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Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) representa um grave problema de saúde pública no Brasil e apesar dos recentes progressos, o tratamento ainda é um dos maiores desafios tanto em termos de efetividade clínica como de custo-benefício. A anemia hemolítica induzida pela ribavirina (RBV) é o principal efeito colateral no tratamento antiviral. Além dos fatores virais, fatores do hospedeiro têm papel fundamental no controle da infecção. Estudos recentes demonstraram que polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) nos genes da interleucina 28B (IL28B) estão fortemente associadas com a resolução espontânea (RE) da doença e com resposta virológica sustentada (RVS) e, no gene da inosina trifosfato pirofosfatase (ITPA) estão relacionados com a proteção contra a anemia. No gene IL28B, os genótipos CC no rs12979860, e TT no rs8099917 estão associados com a cura espontânea e com a resposta à terapia. No gene da ITPA, os genótipos CC no rs1127354 e AA no rs7270101 apresentam associação com a anemia. No entanto, a maioria dos métodos de identificação destes polimorfismos, atualmente disponíveis, é custosa. O objetivo geral deste trabalho foi determinar o perfil alélico dos genes IL28B e ITPA em amostras de pacientes com hepatite C, avaliar a associação dos polimorfismos do gene IL28B com resolução espontânea e terapêutica e, do gene da ITPA com a redução dos níveis de hemoglobina durante o tratamento antiviral. Neste trabalho, numa etapa inicial para o gene IL28B, quatro metodologias foram avaliadas em termos de especificidade, custo e tempo de execução: tetra-primer amplification-refractory mutation system-polymerase chain reaction (ARMS-PCR), polimorfismo no comprimento do fragmento de restrição (RFLP); reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) e sequenciamento nucleotídeo
Devido a próxima localização dos SNPs do gene ITPA, a genotipagem foi realizada por meio de sequenciamento nucleotídico. Um total de 281 amostras de sangue total de pacientes com infecção crônica pelo HCV foi estudado. Protocolos próprios para as técnicas ARMS-PCR e RFLP foram desenvolvidos e otimizados e, os resultados comparados com os do sequenciamento. Todos os métodos foram específicos, contudo o método ARMS-PCR apresentou os melhores resultados de acordo com a análise de custo-benefício. Em um segundo estudo, a frequência de polimorfismos do rs1127354 e rs7270101 do gene da ITPA foi avaliada em 200 pacientes com hepatite C crônica, e em 100 indivíduos saudáveis e, a associação com o desenvolvimento de anemia foi investigado em 97 pacientes que concluíram a terapia antiviral. A frequência global de distribuição alélica em rs7270101 e rs1127354 mostrou altas taxas dos genótipos AA (84,0%) e CC (94,3%), respectivamente, sugerindo que a coorte estudada possui uma grande propensão para o desenvolvimento de anemia induzida pela RBV. Ademais, constatamos uma diminuição progressiva de hemoglobina durante a terapia antiviral, sendo mais significante na 12ª semana e em pacientes do sexo masculino. No terceiro estudo, analisamos a associação entre os genótipos dos SNPs da IL28B com RE em 24 pacientes com hepatite aguda e em 111 pacientes crônicos com RVS tratados com PEG-IFN/RBV. O genótipo CC (rs12979860) e o genótipo TT (rs8099917) apresentaram associação com RE e o alelo C (rs12979860) apresentou forte associação (p=0,0045) com a RVS
Estes dados confirmaram a importância destes genótipos no controle da infecção. Os resultados obtidos neste trabalho são importantes para um melhor entendimento dos fatores do hospedeiro associados com a eliminação espontânea do vírus, com a RVS e com a anemia induzida pela ribavirina no tratamento antiviral da infecção pelo HCV / Hepatitis C virus (HCV)
i
nfection is a leading public health problem in Brazil
. D
espite
of
the
recent progress, the treatment is still a major challenge in terms of both clinical
-
and
cost
-
effectiveness. The
r
ibavirin
(RBV)
-
induced anemi
a
is the major
hematological
effect
of antiviral treatment. In addition to viral factors, the host factors play a fundamental role in
infection control
. Recent studies have shown that single nucleoti
de polymorphisms (SNPs)
in the
genes of interleukin 28B (
IL28B) and inosine triphosphate pyrophosphatase (ITPA)
are strongly associated with spontaneous
clearence
(
SC
) of the
virus,
with sustained
virologic response (SVR) and
with
protection against anemia. In the IL28B gene, the CC
genotype at rs12979860 and TT
genotype at rs8099917
are associated
with spontaneous
clearance of virus
and
with
response to therapy. In ITPA gene, CC genotype in rs1127354
and AA genotype at rs7270101
show association
with anemia. However, most of the
methods currently available
for i
dentifying these
polymorphisms
are
costly. The aim of this
study was to determine the allelic profile of IL28B and ITPA genes in samples from
patients with hepatitis C, evaluate the association of polymorphisms in IL28B gene
with
spontaneous and treatment
-
induced clearance of HCV
and
,
ITPA gene
, w
ith
development
of anemia
during antiviral therapy. In this work,
initially
for IL28 gene
, four techniques
were
evaluated in terms of specificity, cost and time of execution: tetra
-
primer amplification
refractory m
utation system
-
polymerase
-
chain reaction (ARMS
-
PCR), restriction fragment
length polymorphism (RFLP); chain reaction quantitative polymerase (qPCR) and direct
nucleotide sequencing
.
Due to SNPs
location
in ITPA gene, genotyping was performed by
nucleotide
sequencing.
A total of
281
whole blood
samples from patients with chronic HCV
infection w
ere
studi
ed. P
rotocols for ARMS
-
PCR and RFLP techniques
were
developed
and optimized and the results compared with
those of
sequencing. All methods were
specific; howe
ver, ARMS
-
PCR method showed the best results according to the cost
-
benefit analysis. In a second study, the frequency of rs1127354 and rs7270101
polymorphisms in ITPA gene was evaluated in 200 patients with chronic hepatitis C
, and in
100 healthy individua
ls, and the
association with the development of anemia was
investigated in 97 patients who completed the antiviral therapy. The overall allele
frequency distribution
at
rs7270101 and
at
rs1127354 showed high rates of AA genotypes
(84
.0
%) and CC genotypes
(
94.3%), respectively. These results
suggest
ed
that the cohort
has a high propensity for the development of
RBV
-
induced anemia
. Moreover, we
noticed
a progressive decrease in hemoglobin during antiviral therapy
,
more significant
ly
in the
12
th
weeks and in
male patients. In the third study, we analyzed the association between
the IL28B SNPs
with SC
in 24 patients with acute hepatitis and
in
111
chronic patients with
SVR
treated with PEG
-
IFN/
RBV. The CC genotype (rs12979860) and the TT genotype
(rs8099917) we
re associated with
SC
and the C allele (rs12979860) showed a strong
association (
p
= 0.0045) with the
S
VR
. The
data confirm the importance of these
genotypes in infection control. Th
ese results
are
also
important for a better understanding
of host factors
associated with spontaneous clearance of the virus, with SVR and with
RBV
-
induced anemia
in antiviral treatment
of HCV infection
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/13628 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Ramos, Nathália Motta Delvaux |
| Contributors | Araujo, Natalia Motta de, Amado, Luciane Almeida, Hoffmann, Luísa, Mello, Francisco Campello do Amaral, Pardini, Maria Inês, Lampe, Elisabeth |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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