Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1
417689.pdf: 446640 bytes, checksum: ad192136c1369a936420f7ce2238c5eb (MD5)
Previous issue date: 2009-08-26 / A tuberculose ? uma das principais causas de morte ao redor do mundo envolvendo um ?nico agente infeccioso, o Mycobacterium tuberculosis. A severidade desta epidemia global ? exacerbada pela co-infec??o com o HIV, que alterou drasticamente a epidemiologia da mesma, causando um aumento na din?mica de transmiss?o, morbidade e mortalidade dos infectados, e com o surgimento de cepas multi-resistentes a drogas. No Brasil, praticamente um milh?o de pessoas est? infectado. Com o avan?o da gen?tica e biologia molecular, diversos tipos de m?todos laboratoriais v?m sendo utilizados para o r?pido diagn?stico e estudo da patogenicidade de doen?as infecciosas de diversos microorganismos. A disponibilidade de seq??ncias gen?micas de um grande n?mero de microrganismos patog?nicos prover? uma melhor compreens?o de sua gen?tica evolutiva, virul?ncia e intera??es com o hospedeiro. O presente estudo tratou da implementac?o de um teste para detecc?o e quantifica??o absoluta de Micobacterium sp. a partir do emprego da rea??o em cadeia da polimerase associada a fluoresc?ncia. Para tanto, o gene da enoil-ACP redutase NADHdependente (inhA) foi selecionado como gene identificador e primers e sonda marcada com fluor?foro (TaqMan?) foram desenhados. Padr?es para quantifica??o absoluta foram produzidos a partir da clonagem da sequencia identificadora em plasm?dios, sendo posteriormente empregados em ensaios para quantificac?o de amostras de DNA isoladas de escarro de pacientes portadores de tuberculose e c?lulas de M. tuberculosis em cultura. Os resultados mostraram que o sistema utilizando a inhA como gene identificador nas condi??es implementadas foi capaz de amplificar de 106 a 101 c?lulas de M.tuberculosis em cultura. Comparativamente ao m?todo da espectrofotometria, o ensaio em tempo real empregando o gene da inhA foi mais sens?vel, apresentando menor varia??o em n?mero absolutos. Amostras de DNA (n=13) isoladas de escarro de pacientes portadores de tuberculose de ++ e +++ foram submetidas ao ensaio e foram postivamente detectadas com varia??o de tr?s ordens de magnitude. Amostras de indiv?duos controle saud?veis n?o apresentaram sinal positivo, atestando a especificidade do sistema.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2.pucrs.br:tede/5355 |
| Date | 26 August 2009 |
| Creators | D?Oca, Adriano Amaral Montes |
| Contributors | Santos, Di?genes Santiago |
| Publisher | Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul, Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular, PUCRS, BR, Faculdade de Bioci?ncias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da PUC_RS, instname:Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, instacron:PUC_RS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 8198246930096637360, 600, 600, 36528317262667714 |
Page generated in 0.0018 seconds