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Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A galectina-3 (Gal-3), lec ctina solúvel ligante de ß-galactosídeos, é encontrada em
diferentes compartimentos celulares, modulando diversos processos b biológicos, como
proliferação e apoptose. No timo, órgão linfoide central onde aas células T se
diferenciam, está presente e no córtex e na medula. Interage com gglicoproteínas de
superfície celular e compponentes da matriz extracelular (ECM), influenciando a
migração de timócitos, fu undamental para sua diferenciação, com ppropriedades de-
adesivas. Em estudos pr révios, notamos uma acentuada diminuiçãão da massa e
celularidade do timo de e animais deficientes para o gene da GGal-3 (Gal-3-/-).
Considerando a capacidade e da Gal-3 em modular processos biológicos que podem estar
envolvidos neste fenômen no, tivemos por objetivo avaliar fatores en nvolvidos com o
processo de atrofia tímica oobservado na ausência de Gal-3. Primeirame ente, verificamos
a possibilidade da Gal-3 modular a expressão dos genes StAR e CYP11A1, que
codificam proteínas envollvidas na síntese de glicorticoides, hormôn nios capazes de
causar atrofia tímica. Obsservamos aumento da expressão de StAR nna adrenal e de
ambos os genes no timo do os animais Gal-3-/-, correlacionando com os m maiores níveis de
corticosterona no soro e n no timo desses animais. Por citometria de fl luxo, analisamos
possíveis alterações nas ssubpopulações de timócitos e não observa amos diferenças
significativas nas porcentag gens de subpopulações de células definidas p pelos marcadores
CD4 e CD8. Porém, ao analisarmos o subgrupo de células duplo--negativas (DN),
demonstramos um aumen nto de timócitos DN1 e diminuição de DNN3, isolados de
animais Gal-3-/-. Em núme eros absolutos observamos uma diminuição ssignificativa dos
timócitos em todas as subp populações analisadas. Na análise das taxas d de morte celular,
através da marcação por a anexina V, apesar de não haver diferença s significativa nos
timócitos totais, houve aum mento de morte nos timócitos duplo-positivos (DP) de animais
Gal-3-/-. Por outro lado, nna análise de proliferação espontânea por iincorporação de
bromodeoxiuridina, observ vamos diminuição de proliferação nos timóci itos totais, sendo
significativa nas células D DN, DP e simples-positivas (SP)CD4. A aná álise morfológica
do timo de animais Gal-33-/-mostrou manutenção das regiões cortica ais e medulares,
porém, observamos a preseença de estruturas semelhantes a corpúsculo os de Hassall na
medula. Além disso, análiise por imunofluorescência revelou desorga anização da rede
epitelial tímica desses anim mais, com detecção de extensas áreas sem c células epiteliais.
Ao analisarmos a celularid dade de outros órgãos linfoides, observamoss diminuição no
número de células totais da a medula óssea, baço e linfonodos mesentéric cos, mas não nos
linfonodos subcutâneos. Em m conjunto, nossos dados sugerem que a Gal--3 contribui para
a manutenção da homeosta ase do timo, modulando a diferenciação, prol liferação e morte
de timócitos. / Galectin-3 (Gal-3), a sol b-galactoside-binding lectin, is fou nd at different
luble usubcellular compartments s, modulating various biological proce esses, such as
proliferation and apoptosis . In the thymus, the central lymphoid organ in which T cells
differentiate, this lectin is ffound in the cortex and in the medulla. Gal--3 interacts with
glycoproteins on the cell surface and in extracellular matrix compponents (ECM),
influencing thymocyte mig gration, which is fundamental for their diffeerentiation, with
de-adhesive properties. In p previous studies, we noted a serious decrease i in thymus weight
and cellularity in Gal-3 defficient mice (Gal-3-/-). Considering Gal-3 abiility to modulate
biological processes that ma ay be involved in this phenomenon, the aim off this project was
to evaluate factors involved d in the process of thymic atrophy observed i in the absence of
Gal-3. We first verified a p possible modulation in the expression of StAR R and CYP11A1
genes, which encode proteinns involved in the synthesis of glucocorticoid ds, hormones that
can cause thymic atrophy, bby Gal-3. We observed an increase in the exp pression of StAR
in the adrenal and of both h genes in the thymus of Gal-3-/-mice, corr relating with the
increased levels of corticost terone in the serum and thymus of these animaals. We analyzed
by flow cytometry possiblle alterations in thymocyte subpopulations and we did not
observe significant differen nces in the percentages of cell subsets defin ned by CD4 and
CD8. However, the analysiis of double-negative (DN) cells showed an iincrease of DN1
and a decrease in DN3 thym mocytes isolated from Gal-3-/-animals. In abso olute numbers we
observed a significant decre ease in all thymocyte subpopulations analyzedd. In the analysis
of cell death ratio by annexiin V labeling, although no significant differen nces were seen in
total thymocytes, there wa as an increase in double-positive (DP) thym mocyte death in
Gal-3-/-animals. On the other hand, the spontaneous proliferatioon analysis by
bromodeoxyuridin incorpor ration showed a decrease in proliferation of t total thymocytes,
being statistically signific cant in DN, DP and simple-positive (SP) )CD4 cells. The
morphological analysis of tthe thymus of Gal-3-/-mice showed well defiined cortical and
medullary regions, but we o observed the presence of structures similar to Hassall’s bodies
in the medulla. Moreoverr, immunofluorescence analysis showed evvident epithelial
network disorganization wi ith extensive TEC-free areas. We also analyzeed the cellularity
of other lymphoid organs a and observed a decrease in the number of tot tal bone marrow,
spleen and mesenteric lym mph node cells but not in subcutaneous lymp ph nodes. Taken
together, our data sugges st that Gal-3 contributes to the maintena ance of thymus
homeostasis, modulating thymocyte differentiation, proliferation aand cell death.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/6987 |
| Date | January 2012 |
| Creators | Abreu, Ednéa Oliveira de. |
| Contributors | Nogueira, Ana Cristina Martins de Almeida, Morrot, Alexandre, Chammas, Roger, Almeida, Vinícius Cotta de, Santana, Eliane Côrrea de, Verde, Déa Maria Serra Villa |
| Publisher | Instituto Oswaldo Cruz |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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