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Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Os estudos das alterações de componentes da matriz extracelular
(MEC) auxiliam na compreensão da fisiopatologia do desenvolvimento dos
tumores. A investigação e identificação de novos marcadores moleculares em
amostras de tecidos, sangue ou urina para o estadiamento da doença e melhor
informação do prognóstico também ajuda na descoberta de moléculas alvo para
novas alternativas de tratamento com menor toxicidade e maior eficiência.
Objetivos: Identificar e quantificar glicosaminoglicanos e isoformas de
heparanases nos tecidos tumorais e não neoplásicos de pacientes com
carcinoma de células renais e glicosaminoglicanos sulfatos e ácido hialurônico
na urina de pacientes com carcinoma de células renais comparando-se com
indivíduos saudáveis. Métodos: Este estudo foi constituído da análise de 24
pacientes submetidos à nefrectomia radical ou parcial apresentando diagnóstico
anatomopatológico de carcinoma de células renais, sendo quantificada a
expressão da heparanase-1 (HPA1) por RT-PCR semi-quantitativo e RT-PCR
em tempo real em amostras de tecido de carcinoma de células renais (tecido
tumoral e não neoplásico). A expressão das isoformas de heparanases (HPA1 e
HPA2) foi analisada utilizando imunohistoquímica. O perfil de
glicosaminoglicanos sulfatados foi identificado e quantificado em 11 fragmentos
de tecidos tumorais e tecidos não neoplásicos de carcinoma de células renais,
utilizando eletroforese em gel de agarose. Os glicosaminoglicanos sulfatados e
ácido hialurônico também foram analisados em amostras de urina dos pacientes
com carcinoma de células renais, comparando-se com amostras de indivíduos saudáveis. Resultados: Os tecidos tumorais apresentaram aumento significativo
da expressão da heparanase-1 (HPA1) comparativamente com os tecidos não
neoplásicos, respectivamente, (3,99 ± 0,25) e (2,09 ± 0,20), (P < 0,05). A
análise imunohistoquímica demonstrou que ambas isoformas HPA1 e HPA2,
encontram-se expressas em tecido tumoral e não neoplásico de carcinoma de
células renais. Entretanto, HPA1 apresenta aumento significativo de
imunomarcação em tecido tumoral quando comparado com tecido não
neoplásico (P < 0,002). Tal resultado não foi observado para a isoforma HPA2.
Os resultados sugerem que a isoforma enzimaticamente ativa de 50 kDa da
HPA1, identificada com o anticorpo HPA1 C20 parece ser a isoforma
diferencialmente expressa nos tumores de células renais. Os tecidos tumorais
apresentaram significativa diminuição na quantidade de heparam sulfato e
dermatam sulfato e aumento do condroitim sulfato comparativamente com os
tecidos não neoplásicos de carcinoma de células renais, respectivamente, HS
(3,6 ± 3,5) e (17,6 ± 20,5), (P < 0,007); DS (16,9 ± 21,7) e (44,2 ± 28,5), (P
< 0,04); CS (50,6 ± 37,2) e (10,0 ± 9,4), (P < 0,001). As análises de
glicosaminoglicanos sulfatados urinários e ácido hialurônico entre os pacientes
com carcinoma de células renais e indivíduos saudáveis não apresentaram
diferenças estatísticas significantes. Conclusão: HPA1 e o condroitim sulfato
que essencialmente encontram-se aumentados nos tecidos tumorais sugerem
que tais moléculas possam estar envolvidas com modificações e remodelação
da matriz extracelular podendo participar do processo de desenvolvimento dos tumores de células renais, portanto, servir como marcadores e/ou alvo de
terapias anti-tumorais em estudos futuros / Introduction: The studies of extracellular matrix (ECM) alterations can be useful
to understand the physiopathology of tumor development. The research and
identification of new molecular markers in the tissues, blood and urine samples to
perform a better diagnostic and prognostics can also help to discover new target
molecules for alternative treatment with less toxicity and more efficiency.
Objectives: Identify and quantify glycosaminoglycans and heparanases isoforms
in the tumor tissues and non neoplasic tissues from renal cell carcinoma patients
and sulfated glycosaminoglycans and hyaluronic acid in the urine samples from
renal cell carcinoma patients compared to healthy individuals. Methods: This
study evaluated 24 patients subjected to radical or partial nephrectomy with
previous renal cell carcinoma diagnostic from anatomophatology. Heparanase-1
(HPA1) expression was quantified by semi-quantitative RT-PCR and real time
RT-PCR, using renal cell carcinoma samples (tumor and non neoplasic tissues).
Heparanases isoforms (HPA1 and HPA2), were also analyzed by
imunohistochemistry. Sulfated glycosaminoglycans profile had been identified
and quantified in 11 tumor and non neoplasic samples from renal cell carcinoma
patients using agarose gel electrophoresis. Sulfated glycosaminoglycans and
hyaluronic acid were also analyzed in urine samples from renal cell carcinoma
patients compared to the healthy individuals’ samples. Results: There was a
significant higher heparanase-1 (HPA1) expression in the tumor tissues
compared with the non neoplasic tissues, respectively, (3.99 ± 0.25) and (2.09 ±
0.20), (P < 0.05). Imunohistochemistry analysis had shown that both HPA1 and HPA2 isoforms were expressed in the tumor and non neoplasic
tissues from renal cell carcinoma patients. However, HPA1 presents a
significant higher immunolabeling in the tumor tissue compared to the non
neoplasic tissue (P < 0.002). The same result was not observed for HPA2
isoform. Taken together the results suggest that the enzymatically active
50 kDa isoform of HPA1, identified using HPA1 C20 antibody, seems to be
the isoform diferentially expressed in renal cell tumors. Tumor tissues
presented significant decrease of heparan sulfate (HS) and dermatan
sulfate (DS) and higher chondroitin sulfate(CS), compared to the non
neoplasic renal cell carcinoma tissues, respectivelly, for HS (3.6 ± 3.5) and
(17.6 ± 20.5), (P < 0.007); DS (16.9 ± 21.7) and (44.2 ± 28.5), (P < 0.04);
CS (50.6 ± 37.2) and (10.0 ± 9.4), (P < 0.001). The analysis showed that
sulfated glycosaminoglycans and hyaluronic acid in the renal cell patients and
healthy individual urinary samples did not present any significant statistic
difference. Conclusions: HPA1 and chondroitin sulfate are essentially higher in
tumor tissues suggesting that these molecules could be involved with
extracellular matrix modifications and remodelling that participates into renal cell
tumor development, and consequently be used as markers and/or target for antitumor
therapy in future studies. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unifesp.br:11600/10468 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Batista, Lucas Teixeira e Aguiar [UNIFESP] |
| Contributors | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Pinhal, Maria Aparecida da Silva [UNIFESP] |
| Publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 129 p. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIFESP, instname:Universidade Federal de São Paulo, instacron:UNIFESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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