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Previous issue date: 2014-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / There is a great demand for new antifungals of different structural classes, acting selectively
on new cellular targets with fewer side effects, accordingly medicinal plants are excellent
sources for obtaining a wide variety of drugs. This study aimed to investigate the antifungal
activity of the plant extract Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenan and fitoquimicamente
characterize it and set its thermal profile. Shells Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenan
were collected in the semiarid Paraiba (7º22 '25 "S, 35 ° 59' 32" W), the extract obtained by
maceration, using a rotary evaporator and freeze region. For the Determination of Minimum
Inhibitory Concentration technique microdilution broth and microorganisms Candida
albicans (ATCC 18804), Candida krusei (ATCC 34135), Candida guillermondii (ATCC
6260), Candida parapsilosis (ATCC 22019), Candida tropicalis (ATCC 13803) and clinical
strains was used recently isolated from Candida albicans (LM 11, LM 70, LM 410). The
Determination of Minimum Fungicidal Concentration was performed by subculture on
Sabouraud dextrose agar plates. The action on the cell wall of Candida albicans was
investigated by determining the MIC of plant extract in the presence of sorbitol (0.8M), using
the microdilution technique. Through scanning electron microscopy, we evaluated the cellular
morphology of Candida albicans treated with the MIC of plant extract, the MIC of nystatin
suspension (100,000 UI) and free treatment. The combined effect of the two substances
(nystatin and vegetable extract Anadenanthera colubrina) studied was determined from the
microdilution technique - checkerboard for derivation of Fractional Inhibitory Concentration
Index (FIC Index) and by the method of counting viable cells (kinetics growth). In the latter,
the following different concentrations of the extract and nystatin products association (CIM;
CIM/4; CIM/8) were analyzed. Nonparametric tests Fridman and the Kruskal Wallis test (p
<0.05) were performed. In phytochemical screening, we determined the content of total
polyphenols, total flavonoids and condensed tannins by spectrophotometry. The thermal
profile was traced with the determination of termograviméricas curves (TG) and differential
scanning calorimetry (DSC). The toxicity was assessed by quantitation of erythrocyte lysis
suffering with different concentrations of plant extract (0.25, 0.5, 1, 2, 4 mg / ml). It was
observed that the A.colubrina have fungistatic potential against all tested strains pattern, and
fungicidal against recent clinical isolates of Candida albicans. An increase of 1 mg/ml to
8mg/ml of MIC in the presence of sorbitol suggests that this statement acts by modifying the
fungal cell wall. The SEM images show the reduction in the amount of yeast cells after
treatment with the plant extract and changes in the fungal cell wall. The FIC index was calculated at 0.375, indicating synergism between the nystatin and the plant extract. Kinetics
was observed maintaining the synergism between the products tested over time (p <0.05).
53.18% of total polyphenols were determined, 8.73% from 0.28% condensed tannins and
flavonoids. The TG curve A.colubrina extract showed the presence of three stages of thermal
decomposition, the more significant weight loss was observed between the extract
temperatures and 229,17ºC 657,39ºC with loss of 37.44%. The DSC curves of the extract
showed that the thermal processes occur at temperatures between 52,37 °C to 195,5°C. In
toxicity testing, none of the tested concentrations became effective cytotoxic concentration
50% (EC50). It is concluded that the plant extract from the bark of Anadenanthera colubrina
(Vell.) Brenan is a promising resource in getting a new drug for treatment of oral candidiasis. / Existe uma grande demanda por novos antifúngicos de diferentes classes estruturais, agindo
seletivamente sobre novos alvos celulares, com menos efeitos colaterais, nesse sentido as
plantas medicinais são excelentes fontes para obtenção de uma grande variedade de drogas.
