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Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A incidência de dengue em todo o mundo tem aumentado nas últimas décadas. As respostas imunológicas exacerbadas desempenham um papel crucial para a sua fisiopatologia, tais como a indução do extravasamento plasmático, originado principalmente pela produção de uma cascata de citocinas inflamatórias e que podem induzir distúrbios de coagulação e alteração da permeabilidade vascular levando, eventualmente, a hemorragias graves e ao choque. Os produtos naturais, que têm propriedades imunomoduladoras descritas na etnofarmacologia, podem promover o controle da replicação viral e uma redução de citocinas que induzem a permeabilidade endotelial, o que poderia resultar em manifestações clínicas mais leves. O objetivo deste estudo foi investigar se compostos provenientes de uma planta medicinal poderiam modular a resposta imune inata associada com características imunopatológicas na infecção pelo vírus Dengue (DENV), usando um modelo de infecção in vitro com linhagens contínuas de hepatócitos humanos (Huh-7). Métodos e Resultados: Após infecção das células-alvo Huh-7 pelo DENV-2, as culturas foram tratadas com lotes únicos de extratos hidroalcoólicos de Uncaria sp. (UGC ou UGF), em diferentes concentrações. A taxa de células contendo antígenos virais foi determinada após períodos de incubação por imunofluorescência vírus específica e citometria de fluxo
A proteína viral não estrutural (NS1), indicativa de replicação viral, foi detectada nos sobrenadantes de cultura de células assim como as citocinas/quimiocinas MIF, IL-8 e IL-6, todas determinadas por ensaios de ELISA. Nos mesmos sobrenadantes, a produção do fator inflamatório óxido nítrico foi determinada indiretamente pela detecção de nitrito (Reação de Griess). Além disso, foram observados por citometria de fluxo alterações de viabilidade celular, apoptose e necrose, utilizando marcações pelo kit LIVE/DEAD e por Anexina V e Iodeto de propídio (PI). Foram observados efeitos antivirais de UGC e UGF, estatisticamente significantes, em comparação com células não tratadas, em concentrações que reduziram a frequência de células positivas para o antígeno viral e a quantidade de NS1 secretada. Efeitos imunomoduladores significantes foram mostrados pela redução da secreção de MIF, IL-8 e IL-6. Houve um aumento na produção de nitrito em culturas infectadas e tratadas com os dois extratos em diferentes concentrações, além de redução das taxas de apoptose e necrose, significantes. Conclusão: Existem compostos ativos na espécie vegetal que possuem capacidades antiviral e imunomoduladora. Sendo assim, mostraram-se potenciais candidatos para o desenvolvimento de um produto para tratamento da dengue. Apoiado por FIOCRUZ / RPT11D; IOC / PROEP; CNPq; FAPERJ; CAPES / The incidence of dengue worldwide has increased in recent decades. The exacerbated immune responses play a crucial role in the infection pathophysiology, such as the induction of plasma extravasation. It is caused mainly by the production of a cascade of inflammatory cytokines that can induce coagulation disorders and alterations in vascular permeability leading, eventually, to severe hemorrhages and shock. Natural products, which have immunomodulatory properties described in ethnopharmacology, can promote the control of viral replication and a reduction of cytokines that induce endothelial permeability, which could result in milder clinical manifestations. The aim of this study was to investigate whether compounds from a medicinal plant could modulate the innate immune response associated with immunopathological characteristics in infection Dengue virus (DENV), using an in vitro model of infection with continuous lines of human hepatocytes (Huh-7). Methods and Results: After infection of Huh-7 target cells by DENV-2, cultures were treated with single lots hydroalcoholic extracts of Uncaria sp. (UGC or UGF), at different concentrations. The rate of cells containing viral antigens was determined after incubation periods by virus-specific immunofluorescence and flow cytometry. Viral non-structural protein (NS1), indicative of viral replication, was detected in cell culture supernatants and cytokines/chemokines, MIF, IL-8 and IL-6, all determined by ELISA assays
In the same supernatants, the production of inflammatory factor nitric oxide was determined indirectly by nitrite (Griess reaction). Moreover, cells were analyzed by flow cytometry for cell viability changes, apoptosis and necrosis, by using LIVE/DEAD and Annexin V and Propidium iodide (PI) kits. Antiviral effects were observed by UGC and UGF, statistically significant, compared to untreated cells at concentrations that reduced the rate of viral antigen positive cells, and the amount of the secreted NS1. Significant immunomodulatory effects were shown by the reduction in secretion of MIF, IL-8 and IL-6. An increase in nitrite production in infected and treated cells was observed with the two extracts in different concentrations. In addition, reduced rates of apoptotic and necroptic cells were significant. Conclusion: There are active compounds in plant species that have antiviral and immunomodulatory capabilities. Therefore, were potential candidates for the development of a product for treatment of dengue. Supported by FIOCRUZ/RPT11D; IOC/PROEP; CNPq; FAPERJ; CAPES / 2017-01-27
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/13988 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Mello, Cíntia da Silva |
| Contributors | Monteiro, Carmen Penido, Arruda, Luciana Barros de, Pons, Andrea Henrique, Miranda, Iranaia Assunção, Neves, Patrícia Cristina, Kubelka, Claire Fernandes |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Restricted Acess, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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