Orientador: Luis Guillermo Bahamondes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T11:58:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brolazo_ElianeMelo_D.pdf: 580434 bytes, checksum: 24b8356368950df00b8a139f02ad0fef (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A microflora vaginal de mulheres saudáveis em idade reprodutiva é composta por uma variedade de bactérias aeróbias e anaeróbias, mas as espécies dominantes são os lactobacilos (bacilos de Döderlein), que exercem significante influência sobre a microbiota local. Além de restringir o crescimento de patógenos competindo pelo espaço e nutrientes, os lactobacilos produzem substâncias antimicrobianas como ácidos orgânicos, peróxido de hidrogênio (H2O2) e bacteriocinas. Esta atividade antagonista é importante na proteção contra várias infecções, principalmente a vaginose bacteriana (VB). Objetivos: Identificar as espécies de lactobacilos isolados do conteúdo vaginal de mulheres saudáveis e assintomáticas e determinar as espécies mais prevalentes e caracterizá-las quanto à produção de ácido láctico, peróxido de hidrogênio (H2O2) e sua capacidade de adesão às células do epitélio vaginal. Métodos: Foram isoladas 83 linhagens de lactobacilos de amostras de conteúdo vaginal de 135 mulheres, sem queixa de corrimento e com diagnóstico laboratorial negativo para infecções vaginais, acompanhadas no ambulatório de Planejamento Familiar da Faculdade de Ciências Médicas - UNICAMP. As linhagens isoladas foram identificadas por PCR multiplex e, quando necessário, submetidas ao sequenciamento do gene RNAr 16S. Foram então avaliadas quanto à produção de ácido láctico, de H2O2, bacteriocinas e a capacidade de adesão às células epiteliais. Resultados: A espécie predominante foi L. crispatus presente em 30,1% das mulheres, seguida de L. jensenii (26,5%), L. gasseri (22,9%) e L. vaginalis (8,4%). As outras espécies isoladas foram L. delbrueckii, L fermentum, L reuteri e L rhamnosus, com duas linhagens cada uma, e L. mucosae e L. salivarius com uma cepa cada. Das 83 linhagens de lactobacilos analisadas, apenas 20 não apresentaram produção de H2O2 detectável pela técnica de cultivo em agar MRS com TMB. Foram selecionadas 37 linhagens para teste de adesão às células epiteliais. Destas, 12 tiveram adesão entre 50% e 69% e 10 igual ou maior a 70%. As linhagens restantes apresentaram pouca capacidade de aderir às células epiteliais. Nenhuma das linhagens testadas produziu bacteriocinas. Conclusões: As espécies de lactobacilos mais prevalentes em mulheres sem vulvovaginites, isoladas em meio de cultura seletivo e identificadas por métodos moleculares, foram L. crispatus, L. jensenii e L. gasseri. Dentre as linhagens analisadas, além de mais frequentes, estas também foram as que atingiram menores valores de pH em meio de cultura e apresentaram melhor produção de H2O2 / Abstract: The vaginal microflora of healthy women is composed of a large variety of aerobic and anaerobic bacteria. The dominant species is a group of lactobacilli (Doderlein's bacillus), which has a significant effect on vaginal microbiota, curtailing the growth of pathogens competing for space and nutrients. The lactobacilli specie produces various antimicrobial substances that include organic acids, hydrogen peroxide (H202) and bacteriocins. Objectives: Identify the prevalence of the different species of lactobacilli isolated from the vagina of healthy asymptomatic women, determine the most prevalent species and characterize them regarding the production of lactic acid, hydrogen peroxide (H2O2) and their capacity to adhere to vaginal epithelial cells. Methods: Eightythree strains of lactobacilli were isolated from the vagina of 135 women, with no complaints of vaginal discharge and negative laboratory diagnosis for vaginal infection, who were being followed up at the Family Planning clinic of the Medical school, Unicamp. The isolates were identified using multiplex polymerase chain reaction (PCR) and, when necessary, 16S rRNA gene sequencing. They were then evaluated with regards to the production of lactic acid, H2O2, bacteriocins, and their capacity to adhere to epithelial cells. Results: The predominant species found were L. crispatus (in 30.1% of the women), followed by L. jensenii (26.5%), L. gasseri (22.9%) and L. vaginalis (8.4%). The other species isolated were L. delbrueckii, L fermentum, L reuteri and L rhamnosus (two strains) and L. mucosae and L. salivarius (one strain). Only 20 out of 83 lactobacilli analyzed using the plate technique (in MRS agar with TMB) were found to be non-producers of H2O2. Thirty-seven lineages were selected and tested for their capacity to adhere to epithelial cells. Of these, 12 had an adhesion between 50% and 69% and 10 equal or superior to 70%. The remainder had little capacity to adhere to epithelial cells. None of the strains tested produced bacteriocins. Conclusions: L. crispatus, L. jensenii and L. gasseri were the most prevalent species isolated in selective culture media and identified through molecular techniques. Besides their frequencies, they also presented best H2O2 production and lowest pH in culture media / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Tocoginecologia

