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Previous issue date: 2012-03-03 / Tuberculosis (TB) remains a leading cause of death worldwide, due to the great adaptability of the bacillus, which can survive in various conditions inside and outside the human host. Previous studies showed evidence that polymorphisms in P2X7 receptor are e associated with increased risk of TB. The present study aimed to analyze the role of purinergic P2X7 receptor in M. tuberculosis infection and host interaction mechanisms in vitro and in vivo. The macrophage murine cell line RAW 264.7 was used for in vitro experiments. . Our results demonstrated that treatment of RAW 264.7 cells with ATP (3 and 5 mM) resulted in a statistically significant reduction of counting colony forming units (CFUs). Male wild-type C57BL/6 (wild-type) and P2X7 receptor KO (P2X7R-/-) mice (25 30 g) were used throughout this study for in vivo. Immunohistochemistry showed that the purinergic P2X7 receptor expression was found significantly augmented in the lungs of mice infected with M. tuberculosis. Furthermore, M. tuberculosis-infected P2X7R-/- mice showed an increase of M. tuberculosis burden in lung tissue, when compared to infected wild type mice. Infected mice showed a marked increase in the spleen weight, in comparison to non-infected animals, indicating the occurrence of splenomegaly. In P2X7R-/- spleens, we observed a significant decrease in the populations of Treg (CD4+Foxp3+), T cells (CD4+, CD8+CD25+ and CD4+CD25+), dendritic cells (CD11c+) and B220+ cells. However, a significant increase in CD11b+ cells was observed in P2X7R-/- mice, when compared to wild-type animals. In the lungs, P2X7R-/- M. tuberculosis-infected mice exhibited pulmonary infiltrates containing an increase of Treg cells (CD4+Foxp3+), T cells (CD4+ and CD8+) and a decrease in the B220+ cells, when compared with wild-type M. tuberculosis-infected mice. The findings observed in the present study provide novel evidence on the role of P2X7 receptors in the pathogenesis and control of tuberculosis. Whether selective agonists or antagonists of this receptor might be useful for improving TB complications remains a matter to be investigated. / A tuberculose (TB) continua sendo uma das principais causas de morte no mundo, devido ? grande capacidade de adapta??o do bacilo que pode sobreviver em diferentes condi??es dentro e fora do hospedeiro humano. Estudos pr?vios mostraram evid?ncias de que polimorfismos no receptor purin?rgico P2X7 est?o associados ao aumento da suscetibilidade ? TB. O presente estudo objetivou analisar o papel do receptor purin?rgico P2X7, na infec??o por M. tuberculosis em camundongos, e os poss?veis mecanismos de intera??o do receptor P2X7 com o hospedeiro, em modelos in vivo e in vitro. Nos experimentos para avalia??o da viabilidade da micobacteria intracelular in vitro foi utilizada a linhagem de macr?fagos murinos, RAW 264.7. Nossos resultados demonstraram que o tratamento das c?lulas RAW 264.7 com ATP (3 e 5 mM) resultou em uma redu??o estatisticamente significativa da contagem de unidades formadoras de col?nias (CFUs). Nos experimentos in vivo foram utilizados camundongos machos C57BL/6 (tipo selvagem) e camundongos knockout para o receptor P2X7 (P2X7R-/-) (25-30 g). Os resultados com imuno-histoqu?mica mostraram que a express?o do receptor purin?rgico P2X7 foi encontrada significativamente aumentada nos pulm?es de camundongos infectados com M. tuberculosis. Al?m disso, camundongos P2X7R-/- infectados com M. tuberculosis mostraram um aumento da carga da micobacteria no tecido pulmonar, quando comparado com camundongos do tipo selvagem infectados. Camundongos infectados mostraram um aumento marcante no peso do ba?o quando comparado com animais n?o infectados, indicando a ocorr?ncia de esplenomegalia. Em ba?os de camundongos P2X7R-/-, observou-se uma diminui??o significativa nas popula??es de Treg (CD4 + Foxp3 +), c?lulas T (CD4 +, CD8 + CD25 + e CD4 + CD25 +), c?lulas dendr?ticas (CD11c +) e c?lulas + B220. No entanto, houve um aumento significativo de c?lulas CD11b + em camundongos P2X7R-/-, quando comparados aos animais do tipo selvagem. Nos pulm?es, camundongos P2X7R-/- infectados com M. tuberculosis apresentaram infiltrado pulmonar contendo um aumento de c?lulas Treg (CD4 + Foxp3 +), c?lulas T (CD4 + e CD8 +) e uma diminui??o nas c?lulas + B220, quando comparado com camundongos do tipo selvagem infectados com M. tuberculosis. Portanto, os resultados observados no presente estudo fornecem novas evid?ncias sobre o papel dos receptores P2X7 na patog?nese e controle da tuberculose. O uso de agonistas ou antagonistas seletivos deste receptor como uma ferramenta terap?utica continua sendo uma quest?o a ser investigada.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2.pucrs.br:tede/5440 |
| Date | 03 March 2012 |
| Creators | Santos Junior, Andr? Avelino dos |
| Contributors | Morrone, Fernanda Bueno |
| Publisher | Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul, Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular, PUCRS, BR, Faculdade de Bioci?ncias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da PUC_RS, instname:Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, instacron:PUC_RS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 8198246930096637360, 600, 600, 36528317262667714 |
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