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Previous issue date: 2008-03-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / 8(17),12e,14-labdatrien-18 oic acid (labdane-302), is a diterpene isolated from the
stem bark of Xylopia langsdorfiana A. St.-Hil. & Tul. In a preliminary study, Ribeiro
(2003) demonstrated that labdane-302 inhibited the phasic contractions induced
by carbachol (CCh) or histamine (IC50 = 1.7  0.5 and 0.9  0.2 x 10-5 M,
respectively) on guinea-pig ileum. The aim of the present study was to investigate
the spasmolytic action mechanism of labdane-302 in that organ. Isometric and
isotonic contractions were monitored, and the parameters of relative potency and
efficacy were determined from cumulative concentration-response curves.
Labdane-302 inhibited (pD´2 = 4.9  0.2; r2
= 0.8  0.1) the cumulative
concentration-response curves to histamine, and these were shifted to the right, in
a non-parallel manner (Schild plot slope = 4.2  1.4), with depression of the
maximal effect (Emax), suggesting a noncompetitive antagonism. Labdane-302
relaxed, in an equipotent manner, the ileum pre-contracted with KCl, CCh or
histamine, suggesting that this diterpene could be acting on Cav. This assumption
was confirmed by observation that labdane-302 antagonized the CaCl2 induced
contractions in the depolarizing medium without Ca2+ (pD´2 = 5.3  0.1;
r2
= 0.5  0.05 ), with shift of the concentration-response curve to the right, in a
non-parallel manner (Schild plot slope = 2.6  0.5), with depression of Emax. As in
the guinea-pig ileum the major CaV subtype is the Cav 1, we decided to
investigated its role in the action mechanism of labdane-302, and was verified that
the diterpene relaxed (EC50 = 3.6  0.8 x 10-5 M) the ileum pre-contracted with
S-(-)-Bay K8644, a selective agonist of the Cav1. As the potent relaxing of
labdane-302 was no different when ileum pre-contracted with KCl or
S-(-)-Bay K8644, it is suggestive of indirect blockade of the Cav1. Since K+
channels play a major role in the regulation of membrane potential and modulation
of CaV, we decided to investigate the participation of K+ channels in the
spasmolytic action of labdane-302. The relaxant potency of labdane-302
(EC50 = 1.5  0.3 x 10-5 M) was decreased on 2.4 times in the presence of CsCl, a
non-selective K+channels blocker (CE50 = 3,5  0,6 x 10-5 M), suggesting a
possible involvement of the K+ channels in the spasmolytic effect caused by
labdane-302. In order to verify which subtypes of K+ channels could be involved
we used selectives blockers of these channels. The observation that
4-aminopyridine, a selective blocker of Kv, and that TEA+ 1 mM, a selective
blocker of the BKca did not change the relaxant effect of labdane-302 suggests that
KV and BKca are not involved in its action mechanism. On the other hand, the log
concentration-response curve induced by labdane-302 was shifted to the right in
the presence of apamine, selective blocker of the SKCa, (EC50 = 3.3  0.4 x 10-5 M)
or glibenclamide, selective blocker of the KATP, (EC50 = 3.2  0.3 x 10-5 M),
suggesting the involvement of SKCa and KATP in the spasmolytic action mechanism
induced by labdane-302 on guinea-pig ileum. In the presence of aminophylline the
potency of labdane-302 was increased (EC50 = 0.4 ± 0.03 x 10-5 M), which indicate
participation of cyclic nucleotides. These results suggest that the relaxant effect of
labdane-302 on guinea-pig ileum, involves the activation of the SKCa and KATP with
the consequent blocking of Cav-L and involvement of the cyclic nucleotides. / O ácido 8(17),12e,14-labdatrieno-18-óico (labdano-302) é um diterpeno isolado
