Orientador: Tomomasa Yano / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:07:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2003 / Resumo: A enterotoxina citotóxica de Aeromonas hydrophila (Ent-ctx) possui múltiplas atividades biológicas. Entre elas, está a capacidade de lisar eritrócitos, causar danos irreversíveis nas membranas celulares e induzir acúmulo de fluido no intestino em modelo animal. Neste estudo, as hemácias de rato foram mais sensíveis a ação citolítica da Entctx quando comparadas às outras hemácias. A IgG purificada anti-Ent-ctx foi capaz de neutralizar o efeito citotóxico da Ent-ctx, apresentando títulos maiores que 1: 16384, revelando uma única banda com um peso molecular aproximado de 54 kDa na análise do imunoblotting. A Ent-ctx causou perda de junção intercelular, crescente condensação nuclear, a fragmentação e eliminação de corpos nucleares e citoplasmáticos em linhagens celulares Vero (rim de macaco verde africano) e HT29 (epitélio intestinal humano). As análises ultraestruturais, assim como análise eletroforética em gel de agarose, reação de Feulgen, e a metodologia do TUNEL confirmaram que a Ent-ctx induziu apoptose em HT29. Os danos ocasionados pela Ent-ctx foram irreversíveis, constatando-se que a perda da função mitocondrial nas células HT29 precede a destruição da membrana celular. Estudos in vivo em células epiteliais intestinais de rato revelaram severa desorganização estrutural, levando a destruição de enterócitos, alterações em organelas intracelulares e a perda do arranjo das células do tecido conectivo. A presença de um infiltrado inflamatório difuso constituído por eosinófilos e neutrófilos foi constatada nas análises microscópicas. Através da técnica de PCR não foram detectados os genes responsáveis pela enteropatogenicidade em E. coli (L T-I, STa, STb) na amostra de A. hydrophila produtora da Ent-ctx. Neste estudo, as alterações morfológicas observadas em células intestinais epiteliais in vitro e in vivo, sugerem que a Ent-ctx está relacionada com a enteropatogenicidade de A. hydrophila / Abstract: The cytotoxic enterotoxin secreted by Aeromonas hydrophila (Ent-ctx) produces hemolytic and cytotoxic activities and possesses the ability to evoke a fluid secretory response in a ligated intestinal loop model, amongst other biological activities. In this study, rat erythrocytes were the most sensitive to the hemolytic activity. The cytopathic effects were neutralized using antiserum purified against the cytotoxin of A. hydrophila (titer > 1 :16384). The immunoblotting analysis revealed one only band with molecular weight of 54 kDa. Vero (African green monkey kidney) and HT29 (human epithelial intestinal) cells treated with the Ent-ctx became round and lost their adhesion to each other and to the substrate. Cytoplasmic blebbing, nuclear condensation, fragmentation and formation of apoptotic bodies also occurred. Intemucleosomal DNA fragmentation was detected by TUNEL labeling, Feulgen staining in situ and agarose gel electrophoresis. These results confirmed that the Ent-ctx of A. hydrophila induces apoptosis in HT29. The cytotoxic response of this enterotoxin was irreversible and progressive showed that the lost of mitochondrial function come first that destruction of membrane permeability. In vivo studies revealed a dramatic structural disorganization, leading organelles damage, degeneration of epithelial cells and lost of the connective tissue in rat epithelial intestinal cells. Microscopic observations showed migration of eosinophils and neutrophils through the intestinal epithelium. Using L T-I, STa, and STb of E.coli as probe no homology to the whole cell DNA of A.hydrophila (AH 191) strain was detected on PCR analyses. These alterations induced by the cytotoxic enterotoxin of A. hydrophila, suggest that mechanism of this toxin could be associated to the enteropathogenicity involving A.hydrophila strains / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unicamp.br:REPOSIP/314708 |
| Date | 16 June 2003 |
| Creators | Falcon Marquez, Rosabel |
| Contributors | UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS, Yano, Tomomasa, 1941-, Freitas-Almeida, Angela Correa de, Lopes, Carlos Alberto de Magalhães, Arns, Clarice Weis, Aoyama, Hiroshi, Carbonell, Gleize Villela, Marangoni, Sérgio |
| Publisher | [s.n.], Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia, Programa de Pós-Graduação em Biologia Funcional e Molecular |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 66f. : il., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da Unicamp, instname:Universidade Estadual de Campinas, instacron:UNICAMP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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