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Avaliação da acurácia e confiabilidade do teste sorológico de neutralização por redução de placas de lise (micro PRNT) na detecção de anticorpos para o vírus da Febre Amarela

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-12-10T13:43:12Z
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Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A febre amarela é causada pelo vírus protótipo do gênero Flavivirus e é transmitida ao
homem através da picada de mosquitos hematófagos infectados com o agente viral. A doença
permanece endêmica em regiões das florestas tropicais da África e América do Sul, apesar da
disponibilidade de vacinas eficazes contra o vírus da FA – 17D-204 e 17DD – consideradas
seguras e altamente imunogênicas, capazes de induzir uma rápida resposta imune específica,
com a formação de anticorpos neutralizantes que aparecem precocemente, são protetores e de
longa duração. O teste de neutralização por redução de placas de lise (PRNT) é considerado o
teste mais sensível e mais específico para a detecção e quantificação dos anticorpos
neutralizantes, sendo o método de referência para a avaliação da resposta imune protetora
após a vacinação. Este estudo avaliou a confiabilidade e a acurácia do micro PRNT50
(aplicado em placas de 96 poços) tomando como referência o PRNT
50
(aplicado em placas de
6 poços) e comparou o desempenho do micro PRNT50
com o micro PRNT90
(redução de 50%
e 90% das placas de lise, respectivamente). Foram selecionados 200 soros de indivíduos
brasileiros que participaram de um estudo clínico de dose-resposta da vacina 17DD produzida
em Bio-Manguinhos. A repetibilidade foi aferida a partir de três repetições independentes do
teste para cada um dos 200 soros por uma dupla operadora e o mesmo procedimento foi
realizado pelas outras duas duplas operadoras, com a finalidade de determinar a
reprodutibilidade do micro PRNT50
. Foram determinados o Coeficiente de Correlação
Intraclasse (CCI) e o Coeficiente de Correlação de Pearson. As medidas de acurácia
determinadas neste estudo foram sensibilidade, especificidade, acurácia global, prevalência e
valores preditivos positivo (VPP) e negativo (VPN). A curva ROC também foi utilizada para
determinar o melhor ponto de corte do micro PRNT50
. Na avaliação da repetibilidade, os CCIs
das duplas operadoras variaram entre 0,62 e 0,76; e os coeficientes de correlação de Pearson
apresentaram-se entre 0,62 e 0,78. Para a reprodutibilidade, o CCI obtido foi de 0,72 e os
coeficientes de correlação de Pearson variaram entre 0,70 e 0,76. As melhores medidas de
acurácia foram alcançadas considerando o ponto de corte para o micro PRNT50
de 2,9 Log
10
mUI/mL, o qual apresentou sensibilidade de 91,1%, especificidade de 72,9% e acurácia
global de 78%. O melhor desempenho do micro PRNT50
com este ponto de corte foi
ratificado pela análise da curva ROC. Considerando um cenário hipotético de surto de FA, a
prevalência seria de 28%, com VPP de 56,7% e VPN de 95,5%. O micro PRNT50
apresentou
níveis satisfatórios de confiabilidade e de acurácia, mas o micro PRNT90 mostrou desempenho
superior com sensibilidade de 100%, especificidade de 94,7% e acurácia global de 95%.
Modificações na metodologia do teste e alterações nos critérios de classificação nas leituras
dos resultados obtidos serão importantes para melhorar a acurácia do micro PRNT. / Yellow fever is caused by the prototype virus of the genus Flavivirus and it is transmitted to
humans through the bite of bloodsucking mosquitoes infected with the viral agent. The
disease remains endemic in tropical forest regions from Africa and South America, despite the
availability of effective vaccines against yellow fever virus - 17D-204 and 17DD - considered
safe and highly immunogenic, capable of inducing a rapid specific immune response, with the
formation of neutralizing antibodies that appear early, are protective and long lasting. The
plaque reduction neutralization test (PRNT) is considered the most sensitive and most specific
test for detection and quantification of neutralizing antibodies, and the reference method for
assessing the protective immune response after vaccination. This study evaluated the
reliability and accuracy of micro PRNT50 (applied in 96-well plates) with reference to the
PRNT50 (applied in 6-well plates) and compared the performance of the micro PRNT50 with
the micro PRNT90. Two-hundred serum samples from Brazilian individuals who participated
in a clinical study of dose-response of 17DD vaccine produced in Bio-Manguinhos were
selected. The repeatability was measured from three independent repetitions of the test for
each of the 200 sera by a dual operator and the same procedure was performed by the other
two dual operators, in order to determine the reproducibility of the micro PRNT50. The
intraclass correlation coefficient (ICC) and Pearson correlation coefficient were determined.
Accuracy measures determined in this study were sensitivity, specificity, overall accuracy,
prevalence and positive predictive values (PPV) and negative (NPV). The ROC curve was
also used to determine the best cut-off point of micro PRNT50
. In the assessment of
repeatability, ICCs for dual operators ranged from 0.62 to 0.76, and Pearson correlation
coefficients were between 0.62 and 0.78. For reproducibility, the ICC obtained was 0.72 and
the Pearson correlation coefficients ranged between 0.70 and 0.76. The best measures of
accuracy were achieved considering the cut-off point for the micro PRNT50 of 2.9 log10
mIU/mL, which had a sensitivity of 91.1%, specificity of 72.9% and overall accuracy of 78%.
The best performance of micro PRNT50
with this cut-off point was ratified by the ROC curve
analysis. Considering a hypothetical scenario of an outbreak of YF, the prevalence would be
28%, with PPV of 56.7% and NPV of 95.5%. The micro PRNT50
showed satisfactory levels
of reliability and accuracy, however the micro PRNT90 showed higher performance with
sensitivity of 100%, specificity of 94.7% and overall accuracy of 95%. Modifications in the
test methodology and changes in the classification criteria in the readings of the results
obtained will be important to improve the accuracy of micro PRNT.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/5947
Date January 2011
CreatorsSimões, Marisol
ContributorsBorges, Maria Beatriz Junqueira, Nogueira, Rita Maria Ribeiro, Ferreira, Davis Fernandes, Freire, Marcos da Silva, Camacho, Luiz Antônio Bastos
PublisherInstituto de Tecnologia em Imunobiológicos
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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