das cascas do caule de Xylopia langsdorfiana A. St.-Hil. & Tul. Em estudos anteriores Ribeiro (2003) demonstrou que o labdano-302 inibiu as contrações fásicas induzidas por carbacol (CCh) e histamina (CI50 = 1,7  0,5 e
0,9  0,2 x 10-5 M, respectivamente) em íleo de cobaia. O objetivo desse estudo
foi investigar o mecanismo de ação espasmolítica do labdano-302 neste órgão. As
contrações isométricas e isotônicas foram monitoradas e os parâmetros de
potência e eficácia relativas foram determinados a partir de curvas de
concentrações-resposta cumulativas. O labdano-302 inibiu (pD´2 = 4,9  0,2;
r2
= 0,8  0,1) as curvas cumulativas à histamina e estas foram desviadas para
direita, de forma não paralela ( slope de Schild = 4,2  1,4) e com redução do
Emax, sugerindo um antagonismo não competitivo. O labdano-302 relaxou, de
maneira equipotente, o íleo pré-contraído com KCl, CCh ou histamina sugerindo
que este diterpeno deve estar agindo Cav. Essa sugestão foi confirmada pelo fato
do labdano-302 ter antagonizado as contrações induzidas por CaCl2 em meio
despolarizante nominalmente sem Ca2+ (pD´2 = 5,3  0,1; r2
= 0,5  0,05 ), com
desvio da curva concentrações-resposta para direita, de forma não paralela
( slope de Schild = 2,6  0,5) e com redução do Emax. Como em íleo de cobaia o
CaV mais expresso é o Cav 1, decidiu-se investigar a sua participação no
mecanismo de ação do labdano-302 e foi verificado que o diterpeno relaxou
(CE50 = 3,6  0,8 x 10-5 M) o íleo pré-contraído com S-(-)-Bay K8644, um ativador
seletivo dos Cav1. Como a potência relaxante do labdano-302 não foi diferente
quando o órgão era pré-contraído com KCl ou S-(-)-Bay K8644, isto é sugestivo
de bloqueio indireto dos Cav1. Uma vez que os canais de K+ desempenham um
papel chave na regulação do potencial de membrana e modulação dos CaV,
decidiu-se investigar a participação dos canais de K+ na ação espasmolítica do
labdano-302. A potência relaxante de labdano-302 (CE50 = 1,5  0,3 x 10-5 M) foi
reduzida em aproximadamente 2,4 vezes na presença de CsCl, bloqueador não
seletivo dos canais de K+ (CE50 = 3,5  0,6 x 10-5 M), sugerindo a participação de
canais de K+ no efeito do labdano-302. Para verificar qual(is) canal(is) de K+
estariam envolvidos usou-se bloqueadores seletivos desses canais. O fato da
4-aminopiridina, bloqueador seletivo dos Kv, e do tetraetilamônio 1 mM,
bloqueador seletivo dos BKca não alterar o efeito relaxante do labdano-302 indica
que os KV e os BKca não estão envolvidos em seu mecanismo de ação.
Entretanto, a curva de relaxamento induzida pelo labdano-302 foi desviada para
direita na presença de apamina, um bloqueador seletivo dos SKCa
(CE50 = 3,3  0,4 x 10-5 M) ou de glibenclamida, um bloqueador seletivo dos KATP,
(CE50 = 3,2  0,3 x 10-5 M), sugerindo o envolvimento dos SKCa e dos KATP no
mecanismo de ação espasmolítica do labdano-302 em íleo isolado de cobaia. Na
presença de aminofilina, a potência do labdano-302 foi aumentada
(CE50 = 0.4 ± 0.03 x 10-5 M), o que indica a participação de nucleotídeos cíclicos.
Esses resultados sugerem que o efeito relaxante do labdano-302 em íleo de
cobaia, envolve a ativação dos SKCa e KATP com o conseqüente bloqueio de Cav-L
e o envolvimento de nucleotídeos cíclicos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.biblioteca.ufpb.br:tede/6754 |
| Date | 11 March 2008 |
| Creators | Macêdo, Cibério Landim |
| Contributors | Silva, Bagnolia Araujo da |
| Publisher | Universidade Federal da Paraíba, Programa de Pós Graduação em Produtos Naturais e Sintéticos Bioativos, UFPB, BR, Farmacologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFPB, instname:Universidade Federal da Paraíba, instacron:UFPB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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