HOLANDA, Maisa Viana de. Detecção e quantificação de mycobacterium leprae pela técnica de pcr em tempo real em amostras ambientais de municípios do Ceará. 2015. 87 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-16T15:29:40Z
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Previous issue date: 2015 / ABSTRACT
Leprosy is a chronic
granulomatous
infectious
disease
occasioning damage in
skin and
peripheral nerves, caused by
Mycobacterium leprae
, an
intr
a
cellular
agent unable to grown in
axenic culture media.
In 2012
,
232.857
new cases were detected, and
out
of these
33.303 (14,
30%)
were
detected only in Brazil. Ceará diagnosed 2,066 new cases only in 2012, with an
overall detection ratio of 24.0 / 100,000
i
nhabitants
. Transmission is related to
the
bacilli
eliminate
from MB patients
by
the upper respira
tory
route
and consequent contamination
the
air
.
The existence of clinical cases in which patients had no previous contact with leprosy
patients and also
the finding of cases
near water source
s suggests infection of humans by
environmental sources
.
C
urrently,
it is suggested
the possible influence of environmental
factors
and wild animals
in the transmission of leprosy as soil, water, vegetation and armadillos.
The environment
behave
as a kind of reservoir, allowing infectious bacilli remain
viable
af
ter
long perio
ds outside the body.
This study aims to detect and quantify
M. leprae
bacillus by
qPCR environmental water samples from Ceará municipalities
.
Five samples from each
one of
the
30
water reservoir were collected, being
a
total
of
149 samples.
Total DNA was extracted
by specific environmental samples kit according to the manufacturer's recommendations.
Subsequently, was performed the amplification of
M. leprae
16S rRNA
gene by qPCR using
the SYBR Green PCR Master Mix kit.
We used a standard curv
e with known concentrations of
pIDTBlue 16SrRNAMlep
plasmid
to quantify the DNA present in environmental samples.
Environmental samples of Juazeiro do Norte municipality and clinical samples from patients
treated at CDREM were genotyped and subtyped by
PCR
-
RFLP.
M. leprae
’s
DNA was
detected in all the districts studied.
Out of
the
total of
149
w
ater samples analyzed, 81 (54.4
%)
were positive for the detection of DNA. The number of copies of
M. leprae
was in the range of
1,42
x 10
-
1
to 1,44
x 10
+ 2
. Most
clinical samples presented genotype 4 (64%) whereas 100% of
Juazeiro samples were SNP 4.
T
he SNP 4
-
N
was the most
present
both
among the
clinical l and
environmental
samples.
This study indicates the presence of
M. leprae
DNA in samples of
en
vironmental wate
r, essentially
demonstrates
the presence of bacilli
in the water analyzed
.
Thus, further studies are needed in order to
enhance
knowledge of the influence of
the
water in
the transmission of leprosy. / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica e granulomatosa responsável por afetar a pele e os nervos periféricos, sendo ocasionada pelo Mycobacterium leprae, um agente intracelular obrigatório incapaz de ser cultivado em meios de cultura axênicos. No ano de 2012, foram detectados 232.857 casos novos no mundo, sendo desses 33.303 (14, 30%) detectados somente no Brasil. O Estado do Ceará diagnosticou 2.066 casos novos só no ano de 2012, com um coeficiente detecção geral de 24,0/100.000 habitantes. A transmissão da doença está relacionada com eliminação dos bacilos provenientes de pacientes multibacilares através do trato respiratório superior e, como a bactéria fica em suspensão no ar, ocorre a posterior contaminação de outra pessoa. A existência de casos clínicos da doença nos quais os pacientes não tiveram nenhum contato anterior com portadores de hanseníase e, ainda, áreas com casos próximos de fontes de água sugere infecção do ser humano com fontes ambientais. Por isso, atualmente, pesquisa-se a possível interferência de fatores ambientais e animais silvestres na transmissão da hanseníase, como solo, água, vegetação e tatus. O ambiente funcionaria como uma espécie de reservatório, permitindo que o bacilo permaneça infeccioso após longos períodos fora do corpo humano. Este estudo tem como objetivo principal detectar e quantificar bacilos de M. leprae por qPCR em amostras de águas ambientais provenientes de municípios cearenses. Foram coletadas cinco réplicas de cada um dos 30 reservatórios selecionados, totalizando 149 amostras. O DNA total foi extraído através de kit específico para amostras ambientais de acordo com as recomendações do fabricante. Posteriormente, foi realizado a amplificação do gene 16S rRNA de M. leprae através de qPCR com o uso do kit SYBR Green PCR Master Mix. Utilizou-se uma curva padrão com concentrações conhecidas de plasmídeo pIDTBlue 16SrRNAMlep para quantificar o DNA presente nas amostras ambientais. As amostras ambientais do município de Juazeiro do Norte e as amostras clínicas provenientes de pacientes atendidos no CDREM foram genotipadas e subtipadas por PCR-RFLP. O DNA de M. leprae foi detectado em todos os municípios estudados. Do total de 149 amostras de água analisadas, 81 (54,4%) foram positivas para a pesquisa de DNA. O número de cópias de M. leprae se manteve no intervalo de 1,42 x 10-1 a 1,44 x 10+2 . A maioria das amostras clínicas apresentou genótipo 4 (64%) enquanto que 100% das amostras de Juazeiro do Norte foram SNP 4. Com relação a subtipagem, o SNP 4-N foi o mais presente dentre as amostras analisadas. Este estudo indica a existência de DNA de M. leprae nas amostras de águas ambientais, mostrando fundamentalmente a presença de bacilos nas águas analisadas. Também relata que a maioria das cepas de M. leprae das fontes ambientais estudadas é do mesmo subtipo das isoladas do homem. Dessa forma, são necessários mais estudos a fim de ampliar o conhecimento da influência da água na transmissão da hanseníase.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/13593 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Holanda, Maisa Viana de |
| Contributors | Frota, Cristiane Cunha |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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