for the validation of the technique.
Through the use of peptide mass fingerprinting (PMF), three spots were
identified: c-reactive protein, slow skeletal ventricular myosin alkali light chain 3
and cardiac actin. The first one performs an important role in the host immune
system, being related with inflammation and cardiomyopathies. The fourth protein
spot did not yield conclusive identification.
It was not possible yet to directly relate the difference of protein expression
with the integration of the kDNA into the host genome. The continuity of this work
by expanding the sample group and utilization of mass spectrometry sequencing
techniques will permit us to identify the further differentially expressed proteins, as
well as to map any modifications in its sequences related to chimeric proteins.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/3641 |
| Date | 11 1900 |
| Creators | Coelho, Fábio de Araújo Schwartz |
| Contributors | Sousa, Marcelo Valle de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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