Objetivou-se investigar a atividade antifúngica do extrato vegetal de Anadenanthera
colubrina (Vell.) Brenan, bem como caracterizá-lo fitoquimicamente e definir seu perfil
térmico. Foram coletadas cascas de Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenan na região do
semiárido paraibano (7º22' 25" S, 35º 59' 32"W), obtido o extrato através de maceração,
rotaevaporação e liofilização. Para a Determinação da Concentração Inibitória Mínima foi
utilizada a técnica de Microdiluição em Caldo e os microrganismos Candida albicans, (ATCC
18804), Candida krusei (ATCC 34135), Candida guillermondii (ATCC 6260), Candida
parapsilosis (ATCC 22019), Candida tropicalis (ATCC 13803) e cepas clínicas recentemente
isoladas de Candida albicans (LM 11, LM 70, LM 410). A Determinação da Concentração
Fungicida Mínima foi realizada através de subcultivos em placas contendo ágar Sabouraud
dextrose. A ação sobre a parede celular de Candida albicans foi investigada através da
determinação da CIM do extrato vegetal na presença de sorbitol (0,8M), utilizando a técnica
de microdiluição. Através de Microscopia Eletrônica de Varredura, avaliou-se a morfologia
celular de Candida albicans tratada com a CIM do extrato vegetal, a CIM da suspensão de
nistatina (100.000UI) e livre de tratamento. O efeito combinado das duas substâncias
(nistatina e extrato vegetal de Anadenanthera colubrina) estudadas foi determinado a partir da
técnica de microdiluição - checkerboard para derivação do Índice de Concentração Inibitória
Fracionada (Índice CIF) e através do método de contagem de células viáveis (cinética do
crescimento). Nessa última, foram analisadas as seguintes concentrações variadas do extrato,
nistatina e associação dos produtos (CIM/8; CIM/4; CIM). Foram realizados os testes não
paramétricos de Fridman e o teste de Kruskal Wallis (p<0,05). Na prospecção fitoquímica,
determinou-se o teor de polifenóis totais, de flavonoides totais e de taninos condensados
através de espectrofotometria. O perfil térmico foi traçado com a determinação das curvas
termograviméricas (TG) e calorimetria exploratória diferencial (DSC). A toxidez foi avaliada através da quantificação de hemácias que sofrem lise celular frente à diferentes concentrações
de extrato vegetal (0,25, 0,5, 1, 2, 4 mg/ml). Observou-se que a A.colubrina tem potencial
fungistático frente todas as cepas padrão testadas, e, fungicida frente aos isolados clínicos
recentes de Candida albicans. O aumento de 1mg/ml para 8mg/ml da CIM na presença de
sorbitol sugere que esse extrato age modificando a parede celular do fungo. As imagens em
MEV evidenciam a redução na quantidade de células fúngicas após o tratamento com o
extrato vegetal e alterações na parede celular fúngica. O índice de FIC calculado foi de 0,375,
indicando sinergismo entre a nistatina e o extrato vegetal. Na cinética, observou-se a
manutenção do sinergismo entre os produtos testados ao longo do tempo (p<0,05). Foram
determinados 53,18% de polifenois totais, 8,73% de taninos condensados e 0,28% de
flavonoides. A curva TG do extrato A.colubrina, mostrou a ocorrência de três etapas de
decomposição térmica, a perda de massa mais significativa do extrato foi observada entre as
temperaturas de 229,17ºC e 657,39ºC, com perda de 37,44%. As curvas DSC do extrato
mostraram que os processos térmicos ocorreram no intervalo de temperatura entre 52,37 ºC a
195,52ºC. No teste de toxidez, nenhuma das concentrações testadas chegou a ser a
concentração citotóxica efetiva 50% (EC50). Conclui-se que o extrato vegetal da casca de
Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenan é um recurso promissor na obtenção de um novo
fármaco para tratamento de candidose oral.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.bc.uepb.edu.br:tede/2354 |
| Date | 29 July 2014 |
| Creators | Rocha, Eveline Angélica Lira de Souza Sales |
| Contributors | Costa, Edja Maria Melo de Brito, Santos, André Luis Souza dos, Medeiros, Ana Claudia Dantas de |
| Publisher | Universidade Estadual da Paraíba, Programa de Pós-Graduação em Odontologia - PPGO, UEPB, Brasil, Pró-Reitoria de Pós-Graduação e Pesquisa - PRPGP |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEPB, instname:Universidade Estadual da Paraíba, instacron:UEPB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 188746850794111162, 600, 600, 600, 600, 600, 524871450381110278, -2070498469879244349, 2075167498588264571, -2555911436985713659 |
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