GONDIM, D. R. Quitosana/Alginato epoxilado com corantes imobilizados como potencial fase estacionária para purificação de IgG do soro humano. 2012. 100 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia Química) - Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2013-06-12T17:31:11Z
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Previous issue date: 2012-07-27 / As imunoglobulinas são proteínas do soro humano que despertam maior interesse em sua utilização devido às inúmeras funções diagnósticas e terapêuticas. Pesquisas nessa área contemplam assuntos de âmbito técnico científico, beneficiando setores carentes no nosso país no quesito da saúde humana. Nesse contexto, o presente trabalho teve por finalidade avaliar o potencial da matriz quitosana/alginato epoxilado (QAE) com corantes reativos imobilizados, na purificação de IgG humana utilizando a técnica por cromatografia de afinidade. Os corantes Cibacron Blue F3GA, Reativo Verde 5 (Procion HE-4G) e o Reativo Azul 4 (Procion Blue MX-R) foram imobilizados nas partículas de quitosana/alginato epoxilada e não foi observado desprendimentos desses corantes nos ensaios cromatográficos. A matriz de QAE com e sem corantes imobilizados foram caracterizados por Espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR) visando verificar os grupos específicos dos corantes na superfície da matriz. Foi investigado a influência do tipo de tampão e pH na adsorção de IgG de alta pureza. Os materiais apresentaram elevada capacidade de adsorção para diferentes sistemas tamponantes: MOPS (ácido morfolinopropanosulfônico), HEPES (ácido N-2-hidroxietilpiperazino-N’-2-etanosulfônico), MES (4 – ácido morfolinoetanosulfônico) e FS (Fosfato de Sódio). As isotermas de adsorção foram obtidas em sistemas em batelada e os dados experimentais foram bem correlacionados pelos modelos de Langmuir e Langmuir-Freundlich. O adsorvente quitosana/alginato epoxilado com corante Reativo Azul 4 imobilizado apresentou quantidade máxima de adsorção de IgG superior a 180 mg/g, superando os outros materiais. Os três adsorventes apresentaram constantes de dissociação (KD e KDLF) entre 10-5 e 10-6 mol/L. Os ensaios cromatográficos foram realizados com IgG de alta pureza e soro humano diluído 10 vezes e realizaram-se balanços de massas, análises de eletroforeses e quantificação de proteínas totais pelo método de Bradford. Nos ensaios em leito fixo com soro humano necessitou-se de 15,0 mL de soro diluído para a saturação do leito e as amostras coletadas das frações cromatográficas indicaram a purificação de IgG do soro humano através da eletroforese. Entre os três ligantes pseudobiespecíficos (corantes) estudados no presente trabalho, o corante Cibacron Blue F3GA apresentou maior potencial para purificar IgG do soro humano em todos os três tampões analisados, devido a maior seletividade deste por IgG comparado aos demais corantes imobilizados. / As imunoglobulinas são proteínas do soro humano que despertam maior interesse em sua utilização devido às inúmeras funções diagnósticas e terapêuticas. Pesquisas nessa área contemplam assuntos de âmbito técnico científico, beneficiando setores carentes no nosso país no quesito da saúde humana. Nesse contexto, o presente trabalho teve por finalidade avaliar o potencial da matriz quitosana/alginato epoxilado (QAE) com corantes reativos imobilizados, na purificação de IgG humana utilizando a técnica por cromatografia de afinidade. Os corantes Cibacron Blue F3GA, Reativo Verde 5 (Procion HE-4G) e o Reativo Azul 4 (Procion Blue MX-R) foram imobilizados nas partículas de quitosana/alginato epoxilada e não foi observado desprendimentos desses corantes nos ensaios cromatográficos. A matriz de QAE com e sem corantes imobilizados foram caracterizados por Espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR) visando verificar os grupos específicos dos corantes na superfície da matriz. Foi investigado a influência do tipo de tampão e pH na adsorção de IgG de alta pureza. Os materiais apresentaram elevada capacidade de adsorção para diferentes sistemas tamponantes: MOPS (ácido morfolinopropanosulfônico), HEPES (ácido N-2-hidroxietilpiperazino-N’-2-etanosulfônico), MES (4 – ácido morfolinoetanosulfônico) e FS (Fosfato de Sódio). As isotermas de adsorção foram obtidas em sistemas em batelada e os dados experimentais foram bem correlacionados pelos modelos de Langmuir e Langmuir-Freundlich. O adsorvente quitosana/alginato epoxilado com corante Reativo Azul 4 imobilizado apresentou quantidade máxima de adsorção de IgG superior a 180 mg/g, superando os outros materiais. Os três adsorventes apresentaram constantes de dissociação (KD e KDLF) entre 10-5 e 10-6 mol/L. Os ensaios cromatográficos foram realizados com IgG de alta pureza e soro humano diluído 10 vezes e realizaram-se balanços de massas, análises de eletroforeses e quantificação de proteínas totais pelo método de Bradford. Nos ensaios em leito fixo com soro humano necessitou-se de 15,0 mL de soro diluído para a saturação do leito e as amostras coletadas das frações cromatográficas indicaram a purificação de IgG do soro humano através da eletroforese. Entre os três ligantes pseudobiespecíficos (corantes) estudados no presente trabalho, o corante Cibacron Blue F3GA apresentou maior potencial para purificar IgG do soro humano em todos os três tampões analisados, devido a maior seletividade deste por IgG comparado aos demais corantes imobilizados.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/5046 |
| Date | 27 July 2012 |
| Creators | Gondim, Diego Romão |
| Contributors | Adriano, Wellington Sabino, Silva Junior, Ivanildo José da |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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