Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2008. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-09-11T14:41:32Z
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Previous issue date: 2008-10 / Fitonematóides são responsáveis por grandes perdas econômicas na agricultura
mundial estimadas em US$ 125 bilhões anuais. Esses fitopatógenos têm seu ciclo de
vida dividido em seis estádios de desenvolvimento (ovo, juvenil 1-4 e adulto),
durando em torno de 28 dias. O juvenil 2 penetra na raiz de planta hospedeira por
força mecânica e degradação enzimática para estabelecer a interação planta-patógeno
e se diferenciar em fêmea adulta apomítica, depositando em torno de 2000 ovos.
Práticas agronômicas têm tido geralmente pouco sucesso e alto custo, sendo o cultivo
de variedades resistentes, quando existentes, a forma mais eficiente de controle. Uma
estratégia alternativa promissora é a transformação genética de plantas para expressão
de moléculas que afetem o parasitismo. A metodologia de RNA interferente tem
revolucionado a pesquisa experimental e muitas aplicações biotecnológicas estão
sendo desenvolvidas. A abordagem planejada é a transformação genética de icotiana
tabacum com construções plasmidiais para expressão de RNA dupla fita, tendo como
propósito o silenciamento dos genes-alvo Isocitrato Liase, Arginina Quinase, Proteína
14-3-3 e Proteína de choque térmico 90 de Meloidogyne incognita. Desses genes-alvo,
quatro fragmentos gênicos foram selecionados, isolados, subclonados em vetor para
RNAi e estão em fase de transformação de planta, para futura realização de bioensaios
avaliação de resistência a fitonematóides. Adicionalmente, foi realizada uma análise
da expressão dos quatro genes-alvo, normalizados com os genes constitutivos de β-
actina e 18S rRNA, por PCR quantitativo em tempo real. Observou-se que alguns
genes-alvo são diferencialmente expressos quando comparados as fases de ovo,
juvenil 2 e fêmea. A maior diferença de expressão foi do gene codificador de
Isocitrato Liase, que é 100 vezes mais expresso em ovo e fêmeas, comparado com J2. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Plant parasitic nematodes are responsible for huge economic losses in world
agriculture that reaches US$ 125 billion yearly. The most important of these
phytopatogens, Meloidogyne incognita, has six developmental stages during the life
cycle (egg, four juveniles and female). The juvenile 2 enters the host root via
mechanical force and enzymatic degradation to establish the host-pathogen interaction
and differentiate in apomitic adult female, which deposits 2000 eggs. Current
agronomic practices have usually been unsuccessful and expensive, so the cultivation
of resistant varieties is actually the most efficient way to control nematodes. In this
work, it was chosen to transform icotiana tabacum using plasmidial constructions
for double strand RNA expression, aiming silencing target genes Isocitrate Lyase,
Arginine Kinase, 14-3-3 Protein and Heat Shock Protein 90 of Meloidogyne
incognita. Four regions of target genes were selected, isolated, subcloned in RNAi
vector and are being used for plant transformation. In addition, it was done an
expression analysis of the four target genes, normalized with housekeeping genes β-
actin e 18S rRNA, using quantitative real time PCR. This experiment showed that
these genes are differentially expressed when compared during egg, J2 and female
phases. The major expression difference observed was the Isocitrate Lyase gene,
which is a hundred times more expressed in egg or female when compared with J2.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/5337 |
| Date | 10 1900 |
| Creators | Lourenço, Isabela Tristan |
| Contributors | Maranhão, Andréa Queiroz, Sá, Maria Fátima Grossi de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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