Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-26T17:30:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2000 / Resumo: Um total de setenta e cinco amostras de Cândida albicans isoladas da cavidade oral de escolares saudáveis, do município de Piracicaba, estado de São Paulo, região sudeste do Brasil, com idades variando entre seis e nove anos, provenientes de cinco classes socioeconômicas e oito escolas, foram estudadas. Com base nos dados da literatura, o propósito da presente pesquisa foi analisar os graus de associação (similaridade) entre esses isolados, através da técnica de eletroforese de proteínas intracelulares em gel de poliacrilamida, em sistema descontínuo (SDS-PAGE), com ênfase nos estudos de caracterização epidemiológica desses microrganismos. As amostras foram inoculadas em 50 mL de meio de cultura YPD. Decorrido o tempo de incubação, as amostras foram centrifugadas a 3.000 x g, por 5 minutos. Os sedimentos obtidos foram ressuspensos em água destilada gelada, lavados e fracionados em alíquotas de 0,5mL, os quais foram submetidos ao processo de extração de proteínas por pérolas de vidro. As concentrações de proteínas das amostras foram padronizadas para 800ug/500uL, as quais foram mantidas a - 75 °C até o momento de uso. Os extratos celulares obtidos, foram submetidos à técnica de SDS-PAGE. Após a corrida eletroforética os géis foram revelados. As bandas de proteínas, indicativas do perfil eletroforético de cada amostra, receberam valores 1 (um) para a presença de bandas e 0 (zero) para a ausência das mesmas, numa comparação entre os "lanes". O conjunto desses dados permitiu a confecção de matrizes de dados binários com intervalo de confiança de ±1,245, as quais foram plotadas no pacote estatístico NTSYS-pc 1.70 aplicando o coeficiente de associação (similaridade) de Dice. Essas matrizes de similaridade foram tratadas pelo algoritmo UPGMA, que gerou os dendrogramas que possibilitaram as análises dos graus de similaridade existentes entre os isolados de Cândida albicans. Os resultados obtidos mostraram a formação de vários "clusters", presentes nos dendrogramas UPGMA, com características heterogêneas, contendo as amostras de escolares provenientes de diferentes classes socioeconômicas e escolas. Essa heterogeneidade sugere a existência de polimorfismo nessa espécie. A aplicação de proteínas intracelulares para análise numérica de Cândida albicans, permite a determinação preliminar dos agrupamentos desses isolados, independentemente de suas origens. A diversidade e heterogeneidade dos "clusters", detectáveis nos diversos dendrogramas, obtidos pela análise do perfil eletroforético dos extratos proteicos dessa espécie, sugerem que a caracterização infraespecífica mais apurada deve envolver marcadores menos sujeitos a interferências de expressão, como por exemplo, aqueles que exploram o polimorfismo de ácidos micléicos / Abstract: A total of seventy five samples of Candida albicans, isolated from the oral cavities of healthy scholars living in Piracicaba city, São Paulo state, southeast area of Brazil, with ages varying from six to nine year-old, and coming from five distinct socioeconomic levels and eight schools, were studied. Based on the literature data, the purpose of the present research was to analyze the association (similarity) degrees existing among those isolates, through the whole-cell polyacrylamide gel electrophoresis technique (SDS-PAGE), with emphasis in to ascertain the possible epidemiological relationships among such microorganisms. The samples were inoculated in YPD culture medium, and after the incubation, they were centrifuged at 3,000 x g for 5 minutes. The obtained sediments were washed in cold distilled water and the whole-cell proteins were extracted by disruption with glass beads. The protein concentration of the samples was standardized for 800mg/500mL, which were maintained at -75°C, until the moment of use. The obtained cell extracts were submitted to SDS-PAGE technique. After the electrophoresis, the gels were revealed and the protein bands received values 1 for the presence of bands and 0 for the absence of the same ones, in a lanes' comparison. The collection of those data allowed the confection of several binary data matrices with a confidence interval of ±1,245, which were plotted on the NTSYS-pc 1.70 version statistical package applying the association coefficient of Dice, which generated similarity (So) matrices. Those similarity matrices were treated by the UPGMA algorithm, that allowed the analyses of similarity levels among Candida albicans isolates by dendrograms. The results showed the formation of several clusters with heterogeneous composition, including samples not related to their respective socioeconomic levels or schools. These heterogeneity suggests the high degree of polymorphism in such species. The application of whole-cell proteins for Candida albicans numerical analysis allows the preliminary determination of groupings of those isolates, independently of their origins. The clusters' diversity and heterogeneity detected in the several dendrograms suggest that, a more accurate infraspecific characterization should involve markers less subject to expression interference, as for example, those that explore the nucleic acids' polymorphism / Mestrado / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unicamp.br:REPOSIP/289342 |
| Date | 26 July 2018 |
| Creators | Boriollo, Marcelo Fabiano Gomes |
| Contributors | UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS, Höfling, José Francisco, 1947-, Shimizu, Mario Tsunezi, Gonçalves, Reginaldo Bruno |
| Publisher | [s.n.], Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Programa de Pós-Graduação em Biologia e Patologia Buco-Dental |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 148p. : il., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da Unicamp, instname:Universidade Estadual de Campinas, instacron:UNICAMP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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