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Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os primatas neotropicais dos gêneros Saimiri e Aotus são modelos recomendados pela OMS para estudos experimentais da malária humana, pois são susceptíveis à infecção por plasmódios humanos e reproduzem de forma relativamente confiável a patologia e a imunidade observadas em humanos. Eles apresentam, entretanto, uma importante limitação: a necessidade de se esplenectomizar o animal para que as parasitemias sejam elevadas e consistentes. O objetivo desse estudo foi avaliar a influência da administração de lipossomo-clodronato (LC), utilizado para depletar monócitos/macrófagos em vários modelos experimentais, na infecção por Plasmodium falciparum em Saimiri sciureus. Realizou-se um experimento in vitro utilizando cultivo de esplenócitos de Saimiri, incubados em presença ou não de LC, quantificando-se a depleção de macrófagos por citometria de fluxo. Primeiro experimento: foram utilizados seis animais não esplenectomizados divididos em dois grupos que receberam 1mL PBS ou de LC (5mg/mL) a partir do dia 0 de infecção com inóculo contendo 106 hemácias parasitadas com P. falciparum (cepa FUP). Segundo experimento: foram utilizados 14 animais não esplenectomizados divididos em seis grupos - três grupos não infectados, com dois animais cada, que receberam 1mL PBS, ou 0,5mL ou 1mL de LC e três grupos infectados no dia 0 que receberam as mesmas administrações; sendo que o grupo que recebeu PBS tinha dois animais e os grupos que receberam LC tinham três animais cada. Em ambos os experimentos as administrações foram por via intravenosa duas vezes por semana a partir de dia 0. Após eutanásia, foram realizados exames histopatológicos e ensaio de expressão de citocinas em células esplênicas
No ensaio in vitro o LC induziu uma citotoxicidade dose-dependente de monócitos/macrófagos. No primeiro experimento o grupo tratado com LC apresentou aumento na parasitemia alcançando valores superiores a 20% no d11 e requerendo tratamento. O grupo tratado com PBS apresentou parasitemia de 0,029% a 8,15% e foi capaz de controlar espontaneamente a infecção no d18. No segundo experimento os animais infectados que receberam 0,5mL LC apresentaram parasitemias mais elevadas (pico entre 16,1% e 26,7% entre d10 e d14) do que os outros grupos (grupo PBS - picos entre 6,3% e 17,7% entre d12 e d13, e grupo 1mL LC \2013 pico entre 4,8% e 8,8% entre d11 e d15). Em todos os animais infectados, a temperatura foi relacionada com a presença de parasitemia e a hemoglobina e o hematócrito diminuíram alcançando valores mínimos quando parasitos já não são mais detectáveis na circulação. Os animais toleraram clinicamente a administração de LC, mas apresentaram sinais histopatológicos de toxicidade hepática. Em conclusão, o LC é capaz de promover parasitemias mais altas em infecções de P. falciparum em primatas S. sciureus. A infecção esteve associada a evidências de depleção parcial de macrófagos como diferenças no tamanho dos baços e menor presença de ferro nos baços e fígados dos animais que receberam LC. Ensaios ainda precisam ser realizados para se estabelecer volumes mínimos funcionais e superar o problema da aparente toxicidade hepática / The WHO recommends
the
Neotropical primates of the genus
Saimiri
and
Aotus
as models
for experimental studies of human malaria. The
se monkeys
are susceptible to infection by
human
P
lasmodi
a
and reproduce relatively reliably the pathology and immunity observed in
man
. However, the
model has
a
s
limitation the need
of
splenectomy
for the obtention of high
and consistent parasitemias
. The aim was to evaluate the influence of
administration
of
clo
dronate
-
liposome (CL), used to deplete monocytes/macrophages in several experimental
models, in
Plasmodium falciparum
infected
Saimir
i
sciureus
. We conducted an experiment
using
in vitro
culture of spleen cells from
Saimiri
incubated
in the presence or abs
ence of
C
L
and quantifying the depletion of macrophages by flow cytometry.
Other
experiment
s were:
Exp. 1
: six non splenectomized animals were divided into two groups receiv
ing
1 mL
of
PBS
or
1 mL of
C
L
(5mg/mL) from
the
d
ay
0
of
infection with 10
6
P. falc
iparum
(FUP strain)
parasitized erythrocytes
.
Exp. 2
: 14 non
-
splenectomized animals were divided in six groups
-
three non
-
infected groups
,
with two animals each, receiv
ing
1mL PBS, 0.5 mL or 1 mL CL
;
and three
infected groups receiving the same injections
. The group
that received PBS
had
two animals
each;
and the groups that received CL
had
three animals
each
. In both
experiments the
injections were intravenous,
two times a week from d0. After euthanasia,
histopathological examination and testing of cytoki
ne expression in splenic cells were
performed.
In vitro
assay
: the
CL induced a dose
-
dependent monocyte
/ macrophage
cytotoxicity. In
Exp 1,
the CL treated
group showed an increase in parasitemia reaching
values
higher
than 20%
at
d11 and requir
ed
treatm
ent. T
he group treated with PBS showed
parasitemia
from 0.029
% to 8.15% and was able to spontaneously control the infection
by
d18. In
Exp 2,
the infected animals receiv
ing
0.5 ml CL showed higher parasitaemia (peak
s
between 16.1% and 26.7% between d10 and
d14) than the other groups (PBS group
-
peaks
between 6.3% and 17 7% between d12 and d13, and 1mL CL group
-
peak between 4.8%
and 8.8% between d11 and d15). In all infected animals, the temperature was related to the
presence of parasitaemia and hemoglob
in and hematocrit decreased
,
reaching minimum
values
during or after clearance of the parasite. The animals tolerated
clinically
the CL
administration
but showed
histopahological
signs of liver toxicity. Animals receiving CL
showed less iron in the spl
ee
n
, suggesting a decreased erythrophagocitosis
. In conclusion,
the CL is capable of promoting higher parasitemia in
P. falciparum
infect
ed
S. sciureus
primates. The infection was associated with evidence
s
of partial depletion of macrophages
,
such
as differe
nces in the spleen size
s
and
decreased
presence of iron in the spleens and
livers of animals receiv
ing
CL. However
,
more
tests still need to be conducted to
define the
lower
volum
es
of LC that are still
functional
,
to overcome the problem of
the
apparent l
iver
toxicity.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/13350 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Cunha, Janaiara Araujo |
| Contributors | Ferreira, Joseli de Oliveira, Pinto, Marcelo Alves, Alves, Francisco Acácio, Lima Júnior, Josué da Costa, Bozza, Marcelo Torres, Ribeiro, Claúdio Tadeu Daniel, Carvalho, Leonardo José de Moura |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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