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Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A gp63, metalopeptidase altamente abundante na superfície de Leishmania, contribui para uma infinidade de funções bem estabelecidas na interação deste parasito com o hospedeiro mamífero. No entanto, apesar desta molécula ser abundantemente expressa na superfície das formas promastigotas, encontradas no inseto vetor, pouco é conhecido sobre as funções desempenhadas por essa metalopeptidase no flebotomíneo. Nosso grupo de pesquisa, utilizando abordagens bioquímicas, tem demonstrado que moléculas de gp63 de vários tripanosomatídeos não patogênicos ao homem estão implicadas na adesão ao intestino de insetos hospedeiros. Aqui, nós analisamos o papel da gp63 na interação de Leishmania braziliensis e Leishmania infantum, com os seus respectivos insetos hospedeiros, Lutzomyia intermedia e Lu. longipalpis e com a linhagem celular derivada de Lu. longipalpis (LL5). Os intestinos dissecados de insetos foram prétratados ou não com o fosfoglicano (PG) puro derivado do lipofosfoglicano e colocados para interagir com os parasitos. Em paralelo, promastigotas de L. braziliensis e L. infantum foram pré-tratados com anticorpo anti-gp63 ou com inibidores da metalopeptidase. Depois disso, os parasitos foram colocados para interagir com os intestinos dissecados de insetos ou com as células LL5
Como esperado, o PG praticamente elimina a capacidade dos parasitos de se ligarem ao intestino dos insetos. Todos os tratamentos relacionados com a gp63 também provocaram uma diminuição acentuada nestes ensaios de ligação. Além disso, o sobrenadante de cultura de L. braziliensis foi concentrado por precipitação com sulfato de amônio e analisado por SDS-PAGE e SDS-PAGE-gelatina. Observamos uma degradação proteolítica, por volta de 63 kDa, que corresponde à enzima gp63 já identificada e caracterizada em várias espécies de Leishmania. Esses resultados em conjunto demonstram uma possível participação da gp63 na interação com o inseto vetor e nos estimulam a continuar estudando o papel dessa metalopeptidase no ciclo de vida de Leishmania / The highly abundant surface metallopeptidase of Leishmania, gp63, contributes to a
myriad of well-established functions in the interaction of this parasite with the
mammalian host. However, despite this molecule being abundantly expressed on the
surface of promastigote forms, found in the insect vector, little is known about the
functions performed by this metallopeptidase in the phlebotomine. Our research group,
using biochemical approaches, has demonstrated that gp63 molecules from several not
pathogenic trypanosomatids to man are implicated in the adhesion to guts of insect
hosts. Here, we analyzed the role of gp63 in the interaction of Leishmania braziliensis
and Leishmania infantum with their respective insect hosts, Lutzomyia intermedia and
Lu. longipalpis and with the cell line derived from Lu. longipalpis (LL5). The dissected
insect guts were pretreated or not with purified phosphoglycan (PG) derived from the
lipophosphoglycan and placed to bind with the parasites. In parallel, promastigotes of L.
braziliensis and L. infantum were pretreated with anti-gp63 antibodies or with
metallopeptidase inhibitors. Thereafter, the parasites were placed to interact with
dissected insect guts or with the LL5 cells. As expected, PG virtually eliminates
parasites ability of bind to the insect guts. All treatments related to gp63 also provoked
a pronounced decrease in these binding assays. Moreover, the culture supernatant of L.
braziliensis was concentrated by precipitation with ammonium sulfate and analyzed by
SDS-PAGE and SDS-PAGE-gelatin. We observed a proteolytic degradation around 63
kDa, which corresponds to the gp63 enzyme already identified and characterized in
several Leishmania species. These results together demonstrate a possible role of gp63
in the interaction with the insect vector and stimulate us to continue studying the role of
this metallopeptidase in the life cycle of Leishmania.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/14373 |
| Date | January 2013 |
| Creators | Altoé, Ellen Cristina Felix |
| Contributors | Brazil, Reginaldo Peçanha, Soares, Rodrigo Pedro Pinto, Bastos, Izabela Marques Dourado, Escobar, Patrícia Cuervo, Lima, Patrícia Fampa Negreiros, Levy, Claudia Masini d'Avila |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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