Orientador: Maria Luiza Moretti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T06:00:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Menezes_DulcineaBlum_D.pdf: 1620753 bytes, checksum: 0d62ea2ae59bfb2f69d0243a4b9e4be5 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A inserção de cateter venoso central (CVC) representa um importante risco para as infecções sistêmicas nosocomiais, e para estas infecções, Staphylococcus epidermidis é o patógeno mais importante. Com o objetivo de analisar os perfis de DNA genômico, detectar a presença e expressão de gene responsável pela produção de biofilme e estudar a dinâmica da colonização, cepas de S. epidermidis obtidas de episódios de isolamento deste microrganismo em culturas microbiológicas de ponta de CVC e/ou hemoculturas foram comparadas com cepas coletadas da microbiota do paciente hospitalizado no Hospital das Clínicas da UNICAMP. Este estudo também objetivou analisar os procedimentos médico-hospitalares intervencionais destes pacientes. Pacientes com culturas microbiológicas de ponta de CVC (>15 UFC) e/ou hemoculturas positivas para S. epidermidis foram selecionados para a coleta de microbiota presente na pele e mucosa nasal, através de coleta local com zaragatoas umedecidas. As cepas de S. epidermidis foram analisadas através do método de PFGE; teste de sensibilidade a antimicrobianos; detecção da presença do gene ica, através da técnica de PCR e detecção de biofilme, através do método CRA. Fizeram parte deste estudo 247 cepas obtidas de 12 pacientes selecionados em 18 episódios estudados. Foram encontrados 26 distintos perfis genotípicos e 4 perfis fortemente relacionados. Em 10 episódios o mesmo perfil genotípico de DNA foi detectado simultaneamente em cepas clínicas e de microbiota, onde 6 destes episódios ocorreram quando o período de implantação da CVC foi superior a 15 dias. Nos 7 episódios em que não houve concordância entre os perfis genotípico de DNA em cepas clínicas e de microbiota, 5 destes episódios ocorreram igualmente em período inferior a 15 dias, não havendo diferença estatística entre os grupos. Por PFGE foram identificados 6 perfis genotípicos predominantes nas cepas de microbiota. Estes perfis representaram 68% (132/193) das cepas de microbiota, e um destes perfis se mostrou prevalente (77/193) nas cepas de microbiota. Em 10 episódios (8 pacientes), o perfil genotípico prevalente foi identificado compondo a microbiota. Foi comprovado, por comparação da diversidade dos perfis genotípicos, que durante o período de hospitalização o perfil geral da microbiota sofre mudanças de um perfil de diversidade genotípica policlonal para um perfil de diversidade oligoclonal, com predominância de um perfil genotípico. A mudança de diversidade genotípica foi relacionando a administração prévia de ciprofloxacina. As cepas com perfis genotípicos predominantes não apresentaram maior prevalência da presença do gene ica, em relação às cepas não predominantes, o que não foi justificado que cepas potencialmente produtoras de biofilme se sobrepusessem em relação às cepas desprovidas deste gene. Oito dos 12 pacientes apresentaram concomitante ou posterior infecção por bacilos Gram negativos, destes 2 foram a óbito por septicemia. De acordo com os resultados, nós concluímos que pacientes submetidos a longos períodos de hospitalização são colonizados por microbiota de diversidade oligoclonal de S. epidermidis e a colonização ou infecção de CVC por destas cepas, potencialmente produtoras de biofilme em contato com a corrente sanguínea, pode ser uma oportunidade para infecções posteriores por outros microrganismos devido a potencial produção de biofilme inerente a S. epidermidis / Abstract: Central vascular catheters (CVC) represent an important risk for nosocomial bloodstream infections and Staphylococcus epidermidis is the most important pathogen of these systemic infections. To analyze the genomic DNA profiles, to detect the presence and expression of the responsible gene for biofilm production and to study the colonization dynamic, S. epidermidis strains isolated from tip CVC and blood positive cultures were compared with the strains isolated from skin and nasal swab in patients hospitalized in a tertiary care university hospital, the Hospital das Clínicas of UNICAMP. It was analyzed the previous medical care proceedings that the same patients underwent. Patients with microbiologic cultures for S. epidermidis from blood and/or catheter tip (>15 CFU) were selected to have swabs from skin and nasal. S. epidermidis were typed using PFGE, antibiotic susceptibility testing, presence of ica gene detection, by PCR, and biofilm detection, by Congo red method, were performed. Twelve patients with 18 episodes of colonization or catheter-related infection were included in this study and 247 strains were analyzed. It was found 26 distinct genotypic profiles and 4 strongly related genotypic profiles. In 10 episodes, the same DNA profile was detected in clinical and in microbiota strains, 6 of them occurred when the period of catheter implantation were higher than 15 days. In 7 episodes, there was not concordance among genotypic profiles from clinical and microbiota strain, and 5 of them occurred when the period of catheter implantation were lower than 15 days, too. It was not found statistic difference between the groups. PFGE identified six predominant genotypic profiles that were present in 68 % (132/193) of microbiota strain, and one of them was prevalently present (77/193). The prevalent genotypic profile was found compounding the microbiota in 10 episodes (8 patients). It was proofed, by comparison of the diversity of genotypic profiles, that during the hospitalization period the microbiota general profile changes from the diversified genotypic profile (polyclonal) to a poorly diversified genotypic profile (oligoclonal), with a predominant genotypic profile. It found was related with the previous ciprofloxacin administration. The predominant DNA profiles strains did not presented higher prevalence according to the presence of ica gene when comparing to non predominant strains, what it was not justified that potentially biofilm producers can superpose over non ica strains. Eight of 12 patients presented concomitant or posterior infection by negative Gram rots, whose 2 were to obit by sepsis. According to the results, we concluded that patients with long-term hospitalization were previously colonized by oligoclonal-diversified microbiota S. epidermidis and CVC colonization or infection by this agent, potentially biofilm producer present at bloodstream can be an opportunity to other microorganism posterior infections, due to potential biofilm production inherent to S. epidermidis / Doutorado / Ciencias Medicas / Doutor em Clínica Médica