Orientador: Luis Guillermo Bahamondes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T11:58:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2009 / Resumo: A microflora vaginal de mulheres saudáveis em idade reprodutiva é composta por uma variedade de bactérias aeróbias e anaeróbias, mas as espécies dominantes são os lactobacilos (bacilos de Döderlein), que exercem significante influência sobre a microbiota local. Além de restringir o crescimento de patógenos competindo pelo espaço e nutrientes, os lactobacilos produzem substâncias antimicrobianas como ácidos orgânicos, peróxido de hidrogênio (H2O2) e bacteriocinas. Esta atividade antagonista é importante na proteção contra várias infecções, principalmente a vaginose bacteriana (VB). Objetivos: Identificar as espécies de lactobacilos isolados do conteúdo vaginal de mulheres saudáveis e assintomáticas e determinar as espécies mais prevalentes e caracterizá-las quanto à produção de ácido láctico, peróxido de hidrogênio (H2O2) e sua capacidade de adesão às células do epitélio vaginal. Métodos: Foram isoladas 83 linhagens de lactobacilos de amostras de conteúdo vaginal de 135 mulheres, sem queixa de corrimento e com diagnóstico laboratorial negativo para infecções vaginais, acompanhadas no ambulatório de Planejamento Familiar da Faculdade de Ciências Médicas - UNICAMP. As linhagens isoladas foram identificadas por PCR multiplex e, quando necessário, submetidas ao sequenciamento do gene RNAr 16S. Foram então avaliadas quanto à produção de ácido láctico, de H2O2, bacteriocinas e a capacidade de adesão às células epiteliais. Resultados: A espécie predominante foi L. crispatus presente em 30,1% das mulheres, seguida de L. jensenii (26,5%), L. gasseri (22,9%) e L. vaginalis (8,4%). As outras espécies isoladas foram L. delbrueckii, L fermentum, L reuteri e L rhamnosus, com duas linhagens cada uma, e L. mucosae e L. salivarius com uma cepa cada. Das 83 linhagens de lactobacilos analisadas, apenas 20 não apresentaram produção de H2O2 detectável pela técnica de cultivo em agar MRS com TMB. Foram selecionadas 37 linhagens para teste de adesão às células epiteliais. Destas, 12 tiveram adesão entre 50% e 69% e 10 igual ou maior a 70%. As linhagens restantes apresentaram pouca capacidade de aderir às células epiteliais. Nenhuma das linhagens testadas produziu bacteriocinas. Conclusões: As espécies de lactobacilos mais prevalentes em mulheres sem vulvovaginites, isoladas em meio de cultura seletivo e identificadas por métodos moleculares, foram L. crispatus, L. jensenii e L. gasseri. Dentre as linhagens analisadas, além de mais frequentes, estas também foram as que atingiram menores valores de pH em meio de cultura e apresentaram melhor produção de H2O2 / Abstract: The vaginal microflora of healthy women is composed of a large variety of aerobic and anaerobic bacteria. The dominant species is a group of lactobacilli (Doderlein's bacillus), which has a significant effect on vaginal microbiota, curtailing the growth of pathogens competing for space and nutrients. The lactobacilli specie produces various antimicrobial substances that include organic acids, hydrogen peroxide (H202) and bacteriocins. Objectives: Identify the prevalence of the different species of lactobacilli isolated from the vagina of healthy asymptomatic women, determine the most prevalent species and characterize them regarding the production of lactic acid, hydrogen peroxide (H2O2) and their capacity to adhere to vaginal epithelial cells. Methods: Eightythree strains of lactobacilli were isolated from the vagina of 135 women, with no complaints of vaginal discharge and negative laboratory diagnosis for vaginal infection, who were being followed up at the Family Planning clinic of the Medical school, Unicamp. The isolates were identified using multiplex polymerase chain reaction (PCR) and, when necessary, 16S rRNA gene sequencing. They were then evaluated with regards to the production of lactic acid, H2O2, bacteriocins, and their capacity to adhere to epithelial cells. Results: The predominant species found were L. crispatus (in 30.1% of the women), followed by L. jensenii (26.5%), L. gasseri (22.9%) and L. vaginalis (8.4%). The other species isolated were L. delbrueckii, L fermentum, L reuteri and L rhamnosus (two strains) and L. mucosae and L. salivarius (one strain). Only 20 out of 83 lactobacilli analyzed using the plate technique (in MRS agar with TMB) were found to be non-producers of H2O2. Thirty-seven lineages were selected and tested for their capacity to adhere to epithelial cells. Of these, 12
had an adhesion between 50% and 69% and 10 equal or superior to 70%. The remainder had little capacity to adhere to epithelial cells. None of the strains tested produced bacteriocins. Conclusions: L. crispatus, L. jensenii and L. gasseri were the most prevalent species isolated in selective culture media and identified through molecular techniques. Besides their frequencies, they also presented best H2O2 production and lowest pH in culture media / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Tocoginecologia
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unicamp.br:REPOSIP/310509 |
| Date | 13 August 2018 |
| Creators | Brolazo, Eliane Melo |
| Contributors | UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS, Bahamondes, Luis Guillermo, 1946-, Camargo, Rodrigo Pauperio Soares, Maia, Edna Marina Cappi, Giraldo, Paulo César, Fernandes, Arlete Maria dos Santos |
| Publisher | [s.n.], Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Tocoginecologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 74f., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da Unicamp, instname:Universidade Estadual de Campinas, instacron:UNICAMP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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